4种国产兰属植物的核型比较研究

首次报道了 4种国产兰属植物建兰 (C.ensifolium(L.) Sw.)、墨兰 (C.sinense(Jack-sn ex Andr.) Willd.)、珍珠矮 (C.nanulum Y.S.Wu et S.C.Chen)、兔耳兰 (C.lancifoliumHook)的核型比较研究结果。具体如下 :兔耳兰为 2 n=2 x=38=2 8m+8sm+2 st(2 SAT) ,核不对称系数为 61 .2 2 % ,2 A型 ;建兰的核型公式为 2 n=2 x=40 =30 m+1 0 sm(2 SAT) ,核不对称系数为 59.1 5% ,2 B型 ;墨兰的核型公式为 2 n=2 x=40 =2 8m+1 0 sm+2 st,核不对称系数为 59.83% ,2 B型 ;珍珠矮为 2 n=2 x=40 =2 6m +1 0 sm+4st,核不对称系数为 62 .2 4 % ,2 B型。结合兰属植物若干稳定特化的形态学特征 ,讨论了兰属植物的核型进化。

水稻籼粳杂种雌性不育突变体91FS及其双亲的RAPD分析

以水稻籼粳杂种雌性不育突变体91FS及其双亲籼稻涪江2号和粳稻02428为材料进行RAPD分析.从检测过的100个引物中发现有10个引物扩增出多态性产物，表明91FS既承袭了双亲的遗传物质，又发生了新的变异，这为91FS的水稻籼粳杂种真实性提供了分子水平上的证据。

国产七种和一变种兰属植物的核型研究

对国产 7种和 1变种兰属植物 ,即邱北冬蕙兰Cymbidiumqiubeiense、春兰C .goeringii、春剑C .longibracteatum、线叶春兰C .serratum、蕙兰C .faberi、送春C .faberivar.szechuanicum、寒兰C .kanran、莎叶兰C .cyperifolium的核型进行了研究。具体结果如下 :邱北冬蕙兰为 2n =40 =2 4m + 1 2sm + 4st;蕙兰为 2n=40 =30m + 8sm + 2st;送春为 2n=40 =2 6m + 1 0sm + 4st;寒兰为 2n =40 =2 6m + 1 2sm + 2st;莎叶兰为 2n =40 =2 4m + 1 2sm + 4st;春兰为 2n =40 =2 4m + 1 0sm + 4st+ 2t;春剑为 2n =40 =2 4m + 1 0sm + 6st。线叶春兰为 2n =40 =2 8m + 1 0sm + 2st。线叶春兰中偶尔发现染色体数有 2n =41 ,43,60 ,80。

六种国产兰属植物的核型研究

首次研究了 6种国产兰属植物的染色体形态和核型。果香兰 (Cymbidiumsuavissimum)核型为 2n =4 0 =30m +10sm ;碧玉兰 (C lowianum)为 2n =4 0 =2 6m +12sm +2st;文山红柱兰(C wenshanense)为 2n =4 0 =2 8m +10sm +2st;虎头兰 (C hookerianum)为 2n =4 0 =30m +8sm+2st;独占春 (C eburneum)为 2n =4 0 =36m +4sm ;莎草兰 (C elegans)为 2n =4 0 =2 8m +8sm +4st。结合形态学特征和已有的核型资料 。

LB技术获得的科间植物[烟草(+)菠菜]F_2、F_3代植株与亲本呼吸代谢途径及叶绿素含量的遗传分析

本文报道了通过人工技术(LB技术)促使不同植物细胞间细胞质和染色质穿壁转移获得的科间植物[烟草(+)菠菜]F_2代植株与其双亲同一生长发育时期叶片的呼吸代谢途径及F_2、F_3代植株单位叶面积叶绿素含量的测定及比较分析,为LB技术导入外源遗传物质并使之遗传和表达从而获得杂种的真实性提供了佐证。

通过瞬间表达测定植物花药花粉特异基因启动子的时空表达性

通过瞬间表达快速测定了ＴＡ２９（烟草花药特异基因）和Ｚｍ１３（玉米花粉特异基因）启动子在一些植物中的时空表达性，结果表明，ＴＡ２９启动子在烟草和番茄的花药中具有时空表达性，而Ｚｍ１３启动子在油菜花粉中无任何表达，这为一些植物构建或转化雄性不育和恢复基因提供了理论依据．此外，还讨论了用基因枪转化的瞬间表达方法。

