5-HT受体亚型在大鼠颌下腺的免疫组织化学定位及5-HT的功能研究

目的 研究探讨了大鼠颌下腺中 5 羟色胺受体亚型的分布以及 5 HT功能。方法 免疫组织化学法和免疫酶联检测法。结果 大鼠颌下腺的浆液性腺泡上皮细胞、闰管、颗粒曲管、纹状管和排泄管的管壁上皮细胞均呈 5 HT1AR和 5 HT3 R免疫反应阳性 ,阳性物质位于胞质中 ,胞核为阴性。ELISA结果显示 ,在一定浓度范围内 ,外源 5 HT能刺激离体培养的颌下腺分泌神经生长因子 (NGF) ,但是 ,当外源 5 HT浓度大于 10 7时却抑制NGF的分泌。结论 提示 5 HT对颌下腺NGF的分泌可能起双向调节的作用。

5-羟色胺受体和P物质受体在培养的人胎盘滋养层细胞的定位研究

目的 :探讨培养的人胎盘绒毛滋养层细胞是否存在 5 羟色胺受体 (5 HTR)和P物质受体 (SPR)。方法 :采用细胞培养法和免疫细胞化学技术。结果 :培养的滋养层细胞为 5 HTR与SPR免疫阳性反应 ,免疫阳性物质位于胞浆内 ,胞核为阴性。结论 :人胎盘滋养层细胞自身含有 5 HTR和SPR ,为在离体培养条件下研究 5 HT和SP对胎盘激素的合成与分泌的调控作用提供了形态学依据。

大鼠下丘脑室旁核和视上核内神经激肽B受体和加压素的共存研究

目的研究神经激肽Ｂ受体（ＮＫ３受体）免疫反应产物在大鼠下丘脑室旁核和视上核的分布及其与加压素的共存。方法免疫组织化学染色，标本在光镜和电镜下观察。共存研究采用相邻切片染色法。结果致密的ＮＫ３受体阳性产物分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部。免疫电镜观察发现ＮＫ３受体阳性反应产物出现于室旁核和视上核的胞体和树突内。在相邻切片上观察到室旁核和视上核内有相当数量的ＮＫ３受体阳性神经元，同时含有加压素，它们主要分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部。结论根据本研究和以往的机能学的研究结果，推测下丘脑室旁核和视上核内的ＮＫ３受体阳性神经元可能参与调控机体内环境改变时下丘脑加压素的释放。

高渗刺激诱导大鼠下丘脑室旁核和视上核神经激肽B受体阳性神经元表达Fos

目的研究神经激肽Ｂ受体（ＮＫ３受体）与机体渗透压调节之间的可能关系。方法用双重免疫组织化学染色技术，高渗刺激采用静脉内注射１．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的方法，观察了下丘脑室旁核和视上核内ＮＫ３受体阳性神经元在高渗刺激下的Ｆｏｓ表达情况。结果高渗盐水可诱导下丘脑室旁核和视上核内大量神经元表达Ｆｏｓ。在室旁核，双标细胞约占ＮＫ３受体阳性神经元的８８％，约占Ｆｏｓ阳性细胞的７１％；在视上核的主部，双标细胞约占ＮＫ３受体阳性神经元的７４％，约占Ｆｏｓ阳性细胞的４３％。结论室旁核和视上核内ＮＫ３受体阳性神经元可能参与大鼠渗透压调节过程。

神经激肽B受体在猫三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓内的分布

目的了解神经激肽Ｂ受体（ＮＫ３受体）与伤害性信息的传递和调制的可能关系，调查ＮＫ３受体在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布状况。方法免疫组织化学技术。结果ＮＫ３受体样免疫反应产物在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布基本一致。致密的免疫反应产物分布于Ⅱ内层（ｉｎｎｅｒｐａｒｔ），而Ⅰ层和Ⅱ外层（ｏｕｔｅｒｐａｒｔ）染色浅淡。ＮＫ３受体阳性神经元胞体主要见于三叉神经尾侧亚核和脊髓的Ⅰ层和Ⅱ层，少量分布于脊髓后角深层。

