CRISPR-Cas9基因编辑技术对细胞内源蛋白进行荧光标记的实验操作

CRISPR-Cas9是目前广泛应用的基因编辑技术,可对目的基因进行高效精准编辑,快速实现目的基因的敲除或敲入。Cas9蛋白在sgRNA引导下对靶序列进行剪切并造成DNA双链断裂,在与剪切位点两端同源的DNA模板序列存在时,可通过同源重组修复方式引入外源序列,实现荧光蛋白或其他标签在基因组上的精准敲入,进而实现对内源蛋白进行荧光标签的融合标记。通过基因编辑技术对内源目的蛋白进行标记,可避免由于过表达造成蛋白质定位、动力学或功能等的潜在影响,可显著提升细胞成像实验的稳定性和可重复性。本文重点介绍了利用CRISPR-Cas9基因编辑系统对目的蛋白进行荧光蛋白或自标记蛋白标签标记的方法与操作流程,为构建内源蛋白荧光标记的哺乳动物细胞系提供参考。

轴承套圈专用双主轴数控车床的研发

介绍了轴承套圈专用双主轴数控车床的设计方案,通过新旧工艺优缺点的比较,可知轴承套圈的连续加工工艺设计合理。另外还详细介绍了设计过程中的一些关键技术,如自动送料装置的设计、振动控制技术、双主轴同轴对置及双排刀架技术,最后对专用车床的液压系统工作原理和电气控制系统设计进行了简述。实践证明,轴承套圈可在上述专用车床上完成所有加工工序,实现高效、高精度加工。