离体培养植物细胞的表面与细胞粘连

对离体培养的胡萝卜（Ｄａｕｃｕｓｃａｒｏｔａ）细胞和普通烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）细胞的表面进行了扫描电镜观察．观察表明，细胞的自由表面上有很多疣突和纤丝．疣突的大小不同、形状各异，主要含果胶质；有些细胞表面出现小坑，坑中集中有许多微小颗粒．疣突相互可融合成更大的疣突或连成桥；纤丝常与疣突结合．纤丝－纤丝的交织，纤丝－疣突的交联，及疣突－疣突的融合，在细胞壁外表面构成交织的网络．同种细胞之间及异种细胞之间均可通过纤丝、疣突的交织融合而粘连．疣突分布不均一，且与细胞的分散性有关．与疏松烟草愈伤组织比较，致密烟草愈伤组织细胞的自由表面上疣突显著较多．在分化再生时，烟草愈伤组织首先致密变绿，然后才见到芽的分化及植株再生．对疣突出现、壁物质沉积与细胞粘连、细胞分化、形态建成几者之间的关系进行了讨论．

离体细胞共培养中科间细胞共质体的形成

离体培养下选出的绿色胡萝卜（Ｄａｕｃｕｓ ｃａｒｏｔａ）细胞系和白色普通烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ ）细胞系，各自具有独特的细胞结构标志，在愈伤组织、光镜和电镜３ 个水平上均可区分。对两个细胞系进行分散、混合、Ｋ＋ 液低渗处理后在固体培养基上共培养，１０—１５ ｄ 后可观察到两种细胞的镶嵌生长。光镜和电镜下均观察到烟草细胞和胡萝卜细胞之间隔离层的存在与消失。在隔离层消失的区域可见到异种细胞间次生胞间连丝的形成，从而将独立的两个共质体连成一个统一的共质体。对科间细胞共质联系的建立过程进行了讨论，认为细胞接触后首先非特异粘连——以隔离层形成并适度加厚为标志，然后特异的细胞识别在隔离层中启动，从而导致隔离层或消失而重新建立共质联系或加厚、木质化。

一个新型水稻不育突变体91FS受精卵发育的时间和空间表达

水稻 91FS是一个稳定遗传的籼粳型不育突变体 ,大约 2 5 %的受精卵能正常发育成胚 ,约 75 %的受精卵核仁不融合 ,受精卵不再分裂 ,导致不育和不结实 ,育性六代稳定遗传 ,受精卵致死时空位点发生在精细胞进入卵细胞完成受精作用后。开花前后 ,91FS、籼粳杂种可育材料 91FM和以 91FS为父本的杂种F1代的花药、颖壳、叶片和子房的可溶性蛋白质SDS PAGE和IEF/SDS PAGE分析表明 ,91FS、91FM和F1代的蛋白质谱带多代保持稳定 ,3个材料间蛋白质谱带的异同 ,既表明了它们在遗传和发育上的某些共同功能和相互关系 ,又表明不同品种、器官和组织在遗传和发育上的某些特异性 ;91FS的子房在开花 1～ 2天 ,具有一条Mr=15 8.5× 10 3 的特有蛋白带 ,结合 91FS受精卵发育的细胞学和胚胎学时空定位 ,表明它们极有可能与 91FS稳定遗传的受精卵发育的时间和空间表达有关 .图 4表 1参

GUS基因转入烟草细胞通过科间细胞共培养在胡萝卜再生植株中的表达

用Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ菌株ＬＢＡ４４０４（含有质粒ｐＢＩ１２１和ｐＡＬ４４０４）介导转化普通烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）的悬浮细胞，获得卡那霉素抗性（ＫｍＲ）材料，其再生植株中表现ＧＵＳ活性。以这一继代半年以上的转基因烟草细胞系为材料，与胡萝卜（Ｄａｕｃｕｓｃａｒｏｔａ）细胞进行科间细胞共培养和低渗活化等处理，在含２００ｍｇ·ｌ－１卡那霉素（Ｋｍ）的培养基上筛选，得到具有ＫｍＲ的胡萝卜田胞系（ｃｅＲ），其再生的胡萝卜植株中也有一部分表现为ＫｍＲ，并在部分植株中检测到ＧＵＳ活性。这一结果表明Ｔ—ＤＮＡ可以通过科间细胞的共培养而从转基因烟草细胞中通过胞间通道转移到胡萝卜细胞中，并在胡萝卜细胞中表达。从这一结果来看，细胞共培养和有关处理的技术（ＡＣＨＴ）可能会成为植物基因转移的新技术。同时，发现共培养可以改进原来不亲和细胞之间的亲和性，这为植物细胞的识别和亲和性研究、亲和性的改善提供了方法和技术。