卵泡刺激素及其受体在大鼠胰腺的共定位观察

目的观察卵泡刺激素(FSH)及其受体(FSHR)在大鼠胰腺中的共存关系,以了解FSH对胰腺的功能意义。方法应用免疫荧光组织化学双标记染色技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察染色结果。结果部分外分泌腺细胞、导管上皮细胞及部分胰岛细胞呈FSH反应阳性,呈强绿色荧光。小血管内皮细胞也呈FSH反应弱阳性,呈弱的绿色荧光。部分胰岛细胞呈FSHR反应阳性,呈强红色荧光。一些外分泌腺上皮细胞呈FSHR反应弱阳性,呈淡红色荧光。有一些胰岛细胞呈FSH和FSHR双阳性反应,呈黄色荧光或红、绿相间荧光。结论FSH及其受体均存在于大鼠胰腺中,胰岛中的部分细胞共同存在FSH及其受体,FSH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用。

卵泡刺激素受体在大鼠下颌下腺及胃的定位和分布研究

目的研究卵泡刺激素受体(FSHR)在大鼠下颌下腺和胃的定位、分布。方法采用免疫组织化学ABC法。结果大鼠下颌下腺浆液性腺上皮细胞,颗粒曲管及大于颗粒曲管的导管上皮细胞以及胃底腺壁细胞均呈FSHR免疫反应阳性,阳性物质主要位于细胞质内,细胞核呈阴性反应。结论大鼠下颌下腺、胃底腺壁细胞存在FSHR,卵泡刺激素可能通过FSHR的介导对上述两个器官功能进行调控。

PeroxiredoxinⅡ在小鼠早胚发育中的作用及机理

目的观察PeroxiredoxinⅡ对小鼠植入前胚发育的影响,并探讨其可能的机制。方法收集昆明种小鼠的1细胞胚,采用微滴培养法连续培养48h,观察不同浓度PeroxiredoxinⅡ抗体对植入前胚发育的影响,以胚胎发育到各期的比例为判断发育效果的标准。同时,应用共聚焦扫描显微镜术结合特异性荧光探针2′,7′二氯氢化荧光素双乙酸酯,检测小鼠胚中氧自由基水平。结果抗体添加组和未添加组的1细胞胚经24h培养后96%以上发育成2细胞胚,但经48h培养,抗体添加组的胚发育明显受抑,多数停滞于2细胞期。激光共聚焦成像的结果表明,PeroxiredoxinⅡ抗体添加组的2细胞胚内荧光强度明显增强。结论PeroxiredoxinⅡ抗体可引起2细胞胚发育阻滞,这可能与胚内的氧自由基水平升高有关,提示植入前胚内PeroxiredoxinⅡ可减少或消除细胞内氧自由基,促进植入前胚的发育。

PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MII卵和植入前胚的表达和定位

目的 观察PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位 ,为探讨PeroxiredoxinII在小鼠卵母细胞发育成熟和早期胚发育的作用提供依据。 方法 根据小鼠PeroxiredoxinIImRNA序列 (AccessionNo :BC0 0 2 0 34)设计引物 ,对小鼠生发泡完整卵细胞 (GV卵 )中的PeroxiredoxinII可能编码区进行扩增。同时 ,取生后 3d和 2月小鼠的卵巢 ,免疫细胞化学染色显示PeroxiredoxinII蛋白在卵泡中的分布。此外 ,运用RT PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinII在植入前胚的表达。 结果 从GV卵中扩增所得 6 84bp的cDNA序列 ,与小鼠PeroxiredoxinII具有 99%同源性 ;其推导的编码氨基酸序列与小鼠PeroxiredoxinII氨基酸序列完全相同。免疫细胞化学染色显示 :生后 3d小鼠卵巢内未见PeroxiredoxinII阳性反应 ;2月小鼠卵巢内阳性反应见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质。卵泡细胞未见PeroxiredoxinII阳性反应。RT PCR结果表明 :PeroxiredoxinIImRNA在GV卵中处高水平 ,从MII卵开始略有下降 ,在 4 细胞胚和早期囊胚期间未检到。免疫细胞化学染色显示 :GV卵、MII卵、1 细胞胚、2 细胞胚、4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈PeroxiredoxinII阳性反应。

