自体造血干细胞移植对系统性红斑狼疮患者免疫功能的影响

为探讨自体造血干细胞移植对系统性红斑狼疮 (SLE)患者免疫学指标的影响并评估其治疗效果 ,应用流式细胞术、酶联免疫吸附试验等方法动态监测 33例SLE患者移植前及移植后 1,3,6 ,12个月时白细胞分化抗原 ,sIL 2R ,IL 6 ,C3,C4 ,自身抗体 ,免疫球蛋白等免疫学指标变化。结果显示 :移植后CD4 + ,CD19+ 细胞持续减低 ,CD8+ ,CD16 + CD5 6 + 细胞持续回升 ;sIL 2R ,IL 6明显下降 ,C3,C4显著回升 ,自身抗体阳性率显著下降 ;移植后 2 6例完全缓解 ,3例部分缓解 ,4例移植后 4 - 6个月复发。结论 :SLE患者自体造血干细胞移植后免疫学指标发生显著改变 ,这些结果可作为判断SLE不同缓解状态的免疫学预测指标。

非清髓性供者造血干细胞移植对肾移植受者免疫功能的影响

目的:探讨肾移植受者进行非清髓性供者造血干细胞移植诱导免疫耐受、降低排斥反应的有效性、安全性。方法:根据ABO/Rh血型相同及HLA氨基酸残基配型相容原则,将同期等待肾移植的96例女性慢性肾功能衰竭患者随机分为观察组和对照组,各48例。观察组接受同一供体的骨髓-肾联合移植;对照组接受上述供体的肾移植。应用流式细胞术检测外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4+CD25+细胞百分比,应用酶联免疫吸附法检测IL-10、TNF-α浓度。结果:移植后随着时间延长,观察组CD3+、CD4+、CD19+细胞百分比及TNF-α浓度持续降低,与对照组相比,60 d后CD3+、CD4+、CD19+下降最明显(P<0.05),之后稳定在一个水平;观察组CD8+降低不明显,但CD4+/CD8+比值明显降低;观察组CD4+CD25+百分比及IL-10浓度持续升高,与对照组相比,CD4+CD25+百分比90 d时升高最明显(P<0.05),IL-10浓度30 d时升高最为明显(P<0.05)。观察组急性排斥发生率为12%,对照组为29%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:供体特异性造血干细胞移植是一种安全、有效地诱导肾移植免疫耐受的临床治疗方法,能够降低排斥反应的发生,但更深层次的免疫机制有待进一步探讨。

SSOP基因分型对HLA-AB血清学纯合型结果的校证

目的 建立快速、准确的人类白细胞抗原 (HLA)基因分型技术 ,解决血清学分型局限性。方法 选择HLA -A、B血清学分型纯合型标本 ,应用聚合酶链式反应 -序列特异性寡核苷酸探针杂交 (PCR -SSOP)技术进行基因分型。结果 4 2例HLA -A、4 5例HLA -B血清学纯合型标本 ,经SSOP基因分型 ,其中分别有 3例和 8例为杂合型。结论 SSOP基因分型具有特异性更强、灵敏度更高、结果更为准确可靠等优点 ,是取代传统血清学分型方法较为优越的技术之一。

MiR-127-3p靶向MAPK4对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。[方法]通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达;通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞;通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系;通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水平。[结果]在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中,miR-127-3p表达明显下调(P<0.01),而MAPK4表达明显上调(P<0.01);miR-127-3p与MAPK43′UTR区存在结合位点,miR-127-3p高表达明显抑制了含有野生型MAPK4质粒的荧光素酶活性(P<0.01),但对突变型MAPK4质粒的荧光素酶活性无影响;与Control组相比,miR-127-3pmimic组SP6.5细胞和OM431细胞增殖均明显下降(P<0.01),凋亡率均明显增加(P<0.01),划痕闭合率均明显降低(P<0.01),每视野侵袭细胞数目均明显减少(P<0.01),p-AKT(T308)/AKT、p-mTORr(S473)/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.01),共转染pc-MAPK4逆转上述变化。[结论]M iR-127-3p通过靶向下调MAPK4来抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,这可能与抑制AKT/mTOR通路激活有关。