植物雌性不育的研究进展

本文对植物雌性不育的研究作了综述总结。至今，许多植物已发现有雌性不育现象，人们对其进行了细胞学、胚胎学和遗传学研究，同时也探讨了植物雌性不育的发生机制。然而，仍需要对植物雌性不育进一步深入广泛地进行研究，以便加强对植物雌性不育的认识，并在理论和实践中利用植物的雌性不育。

离体培养细胞表面的扫描电镜观察

对离体培养植物细胞（胡萝卜细胞和烟草细胞）的表面进行了扫描电镜观察。结果表明，愈伤组织表面细胞的表面上分布有颗粒和纤丝。颗粒的形状、大小及分布有各种各样，有些颗粒顶部凹陷成小坑。纤丝大多与颗粒相连，在有些细胞表面上纤丝交织成网络。对这些颗粒和纤丝的分泌活动及调节，以及颗粒和纤丝在细胞之间粘连中的作用，进行了讨论。

籼粳杂种不育突变体91FS育性特征和RAPD及RFLP分析

91FS是一个稳定遗传的籼粳杂种水稻新型不育突变体 ,育性特征表现为 ,雌雄配子和受精过程正常 ,约 2 5 %的受精卵发育成胚 ,约 75 %的受精卵终止发育 ,与 91FS群体约 2 5 %的结实率吻合 ,而且六代保持不变 ;91FS的RAPD和RFLP的谱带六代保持稳定和一致 ,与 91FS的杂种性状和育性表达的稳定性也是吻合的 ;91FS与籼粳杂种可育材料 91FM和以 91FS为父本的杂交F1代 (D2 97A× 91FS)材料的RAPD比较分析表明 ,91FS与CK相比表现出广泛的DNA多态性和同一性 ,同时也表现出特异的新带和一些缺失谱带 ,其多态性、同一性和特异性是可遗传的 .图 4表 1参

胡萝卜软腐欧文氏菌CSSY002菌株hrpN基因的克隆、鉴定及其表达产物Harpin蛋白的活性分析

从感染软腐病的胡萝b组织中分离出胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝b亚种（ Erwinia carotovora subsp, carotovora）CSSY002菌株．用该菌株接种非寄主植物烟草不能引起过敏反应．构建CSSY002菌株的基因组文库，应用α-P^32标记的hrpN基因作探针，通过菌落原位杂交技术从该文库中筛选到1．5～2．0 kb的hrpN-like阳性克隆，进一步将该片段亚克隆到pBluescript—II SK（＋）载体中，进行核苷酸序列测定．结果表明，hrpN-like基因（即hrpNCSSY002基因）的开放阅读框（ORF）为1071bp，其核苷酸序列已在Genbank注册，登录号为bankit AY999002．hrpN-like基因的编码产物Harpin—like蛋白（即HarpinCSSY002蛋白）由356个氨基酸残基组成，分子量为36．64×10^3，等电点pI5．9．将hrpN—like基因构建到表达质粒pET-28a（＋）的17强启动子下，并转化到大肠杆菌工程菌JM109（DE3）细胞中，经WTG（异丙基硫代-β-D半乳糖苷）诱导获得Harpin-like蛋白的高效表达，并通过接种烟草叶片的过敏反应检测Harpin—like蛋白的生物学活性．

HrpN_(CSDS001)基因克隆及其表达产物诱导拟南芥基因表达谱变化的研究

Erwinia carotovora subsp.carotovora CSDS001菌株具有可直接诱导烟草过敏反应特征,从构建的CSDS001菌株基因组文库,鉴定、克隆到hrpNCSDS001基因,GenBank登录号AY939927;构建的重组hrpNCSDS001基因工程菌株经IPTG诱导培养,获得的高效表达HarpinCSDS001蛋白,可诱导烟草发生过敏反应。30μg/mLHarpinCSDS001蛋白喷施拟南芥后,分析第3h、12h、24h、36h和48h拟南芥全基因谱表达动态变化,结果显示发生显著表达差异(logratio≤?1或≥1)的基因数分别为912、1787、2393、1833和1755。对被诱导发生显著表达差异的转录因子基因分析表明,有13个转录因子家族:ZIM、BES1、TCP、C2C2、AP2/EREBP、WRKY、bHLH、bZIP、GARP、MYB、NAC、HB、C2H2与HarpinCSDS001蛋白作用相关,这些转录因子家族主要参与调控植物抗性、光合作用、生长发育、开花等相关功能基因表达。