人胎盘滋养层细胞雌激素α,β受体免疫细胞化学研究

目的:探讨雌激素-α,β型受体（estrogen recoptor α,β）在人胎盘滋养层细胞的表达和定位。方法:采用细胞培养结合免疫细胞化学ABC法。结果:人胎盘及培养的人胎盘绒毛合体、细胞滋养层细胞均呈雌激素α,β受体免疫反应性,雌激素受体免疫反应阳性物质定位于胞核内,细胞质为阴性。结论:人胎盘滋养层细胞存在雌激素α,β受体,这为研究雌激素对人胎盘滋养层细胞的功能调控提供了形态学依据。

卵泡刺激素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌影响的体外研究

目的研究卵泡刺激素(FSH)在体外对胰腺组织分泌胰岛素和胰高血糖素的影响。方法体外孵育大鼠胰腺组织并施加不同浓度FSH,应用酶联免疫分析(ELISA)方法检测上清液中胰岛素和胰高血糖素的含量。结果当FSH浓度小于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而减少;当FSH浓度大于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而增加。结论FSH在体外对胰岛素和胰高血糖素分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对胰腺内分泌具有调节功能。

GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)类似物阿拉瑞林 (alarelin)对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响。 方法 应用离体培养的SD大鼠胃平滑肌细胞 (gastricsmoothmusclecell,GSMC) ,采用四唑盐 (MTT)比色法实验 ,3H 胸腺嘧啶核苷酸 (3H TdR)参入、免疫荧光化学检测增殖细胞核抗原 (pro liferatingcellnuclearantigen ,PCNA)表达的平均荧光值和流式细胞仪技术 ,观察阿拉瑞林对GSMC的增殖、DNA合成和细胞周期的影响。 结果 当加入终浓度为 10 - 9、10 - 7、10 - 5mol L的阿拉瑞林 2 4h后 ,与未用药的对照组相比 ,发现其MTT吸光度 (A值 )逐渐降低 (P <0 0 5 ) ;PCNA表达的平均荧光值逐渐减弱 (P <0 0 5 ) ;GSMC的3H TdR参入量依次减少 (P <0 0 5 ) ,且药物浓度越大 ,此三者下降越明显。在细胞周期中 ,与对照组相比 ,G1 期细胞所占比例明显增加 (P <0 0 5 ) ;S期细胞所占比例明显减少 ,且随药物浓度的增加而逐渐减少 (P <0 0 5 )。 结论 GnRH类似物可明显抑制大鼠GSMC的增殖作用 。

卵泡刺激素在大鼠胰腺中的定位及其与促性腺激素释放激素受体共存关系

目的 :研究卵泡刺激素在大鼠胰腺中的分布及其与促性腺激素释放激素受体的共存关系。方法 :采用免疫组织化学法和邻片双标记方法。结果 :大鼠胰腺外分泌部腺泡内的部分腺细胞和胰岛中的部分内分泌细胞呈现FSH免疫阳性反应 ,阳性产物分布于胞质 ,胞核阴性。卵泡刺激素与促性腺激素释放激素受体在大鼠胰岛细胞中有重叠分布。结论 :大鼠胰腺外分泌部的腺泡细胞和胰岛的细胞能表达卵泡刺激素。卵泡刺激素和促性腺激素释放激素受体共存于大鼠胰岛细胞中。表达卵泡刺激素的胰岛细胞可能受促性腺激素释放激素调节。

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备及鉴定

目的： 制备抗解脲脲原体（Uu）的单克隆抗体（mAb）并进行鉴定.方法： 用灭活的Uu免疫BALB/c小鼠, 采用常规的细胞融合技术制备抗Uu的mAb.以ELISA和免疫组织化学染色法对mAb的亚类、效价及特异性进行鉴定.结果： 获得3株抗Uu的mAb, 均为IgG2b亚类.3株mAb的腹水ELISA效价为10-4～10-5.有2株只与Uu产生反应而不与肺炎支原体、淋球菌（gonococcus/GC）及豚鼠气单胞菌（A.cariae）等病原体发生交叉反应.免疫组化结果表明, mAb能和解脲脲原体特异性结合.结论： 制备了3株具有较高的特异性和效价的抗Uu mAb, 为Uu的免疫学检测及相关研究提供重要的制剂.

