玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.) Druce)凝集素的荧光淬灭研究

百合科植物玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)的根状茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose柱离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤,得到经SDS-PAGE检测为14.2kD的单一蛋白条带的玉竹凝集素(Polygonatum odoratumlectin,简称POL).荧光淬灭剂丙烯酰胺、KI和CsCl对POL的内源荧光淬灭研究表明它们对凝集素分子荧光的淬灭过程属动态淬灭机制.其中玉竹凝集素中Trp残基对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度达到81%,而阴离子淬灭剂I-、阳离子淬灭剂Cs+仅淬灭POL 50%和45%的荧光.表明玉竹凝集素产生荧光的氨基酸残基大部分是位于分子表面和近表面带电荷的沟槽内,并且Trp残基周围有大约等量的正、负电荷分布.

红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质

石蒜科植物红花石蒜(Lycoris radiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L.radiata agglutinin,LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,Sephacryl S-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0.95μg/mL和1.9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低Ⅱ型人类单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50)=5～10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性.

荧光淬灭作用研究黄精凝集素Ⅱ微环境与构象的关系

淬灭剂CsCl、KI、丙烯酰胺对黄精凝集素Ⅱ(Polygonatum cyrtonemaHua.LectinⅡ,PCLⅡ)内源荧光淬灭研究表明它们对凝集素分子的淬灭属动态淬灭机制.综合3种淬灭剂对黄精凝集素Ⅱ的淬灭效果,黄精凝集素Ⅱ中Tyr和Trp对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度分别达到88.5%和74.07%,而对阴离子淬灭剂KI为55.5%和66.7%,对阳离子淬灭剂CsCl均只有25%.表明黄精凝集素Ⅱ发射荧光的氨基酸残基大部分是位于分子表面疏水袋中,少部分埋藏于分子内部疏水环境中,且所有发荧光氨基酸所处微环境带正电荷的比例比带负电荷的比例大近一倍.

一种新的甘露糖结合凝集素——朱顶兰凝集素基因的克隆及序列分析

运用同源克隆的方法设计简并引物，通过3’和5’RACE技术，从石蒜科植物朱顶兰(Amaryllis vittata Ait)总RNA中克隆了编码此凝集素(AVA)的全长cDNA序列。该基因全长686bp，起始密码子位于第41～43bp，终止密码子位于515～517 bp处，开放阅渎框长474bp，编码158个氨基酸，包含信号肽序列、成熟蛋白序列和C-末端剪切序列的前体蛋白。成熟蛋白由109个氨基酸残基组成，分子量为11．9kD。成熟蛋白在氨基酸水平上与雪花莲凝集素、水仙凝集素、石蒜凝集素和君子兰凝集素分别有73．4％、85.3％、80．7％和83．5％的同源性；朱顶兰凝集素的分子模式显示其与雪花莲凝集素有极其相似的三维结构；在Blocks数据库中检索AVA蛋白氨基酸序列的结构域，发现有3个凝集素功能结构域，并具有3个典型的甘露糖专一结合位点盒(QDNY)。

水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究

水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.