miR-138-5p靶向TCF4调节眼葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为

目的探讨miR-138-5p与转录因子4(TCF4)对眼葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞恶性生物学行为的影响。方法miR-138-5p mimic和pcDNA-TCF4分别或共转染MuM-2B细胞,构建小鼠体内移植瘤模型。RT-qPCR检测细胞转染效率;生物信息学软件预测miR-138-3p和TCF4靶向位点;双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测TCF4及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达;免疫组化检测Ki67、VEGF、Vimentin在肿瘤组织中的表达。结果与对照组相比,转染组miR-138-5p和TCF4均升高(P<0.05),且miR-138-5p和TCF4是靶向关系。miR-138-5p过表达通过靶向TCF4抑制MuM-2B细胞增殖和侵袭力并下调E-cadherin和Vimentin蛋白表达量,上调N-cadherin蛋白表达量(P<0.05)。在体内移植瘤中,miR-138-5p过表达减轻肿瘤重量(P<0.05),miR-138-5p过表达下调Ki67、VEGF、Vimentin在肿瘤组织中阳性细胞率(P<0.05)。结论miR-138-5p过表达可下调TCF4水平,进而抑制葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞增殖、侵袭及EMT。

肾-骨髓联合移植诱导免疫耐受:能够促进移植后嵌合体的形成吗?

背景:特异性的供者骨髓造血干细胞输注促进了嵌合体的形成,可以诱导器官移植免疫耐受。然而为达到细胞嵌合进行骨髓移植的预处理毒性大,发生移植物抗宿主反应的风险较高,人们开始寻找一些毒性更小的方案,其中包括免疫抑制剂联合骨髓输注等,尽管动物实验中已有诱导成功的耐受模型,但临床实用的诱导耐受方法则难以突破。目的:以嵌合体理论为基础,分析肾-骨髓联合移植诱导嵌合体形成与免疫耐受的相关性及安全性。设计、时间及地点:对比观察,于1998-01/2005-12在郑州市第三人民医院泌尿外科完成。对象:根据ABO/Rh血型相同及HLA配型原则,将同期等待肾移植的96例女性慢性肾功能衰竭患者分为2组,每组48例。联合移植组患者接受尸体肾、骨髓联合移植;同期接受上述同一供者另一肾脏的尿毒症患者作为对照组。供者为48例健康男性。方法:供者在取肾的同时,采集骨髓加入细胞冷冻保养液,经细胞程序降温至-198℃液氮罐保存。移植后应用大剂量抗人T淋巴细胞免疫球蛋白诱导治疗2周,于肾脏移植后2周实施骨髓细胞回输,输注的单个核细胞数为(0.9～2.5)×108/kg。采用聚合酶链反应方法检测人性别决定基因SRY。抽血检测CD3,CD4,CD8,CD25,以酶联免疫吸附法测定血白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子β等血细胞因子质量浓度。主要观察指标:移植后于不同时间点对受体进行嵌合体、淋巴细胞亚群及细胞因子检测。随访观察两组受者的临床移植效果及并发症发生情况。结果:联合移植组嵌合体阳性率显著高于对照组(P<0.05)。随访3年,嵌合体阳性受者和嵌合体阴性受者排斥发生率差异具有显著性意义(13%,35%,P<0.05)。联合移植组呈现免疫抑制状态,未见移植物抗宿主病发生。结论:肾-骨髓联合移植能促进移植后嵌合体的形成,显著降低排斥反应发生率,是一种安全有效的诱导免疫耐受的方法。

造血干细胞移植治疗实体瘤20例随访报告

目的 :长期随访并综合评价自体造血干细胞移植治疗恶性实体瘤的治疗效果、安全性及可行性。方法 :2 0例实体瘤患者自体骨髓移植 6例 ,自体外周血造血干细胞移植 14例 ,预处理方案为全身照射加大剂量化疗或大剂量化疗 ,动态观察移植后治疗效果、生活质量及移植相关并发症。结果 :2 0例中完全缓解 12例 (60 % ) ,部分缓解 3例 (15 % ) ,总体治疗反应率 75 % ,中位随访时间 16个月 (4～ 3 2个月 ) ,生活质量Karaofsky评分 10 0分 13例 ,80～ 90分 3例 ,80分以下仅 3例。移植相关并发症以感染和消化道毒副作用常见。移植相关死亡 2例 (10 % )。结论 :自体造血干细胞移植可提高恶性实体瘤的缓解率 ,延长无病生存期 ,严重相关并发症少 。