α-和β-CGRP及PPTA mRNAs在大鼠三叉神经节神经元中的共同表达

本文应用原位杂交组化方法研究了降钙素基因相关肽（CGRP）的。α－和β－两种亚型的mRNA及编码P物质（SP）的前原速激肽AmRNA（PPTAmRNA大鼠三叉神经节神经元中的表达状况。结果发现：大约有35．7％，22．3％和17．5％的三叉神经节神经元分别有α－CGRP，β－CGRP和PPTA－mRNTA表达。中、小型神经元含有上述三种肽的mRNAs，而大神经元则主要表达。α－CGRPmRNA，从而提示它们在感觉信息的传递过程中可能起着不同的作用。相邻切片法研究的结果发现：这三种肽的mRNAs可共同表达于一些中、小神经元中，提示SP和CGRP在功能上的密切关系。

Calbindin－D28k mRNA在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达

用原位杂交组织化学技术，用同位素标记的寡核苷酸探针，对Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋｍＲＮＡ在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达进行了观察．结果发现：在大鼠三叉神经节中，约１６．１％的神经元为ＣａｌｂｉｎｄｉｎＤ２８ｋ阳性神经元，而在背根神经节中，阳性神经元占节细胞总数的２０．６％．这两个神经节中的阳性神经元主要集中在大型细胞（８．１％和１２．３％）及小型细胞（４．２％和６．８％）．从而提示Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ可作为上述两种神经细胞的标志物，在此类初级传入神经元的某些生理功能中可能有重要作用．

卵泡刺激素注入胃腔对大鼠胃泌素分泌的影响

目的研究胃腔内卵泡刺激素(FSH)对大鼠胃泌素分泌的影响,为消化道产生的生殖内分泌激素是否有调节消化的功能提供实验依据。方法胃腔直接注射FSH以模拟外分泌产生的FSH,并以免疫组织化学、酶联免疫分析法(ELISA)检测卵泡刺激素刺激后,胃内胃泌素免疫反应阳性细胞的密度,血清和胃液中胃泌素的含量。结果胃腔内注射FSH后,大鼠胃窦壁内单位面积胃泌素免疫反应阳性细胞密度(16.65±2.63)比对照组(9.60±1.72)显著增加(P<0.01),胃液中胃泌素ELISA检测的A值(0.41±0.037)比对照组(0.28±0.046)显著增加(P<0.01);血液中胃泌素含量的A值(0.86±0.054)比对照组(0.62±0.070)显著增加(P<0.01)。结论外源的FSH对胃泌素的合成和释放均起明显的促进作用。

大鼠腰骶髓中间带外侧核向臂旁核的投射──BDA顺行追踪研究

为了解盆内脏器感觉信息的传递道路，用结合生物素的葡聚糖胺（ＢＤＡ）作为顺行追踪剂，研究了大鼠腰骶髓中间带外侧核向脑桥臂旁核的投射。将ＢＤＡ注射于中间带外侧核后，顺行标记的轴突终末出现于双侧的臂旁核，同侧略多。大量的ＢＤＡ标记的轴突终末出现于臂旁外侧核的外侧内核和外侧中央核，少量分布于外侧背核。此外，在臂旁内侧核的中段及ＫＦ核内也发现有少量标记终末。上述结果说明，大鼠腰骶髓中间带外侧核的神经元主要投射至臂旁外侧核外侧内核和外侧中央核。

GnRH受体和5-HT受体与更年期大鼠潮热的关系

目的 :研究促性腺激素释放激素 (GnRH)受体、5 羟色胺 ( 5 HT)受体和更年期潮热的关系 ,为诊治潮热提供思路。方法 :手术去卵巢后建立SD大鼠更年期潮热的动物模型 ,采用免疫组织化学邻片法、HE染色及图像分析等方法来检测大鼠垂体中 2种受体的表达。结果 :大鼠去卵巢后第 8w开始 ,实验组动物肛温明显高于对照组 ,垂体中实验组GnRH受体和 5 HT受体的表达 ,明显强于对照组。结论 :雌激素缺乏可引起类似于更年期潮热的体温升高 ;在潮热的发病机制中 ,GnRH和 5 HT可能通过其受体发挥重要作用。