高压氧预处理可对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究短期高压氧预处理后是否可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。方法选取成年雄性Wister大鼠,采用连续5d,每天1次,3.0ATA,100%O2高压氧(HBO)预处理,每次60min,末次预处理后24h,运用改良的经典线栓法制作MCAO模型,再灌注2h。将实验大鼠分为假手术组、MCAO组、HBO+MCAO组(n=5)。造模后24h观察各组动物的一般精神状态及体重变化情况、用Rogers DC and Hunter AJ描述的神经功能7分评分法对神经功能损伤进行评估,TTC染色测梗死面积,并对脑组织进行石蜡切片,行Nissl、TUNEL染色,利用显微镜对神经细胞进行计数。结果假手术组无神经功能缺失,TTC染色未见梗死灶,镜下观察未见坏死细胞。MCAO组和HBO+MCAO组均有不同程度的神经功能缺损,且HBO+MCAO组神经功能缺失较MCAO组轻;TTC染色MCAO组的梗死面积明显大于HBO+MCAO组;镜下观察,MCAO组梗死区内尼氏小体明显少于HBO+MCAO组。结论短期高压氧预处理后可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。

HCT116-p53^(-/-)细胞中p53基因突变子模型的建立

目的:合成p53基因突变子及构建真核表达载体,并在HCT116-p53-/-细胞中建立248W和273H突变子表达模型,为研究p53突变子在肿瘤发生中的作用及通过封闭p53突变子的方法进行肿瘤基因治疗提供实验基础。方法:以野生型p53基因为模板,采用引物重叠PCR定点突变技术,合成p53基因248W和273H突变子,并利用基因重组技术构建出表达载体,用脂质体转染法建立模型,Western blotting检测p53突变子蛋白。结果:经基因测序后证实第248位密码子由精氨酸(CGG)突变为色氨酸(TGG),第273位密码子由精氨酸(CGT)突变为组氨酸(CAT),说明成功合成p53突变子,构建的表达载体转染HCT116细胞后,经Western blotting检测,以特异表达条带与内参GAPDH的比值做为相对值进行半定量比较,特异蛋白表达显著升高,证实模型建立成功。结论:通过引物重叠PCR定点突变技术成功构建p53基因248W和273H突变子,并在HCT116细胞中成功表达。

P53在电离辐射诱导的细胞周期解耦联中的作用

目的探讨p53基因在电离辐射（IR）诱导的MCF-7细胞周期解耦联中的作用。方法构建RNAi表达载体，经磷酸钙共沉淀法转染293T细胞形成病毒包装颗粒，感染MCF-7后采用Western blot检测P53蛋白的表达，建立p53基因沉默模型。将p53野生型（＋／＋）和沉默模型（-／-）经电离辐射处理后，采用流式细胞术分别测定细胞周期并分析细胞多倍体的变化。结果与p53^＋/＋组比较，p53^-/-模型组G0/G1期细胞百分数减少，S期、G2期增加（P〈0．01），倍体分析表明二倍体数减少，四倍体、八倍体均增加（P〈0．01）。在p53^＋/＋和p53^-/-细胞中，与假照射组比较，4Gy照射后G0／G1期、S期细胞百分数减少，而G2期增多（P〈0．01）；倍体分析表明，照射后二倍体数减少，四倍体、八倍体均增加（P〈0．01）。与p53^＋/＋IR组比较，p53^-/-＋IR组发生G0／G1期、S期细胞百分数减少，G2＋M期增多（P〈0．01），二倍体数减少，四倍体增多（P〈0．01），八倍体无明显差别。结论电离辐射可以诱导细胞发生G2期阻滞和细胞周期解耦联；P53在电离辐射诱导的MCF-7细胞G2期阻滞中发挥作用，而在细胞周期解耦联中可能不发挥作用。