荧光原位杂交技术检测对复发性膀胱癌的诊断价值

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术在膀胱癌复发检测中的价值。方法:经尿道膀胱肿瘤电切或者钬激光切除术后患者49例,分别采用膀胱镜、FISH技术和尿脱落细胞学方法检测膀胱癌复发情况。结果:检测结果发现,膀胱癌术后复发31例。FISH技术、尿脱落细胞学检查对膀胱癌复发诊断的特异性均为100%。FISH技术检测敏感性为83.9%,高于尿脱落细胞学检测的敏感性(38.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FISH技术较细胞学检测对诊断膀胱癌复发更为有效,具有广阔的临床应用前景。

应用微卫星标志进行脐血干细胞移植后的植活检测

目的 :应用微卫星标志进行脐血干细胞移植后的植活检测 ,动态检测植活类型。方法 :对 12例脐血移植患者进行植活检测 ,其中 10例作动态检测 ,另 2例作随访检测。选用D12s2 2 5 7、D12s2 398、Dxs991、Dxs1199、D17s12 92、D5s8186个微卫星位点为引物进行PCR扩增 ,扩增产物经 8%聚丙烯酰胺凝胶电泳作银染色分析。取供者脐血或外周血及受者口腔黏膜DNA做为对照。结果 :10例动态检测者移植后 14d ,6例为混合性嵌合(MC) ;第 2 1天 ,7例为MC或完全性嵌合 (CC) ,其中 4例为CC ;第 2 8天 ,6例为CC。 2例植活失败的病例始终未检测出嵌合表达。 2例随访检测结果为CC。结论 :应用微卫星标志进行脐血移植后的植活检测 ,能早期检测是否植活及嵌合类型 。

待肾移植患者白细胞滤过输血的临床应用

目的 探讨白细胞滤过输血对待肾移植患者产生HLA抗体的影响及巨细胞病毒 (CMV)感染率的降低程度。方法 选择 16 6例待肾移植患者进行临床输血观察 ,其中 92例进行白细胞滤过输血 ,74例进行浓缩红细胞输注。结果 白细胞滤过组 ,HLA抗体阳性率 1.1% ,巨细胞病毒感染率 3.2 % ;未滤过组HLA抗体阳性率 9.5 % ,巨细胞病毒感染率 13.5 % ;两者差别有高度显著性 (P <0 .0 1)。结论 白细胞滤除输血 ,能够有效预防HLA抗体产生 ,减少肾移植术后CMV感染 ,对确实需输血的待肾移植患者提供了一条安全有效的输血途径和措施。

深低温冻存对SLE患者外周血CD_(34)^+阳性细胞活性的影响

目的探讨深低温冻存对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD34+细胞活性的影响。方法ClinMACS磁性分选系统分选CD34+细胞。采用5%二甲基亚砜,6%羟乙基淀粉和4%人血白蛋白作冷冻保护剂,-80℃直接冻存。观察不同时相复温后的细胞台盼兰拒染率、CFUGM计数以及移植后造血恢复时间。结果SLE患者与正常人脐血CD34+细胞冻存后1～90d,细胞活性无明显差异。SLE患者与非自身免疫性疾病患者同样方法冻存造血干细胞,移植后造血恢复特征相似。结论-80℃深低温保存对SLE患者造血干细胞活性无影响。

血清中微量元素变化与变应性鼻炎相关性研究

目的探讨血清中微量元素变化与变应性鼻炎的相关性。方法应用原子吸收分光光度计法检测变应性鼻炎患者血清中微量元素Zn、Cu、Fe、Ca、Mg、Mn、Sr的含量,并与对照组进行比较。结果变应性鼻炎患者血清中微量元素Mn、Sr含量与对照组相比明显下降,差异显著(P<0.01)。结论变应性鼻炎患者血清中Mn、Sr含量下降可能是变应性鼻炎发生的一个内在因素,Mn、Sr含量检测可作为变应性鼻炎的诊断和治疗依据。

