高表达Mcl-1对衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨Bcl-2蛋白家族中Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激性凋亡中的作用。方法采用流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Westernblot检测Bcl-2、Mcl-1、Bcl-XL在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激状态下的表达;脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.0/Mcl-1质粒;Westernblot分别检测转染前后Mcl-1蛋白的表达水平变化。结果衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,但两株细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823对衣霉素的耐受表现更明显。由于衣霉素诱导SGC-7901和BGC-823的凋亡与线粒体凋亡途径有关,检测Bcl-2蛋白家族Mcl-1在SGC-7901中有明显上调。通过转染质粒高表达Mcl-1蛋白,衣霉素诱导的凋亡有明显下降。结论Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的抑制作用。

PBL教学法在医学免疫学教学中的应用

目的探讨PBL教学法的医学免疫学教学效果。方法在2006级本科临床专业就部分章节进行教学尝试。结果提高了学生的学习兴趣,促进了学生对知识的理解和记忆,提高了学生的自学能力、表达能力及人际沟通能力,增强了学生的主观能动性。结论PBL教学方法应用于实际教学有利于提高免疫学教学质量。

《医学免疫学》教学中教学互动新模式的尝试

探求免疫学教学中解决学生缺乏学习兴趣的新方法。通过改进已有的教学互动方式,让学生走上讲台,丰富课堂教学形式,提高学生学习热情,达到变"要我学"为"我要学"的教学效果。

浅谈《医学免疫学》教学中的几个结合

免疫学教学中,学生往往觉得晦涩难懂,从而产生厌学情绪,问题的症结在于学生缺乏兴趣和学习主动性,解决问题的出路在于改变单一的教学手段,紧密结合现代教学方法,加强与其他学科渗透,重视实验操作,鼓励学生参与教学互动,在各种方法相互结合取长补短中达到最佳的教学效果。

E2F-1在胃腺癌细胞内质网应激反应中对Mcl-1的调控作用

目的探讨Mcl-1在胃腺癌细胞对内质网应激诱导细胞凋亡耐受中的作用,以及内质网应激状态下E2F-1调控Mcl-1的机制。方法采用PI单染法测定细胞凋亡率;Western blot检测GRP78、Mcl-1、Bcl-2、E2F-1蛋白变化;实时荧光定量PCR检测Mcl-1 mRNA水平变化;转染pcDNA-E2F-1-Flag质粒使细胞高表达E2F-1。结果胃腺癌细胞对衣霉素(TM)诱导的内质网应激性凋亡相对不敏感,这与Mcl-1在蛋白水平和mRNA水平的上调有关。Mcl-1的转录抑制因子E2F-1在TM诱导细胞后表达下调。在内质网应激状态下的胃腺癌细胞中高表达E2F-1可以减弱Mcl-1的上调。结论内质网应激反应引起Mcl-1上调可能在胃腺癌细胞对内质网应激诱导的凋亡耐受中起重要作用;转录因子E2F-1下调可能参与调控Mcl-1的表达。

TRAIL联合紫杉醇诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡作用研究

目的:观察紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其协同作用机制。方法:将TRAIL、紫杉醇及TRAIL联合紫杉醇诱导SGC-7901细胞48小时,用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和线粒体跨膜电位的改变;用MTT法检测SGC-7901细胞增殖反应;用免疫印迹(Westernblot)法检测TRAIL死亡受体DR4(TRAIL-R1)、DR5(TRAIL-R2)的表达变化。结果:TRAIL和/或紫杉醇对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,两者联合用药组对细胞增殖的抑制率较单独用药明显增加(P<0.01);联合用药组细胞凋亡率较单独用药组明显增加(P<0.01);0.3μmol/L紫杉醇作用48小时后,DR4表达明显升高(P<0.05),而DR5表达没有明显改变(P>0.05)。结论:紫杉醇可协同TRAIL诱导SGC-7901细胞凋亡,DR4表达增加可能是其协同作用的机制。

BH3-only蛋白Bim的移位对紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡的影响

目的研究BH3-only蛋白Bim的移位在紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡中的作用。方法流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率;线粒体分离和Western blot检测在紫杉醇诱导后BIM的移位情况。结果紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,SGC-7901胃腺癌细胞比BGC-823细胞对紫杉醇更具敏感性。紫杉醇能诱导胃腺癌细胞系SGC-7901及BGC-823中Bim移位于线粒体膜,导致其活化形式增加。结论无论对紫杉醇敏感细胞系还是相对不敏感细胞系,Bim的移位都与其诱导的胃腺癌细胞凋亡有关。

高迁移率族蛋白1对奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响

目的构建pDsRED2-HMGB1重组质粒,探讨转染高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对奥沙利铂诱导的SGC-7901细胞凋亡的影响。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HMGB1 mRNA全编码序列,将PCR产物插入到pD-sRED2-N1载体的Xho I和EcoR I位点,构建pDsRED2-HMGB1重组质粒;通过脂质体法转染SGC-7901胃癌细胞,荧光显微镜检测HMGB1红色荧光融合蛋白表达。Westernblot鉴定HMGB1蛋白表达。应用流式细胞仪(Annexin-V/PI标记)分析HMGB1过表达对奥沙利铂诱导胃癌细胞凋亡的影响。结果成功构建真核表达质粒pDsRED2-HMGB1,转染SGC-7901细胞后,荧光显微镜下可见细胞内有HMGB1红色荧光融合蛋白的表达;流式细胞术检测发现转染pD-sRED2-HMGB1后SGC-7901细胞凋亡水平较转染pDsRED2-N1组下降22.4%。结论 HMGB1过表达可抑制奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡。

组织蛋白酶B与紫杉醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的体外实验研究

目的通过体外实验研究半胱氨酸蛋白酶B(Cathepsin B)与紫杉醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的关系。方法将BGC-823细胞(密度为1×105/孔)分别暴露于紫杉醇溶液(终浓度为0～0.5μmol/L)及紫杉醇(终浓度为0.3μmol/L)+Cathepsin B特异性抑制剂[CA-074(Me),终浓度为1.0μmol/L]48 h,并观察紫杉醇单独染毒组和紫杉醇+CA-074(Me)联合染毒组暴露6～48 h的细胞凋亡率和Cathepsin B的表达水平。结果随着紫杉醇染毒浓度的升高和染毒时间的延长,紫杉醇组和紫杉醇+CA-074(Me)组BGC-823细胞凋亡率和Cathepsin B表达水平呈上升趋势。与相同浓度、相同染毒时间紫杉醇组比较,紫杉醇+CA-074(Me)组BGC-823细胞凋亡率和Cathepsin B表达水平均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Cathepsin B在紫杉醇诱导的细胞凋亡中发挥着一定的促进作用。