几株芽孢杆菌生长及产酶特性研究

对实验室保藏的几株芽孢杆菌进行耐受性试验,并探究其产酶条件。结果表明:芽孢杆菌最适生长pH范围为6.0~8.0,最适生长温度为35℃,最佳培养转速为150~180 r/min。菌株在固态培养基中生长最适水分条件为35%,水分大于35%时蛋白酶活性较高,蛋白酶活力最高为143.63 U/g。温度对芽孢杆菌的生长影响较为明显,在35~45℃范围内生长较好,最佳产蛋白酶温度为40℃。酸度对芽孢杆菌生长影响大,在pH5~6条件下对菌株产生不同程度抑制,菌株在酸性和偏中性条件下均能产生蛋白酶。正交试验表明,芽孢杆菌在40%含水率、35℃、pH8.0固态培养条件下产蛋白酶活力最高。

腺花素对多发性骨髓瘤细胞的生物学效应及其机制研究

目的·探讨腺花素(Aden)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的生物学效应与作用机制。方法·不同浓度Aden处理MM细胞H929、U266不同时间后,采用锥虫蓝排斥测试法检测细胞密度与活率;不同浓度Aden处理H929、U266细胞24 h后,采用CCK8检测细胞增殖变化,Annexin V-APC/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达、NF-κB信号通路相关蛋白以及NF-κB调控的下游蛋白变化;采用CETSA方法检测Aden对IKKβ蛋白热力学稳定性的影响。结果·锥虫蓝排斥测试法结果显示:Aden呈时间和剂量依赖性降低H929、U266细胞的活率及抑制细胞的增殖;在同样浓度的Aden处理下,U266较H929细胞更敏感。CCK8结果显示Aden呈剂量依赖性抑制H929、U266细胞的增殖。流式细胞术表明Aden可引起MM细胞轻微凋亡。Western blotting结果显示:H929细胞经Aden处理后未检测到PARP、caspase3的剪切;U266细胞经Aden处理后总蛋白PARP和caspase3下调,同时也可检测到PARP、caspase3的剪切;2株MM细胞经Aden处理后NF-κB信号通路蛋白p-p65、p-IκBα的表达均减少。CETSA结果显示Aden能使IKKβ蛋白热力学稳定性下降。结论·Aden能明显抑制MM细胞H929、U266增殖,但不能显著诱导其凋亡;Aden对MM细胞增殖抑制效应可能与其结合IKKβ进而抑制NF-κB信号通路的活化有关。

调节维甲酸受体稳定性的化合物细胞筛选体系的建立

目的·构建可用于发现调节维甲酸受体(retinoic acid receptors,RARα)蛋白稳定性的化合物的细胞筛选体系。方法·对pMSCV质粒进行改造,插入绿色荧光蛋白(EGFP)-RARα融合基因和红色荧光蛋白(Ds Red)基因,两者之间以内部核糖体结合位点(IRES)序列分隔;构建成功的质粒稳定转染急性早幼粒细胞白血病细胞NB4,流式细胞术分析全反式维甲酸、丙戊酸钠、阿糖胞苷、来那度胺、依托泊苷、孟鲁司特纳及藤黄酸处理细胞后EGFP与DsRed的荧光信号的变化,间接反映RARα蛋白表达水平;并通过Western blotting实验进一步验证阳性化合物对RARα蛋白水平的影响。结果·成功构建了蛋白稳定性双荧光筛选体系,并发现丙戊酸钠可有效使RARα蛋白的表达水平稳定。结论·双荧光筛选系统可用于调节RARα蛋白稳定性的化合物的筛选。丙戊酸钠是一个新的稳定RARα的化合物。该方法对建立稳定其他蛋白的化合物筛选系统具有参考价值。

基于改进模糊神经网络的细胞活性预测

针对细胞活性的预测问题,提出了一种利用自适应差分进化算法优化的模糊神经网络(ADE-FNN)预测模型。首先,通过模糊化处理细胞培养过程中的多种影响因素(如培养基成分、温度、pH值等),将这些因素作为模糊神经网络的输入。然后,利用已有的细胞活性数据对模型进行训练,优化网络参数。经过多次迭代和调整,模型逐渐学习到输入与输出之间的复杂映射关系。最后,利用细胞活性仿真实验验证所提ADE-FNN算法的性能。结果表明,基于模糊神经网络的细胞活性预测模型具有较高的预测精度和泛化能力。与传统的统计方法相比,该模型能够更好地处理数据中的不确定性和噪声,从而提供更准确的预测结果。此外,该模型还具有较好的可解释性,有助于深入理解细胞活性的影响因素及其作用机制。