基于NFAT信号通路的抗LAG3抗体8F-6生物活性检测

淋巴细胞活化基因3(LAG3)在T细胞活化和增殖过程中起负调控作用,通过单克隆抗体封闭LAG3分子可以增强T细胞对肿瘤的杀伤力,因此开发抗LAG3抗体的生物活性检测平台对免疫治疗具有重要意义。前期利用杂交瘤融合及抗体人源化改造技术,得到了一株全人源化的抗LAG3单克隆抗体8F-6,并基于活化T细胞核因子(NFAT)信号通路构建了Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3和Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3-CD3zeta细胞。本文利用所构建的细胞,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)和流式细胞技术对抗体8F-6进行亲和力及阻断效果检测。结果表明,抗体8F-6与LAG3分子具有良好的亲和力,可以阻断主要组织相容性复合体II(MHC II)分子与LAG3分子的结合;在报告细胞检测平台中,抗体8F-6在CHO-K1-FCGRIA细胞的协助下可以激活Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3-CD3zeta细胞;在Daudi/Raji细胞、人金黄色葡萄球菌肠毒素E(SEE)和Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3细胞的反应体系中,相比于对照抗体IgG1,抗体8F-6可以明显提高Jurkat-NFAT-Luc2-LAG3细胞的激活效果。