EcbCSL101菌株hrpN基因的克隆、表达及HarpinEcbCSL101蛋白的生物学活性

胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种(Erwinia carotovora subsp.betavasculorum)EcbCSL101菌株具有很强胞外酶分泌活性,接种非寄主植物烟草引起过敏反应。Southern blotting结果表明EcbCSL101菌株中含有hrpN基因。PCR扩增含EcbCSL101完整开放阅读框的DNA片段并克隆到表达载体pET28a(+)中。核苷酸序列分析表明,EcbCSL101菌株的hrpN基因的ORF为1113bp,编码36.65 kD HarpinEcbCSL101蛋白(GenBank,DQ355519),与其它几种软腐欧文氏菌Harpin蛋白有较高的同源性。将含有hrpNEcbCSL101基因的重组质粒转化到大肠杆菌JM109(DE3)中进行表达,纯化后的HarpinEcbCSL101能诱导烟草发生过敏反应。

原位多聚酶链式反应（InSituPCR）技术的应用和发展

原位ＰＣＲ是一项新的分子技术，它结合了原位杂交技术和ＰＣＲ技术的优点，具有高度的敏感性、特异性，并能进行精确的定位，在研究工作和临床诊断上有广阔的应用前景。本文论述了原位ＰＣＲ的原理、方法、应用、技术要点及常见错误的赝象的排除，以期对原位ＰＣＲ的应用提供一点参考。

人工促使细胞间细胞质和染色质穿壁转移实现外源遗传物质导入途径的研究

我们建立的一项新的细胞工程技术(L.B.技术)是用物理和化学方法促使不同亲本细胞间建立联结和通道,进而迫使镶嵌生长在一起的两亲本细胞间细胞质和染色质从细胞壁的一处或几处,以不同的质和量通过扩大了的胞间通道“穿入”或通过因细胞壁形成过程中不均匀生长和加厚并经L.B.技术处理而出现的薄弱区域或孔穴“穿入”相邻细胞,实现植物细胞对外源遗传物质或基因群的导入.不同的细胞生长发育区域的细胞间及同一生长发育区域细胞间穿壁转移的方式、频率、强度也是不同的.导入的历程和途径是,镶嵌生长在一起的两亲本细胞团,经低渗低pH值K^+溶液处理后,细胞吸水膨胀,原生质和核液川流增强,细胞壁松弛,壁上通道扩大,并在壁上薄弱区域形成更多的孔穴,这些造成了穿壁的良好结构和生理状态,渗透压和离心力则是实际驱动力,促使细胞质和染色质大量而强烈地穿壁转移,实现外源遗传物质的导入.

苹果火疫解淀粉欧文氏USAW004菌株Harpin_(Ea) USAW004基因的克隆和高效表达

从感染火疫病的苹果幼芽中分离纯化解淀粉欧文氏Erwinia amylovora菌株USAW004.该菌株能引起非寄主植物烟草叶片过敏反应.通过构建USAW004基因组文库和菌落原位杂交方法,从USAW004基因组文库中成功筛选到HarpinEaUSAW004基因的阳性克隆,并将其亚克隆到pBluescript-II SK(+).测定阳性克隆片段核苷酸序列HarpinEaUSAW004基因的orf长度为1 212 bp,转录产物HarpinEaUSAW004由403个氨基酸残基组成.将HarpinEaUSAW004基因克隆到表达载体pET28a(+)的T7启动子下,成功构建了高效表达质粒pT7-HarpinEaUSAW004,在大肠杆菌JM109中,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导HarpinEaUSAW004基因高效表达,其表达产物可以诱导烟草叶片产生典型过敏反应症状.

菠菜+烟草杂交植株与亲本的RuBPCase等电聚焦模式和免疫化学特性的比较分析

核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(简称RuBPcase,EC,4,1,1,39)是一个双功能酶。由于羧化酶的遗传功能和结构上的特点,因而得到广泛的研究。在缺乏确定的杂种遗传标志的情况下,羧化酶等电聚焦模式还可以鉴定杂交植株的杂种真实性特性。