应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的 建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法 用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果 该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( + )、HBeAg( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( + )、抗HBe( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论 该方法简单、灵敏、特异 。

荧光偏振检测血清中HBV多聚酶基因突变

目的 建立简便、多重HBV多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法。方法 采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。对HBV多聚酶基因进行PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3′可以在DNA聚合酶的作用下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP ,然后检测该 3′端带有荧光素的探针 ,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度判定待测点是何种核苷酸。结果 该方法可以检测出HBV多聚酶基因序列中特定位置的核苷酸类型 ,能检测 1× 1 0 1 个拷贝的模板量。对 30例经过 6个月以上拉米呋啶治疗的患者血清进行检测 ,检测出其中有 3例是甲硫氨酸 (M)密码子ATG中的A→G变异 ;2例是ATG中的G→C变异 ;1例是ATG中的G→T。

HBV DNA C区BCP双突变PCR-FP检测方法的建立及其临床应用

目的 :建立简便的 HBV DNA序列中 BCP双突变的检测方法。方法 :采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。首先对 HBVC区基因进行 PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3’端可以在 DNA聚合酶的催化下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的 d NTP,然后检测该3’端带有荧光素的探针 ,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸。结果 :该方法可以检测出 HBV基因序列中 BCP双突变核苷酸类型 ,可以检测 1个拷贝的模板 ,并且可以从 BCP野生型株 DNA序列中检出 5 % BCP双突变 DNA序列 ,对 76例 HBV DNA阳性患者进行检测 ,结果 HBV BCP基因双突变率为 5 3.9( 4 1 /76)。结论 :该技术可以对血清中 HBV DNA C区 BCP双突变。

荧光偏振检测HBV DNA C区BCP双突变

目的 :建立简便、灵敏的HBVDNA序列中BCP双突变点的检测方法 .方法 :采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测 .首先对HBVC区基因进行PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3′端可以在DNA聚合酶的催化下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP ,然后检测该 3′端带有荧光素的探针 ,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸 .结果 :该方法可以检测出HBV基因序列中BCP双突变核苷酸类型以及检测1个拷贝的模板 ,并且可以从BCP野性株DNA序列中检出5 %BCP双突变DNA序列 .结论

荧光偏振检测HBV DNA前C区nt1896位点突变

目的 建立简便的HBVDNA前C区nt1896位点突变的检测方法。方法 采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。首先对HBVDNA前C区基因进行PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3’端可以在DNA聚合酶的作用下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP ,然后检测该 3’端带有荧光素探针的偏振光值 ,根据检测得到的荧光素种类及其偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸。结果 该方法可以检测出HBV基因序列中nt1896的核苷酸类型 ,最低可检出的突变模板量为 1× 10 1拷贝。结论 该技术可以对血清中HBVDNA前C区nt1896位点突变以及其他基因突变进行检测。