胆囊壁声像图改变与腹水性质关系探讨

目的探讨腹水性质与胆囊壁声像图特征间的关系。方法对行超声检查的128例腹水患者的胆囊壁厚度、声像图改变、腹水性质进行统计分析。结果良性腹水患者胆囊壁增厚，多呈双层改变；恶性腹水患者胆囊壁一般呈单层回声，增厚或不增厚。结论观察腹水患者胆囊壁声像图特征对判断腹水性质有一定价值。

-80℃低温冻存保护剂对不同来源的造血干细胞体外冻存效果分析

目的分析-80℃体外冻存保护体系对不同来源的造血干细胞的冻存效果。方法以国产或进口药用二甲基亚砜(DMSO)、羟乙基淀粉(HES)、人血白蛋白(HSA)配制细胞冷冻保护剂,分别对人外周血、纯化的CD34+、骨髓及脐血造血干细胞进行-80℃低温保存,冻融前、后计数MNC、CD34+细胞、CFU-GM数量、回收率及台盼蓝拒染率,了解其生理活性。结果 4种来源的造血干细胞各30例,以120g/L HES加10%(V/V)DMSO和64g/L HSA为保护剂-80℃冻存360d,观察组与对照组在冻融前、后MNC、CD34+细胞、CFU-GM数量、回收率及台盼蓝拒染率无统计学意义(P>0.05)。应用国产试剂对118例外周血干细胞、39例纯化CD34+造血干细胞、3例脐血干细胞进行-80℃低温冻存1～9个月,进行冻存的造血干细胞移植,移植后7～19d内均成功恢复造血重建。结论以120g/L HES加10%(V/V)DMSO和64g/L HSA为细胞冷冻保护剂,能够良好保持干细胞数量及生理活性,且国产试剂与进口试剂无显著差别,具有价格低廉,容易购买,低毒安全,操作简便等特点,可临床应用于造血干细胞-80℃低温短期保存。

B细胞非霍奇金淋巴瘤患者IgH基因重排检测分析及意义

目的探讨外周血和骨髓免疫球蛋白重链(Immunoglobulin heavy chain,IgH)基因重排检测方法及其在监测B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者微小残留病(Minimal residual disease,MRD)中的临床意义。方法应用PCR-SSP方法对B-NHL患者进行IgH基因重排检测,回顾性分析39例B-NHL患者IgH基因重排动态检测结果来了解其与临床MRD的关系。结果 39例B-NHL初诊未经治疗患者IgH基因重排检测34例阳性,阳性率87.1%(34/39)。34例初诊阳性患者,治疗后19例达到临床完全缓解的患者中16例IgH基因重排转阴,3例持续阳性;15例临床部分缓解者,IgH基因重排持续阳性。分析发现13例患者骨髓和外周血标本IgH基因重排均呈阳性。结论 IgH基因重排检测可以作为B-NHL的辅助诊断及其微小残留病的监测。

异基因造血干细胞移植治疗儿童恶性血液病15例临床分析

目的 观察异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗儿童恶性血液病的疗效和相关并发症,探讨allo-HSCT治疗儿童恶性血液病的适应证.方法 回顾性分析15例接受allo-HSCT治疗的儿童恶性血液病患者的临床资料,其中13例为急性白血病,1例为慢性粒细胞白血病（加速期）,1例为骨髓增生异常综合征（MDS-REBT）;8例为亲缘供者,7例为非亲缘供者;11例行外周血造血干细胞移植治疗,4例行脐血造血干细胞移植治疗;6例为HLA配型全相合,9例为HLA配型不全相合.结果 15例患儿中生存7例,生存期为5个月～6年;5例因复发或重症感染放弃治疗;3例死亡.6例发生急性移植物抗宿主病（GVHD）,包括Ⅰ度3例,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度各1例,其中发生Ⅳ度急性GVHD患儿死亡.2例发生广泛性慢性GVHD,其中1例死亡,另1例生活质量严重受影响.结论 allo-HSCT是治疗儿童恶性血液病的重要方法,其并发症多、风险大,在防治并发症的同时,应严格把握allo-HSCT治疗儿童恶性血液病的适应证.