利用酵母双杂交技术筛选与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白

【目的】筛选与鉴定与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的Vero细胞蛋白。【方法】从Nc1株犬新孢子虫速殖子中提取DNA作为模板,PCR扩增NcSRS2基因,克隆于pGBKT7表达载体,构建诱饵载体pGBKT7-NcSRS2,转化入Y2H酵母感受态细胞,进行自激活活性验证和细胞毒性检测。利用酵母双杂交技术,以转化诱饵载体pGBKT7-NcSRS2的Y2H酵母菌株与Vero细胞cDNA文库进行酵母双杂交,筛选与NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白,对阳性克隆进行测序,并用BLAST分析,筛选出与NcSRS2存在相互作用的Vero细胞蛋白质。【结果】诱饵载体pGBKT7-NcSRS2无自激活活性和细胞毒性,可用于文库筛选。运用酵母双杂交系统,筛选出2个与NcSRS2相互作用的Vero细胞成分,分别是NADH dehydrogenase subunit 1和STMN2。【结论】本研究首次运用酵母双杂交技术筛选出与新孢子虫NcSRS2相互作用的Vero细胞蛋白质,为进一步研究犬新孢子虫NcSRS2参与黏附及入侵宿主细胞的机制奠定基础。

微带线直角弯曲最佳斜切率研究

PCB印制线直角弯曲引起的微带线特性阻抗不连续性严重影响高速电路信号传输质量.基于微带线结构参数及相对介电常数对印制线直角弯曲45度外斜切最佳斜切率M影响的数值分析结果和最小二乘法原理,应用MATLAB对数值结果进行曲线拟合,提出了M与印制线宽厚比w/h的函数表达式,以及50Ω特性阻抗微带线M与相对介电常数的线性关系.结果显示:具有最佳斜切率的印制线直角弯曲45度外斜切能够很好地保障最佳信号传输质量;相对介电常数和印制线厚度t对M影响小,而宽厚比w/h对M影响显著.

新孢子虫NcGRA7基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定

为筛选能与新孢子虫NcGRA7蛋白相互作用的靶蛋白,构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-NcGRA7。应用PCR技术从新孢子虫基因组DNA中扩增出NcGRA7基因,将其克隆至pMD-19T(simple)中,经过酶切鉴定后再连接至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上。结果表明:试验成功获得了NcGRA7基因片段,测序结果中序列无碱基突变,与目标基因序列同源为100%。试验成功构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-NcGRA7,为使用酵母双杂交技术筛选与NcGRA7蛋白相互作用的蛋白奠定基础。

羊泰勒虫PCR检测及进化分析

为调查吉林省洮南地区羊泰勒虫病的流行情况,在吉林省洮南地区某养殖场随机采集了羊血液样本76份,用PCR和nPCR方法对其进行检测,并将测得序列与GenBank中泰勒虫属和巴贝斯虫属18S rRNA序列进行对比分析。结果表明:洮南地区羊泰勒虫病的PCR阳性率为37%(28/76),nPCR阳性率为33%(25/76),nPCR方法的特异性更高。该试验测得泰勒虫18S rRNA序列与Theileria sp.和Theileria luwenshuni(吕氏泰勒虫)同源性高达99.6%以上,遗传距离为0~0.003,并处于同一进化分支上。该试验结果为洮南地区羊泰勒虫病的防控提供流行病学依据。

吉林省龙井市牛东方泰勒虫的流行病学调查

牛东方泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的东方泰勒虫寄生在牛的红细胞及淋巴细胞中,从而引起的一种具有传播性的血液原虫病,以高烧、贫血、出血、异常消瘦以及体表淋巴结肿大等症状为主要临床特征。为了掌握牛东方泰勒虫病在吉林省龙井市地区的流行情况,本试验采用血涂片染色镜检与PCR检测相结合的方法对该地域的牛血液样本进行牛东方泰勒虫病的流行病学调查,并利用等位特异型引物对该病进行分型。试验结果表明,龙井地区牛东方泰勒虫PCR检测样本阳性率为32.08%(17/53),C-型的阳性率和I-型的阳性率均为13.21%(7/53),而B-型仅为7.55%(4/53),且存在两种基因型的混合感染,B型和I型混合感染率为1.87%(1/53),B型和C型混合感染率1.87%(1/53)。

嗜吞噬细胞无形体病分子生物学诊断方法的研究进展

嗜吞噬细胞无形体主要侵染宿主成熟或未成熟的髓系白细胞,是蜱传疾病的病原体。主要感染放牧牛群,舍饲牛群较少发,并有明显的季节性。对全球的养牛业经济造成严重的影响。本文就当前常用的嗜吞噬细胞无形体分子检测方法作一综述。

天广HVDC换流阀阻尼电阻O型圈加速老化试验及使用寿命研究

阻尼电阻用于限制阻尼电容充电、放电电流幅值及其变换率di/dt,保证阻尼电容和晶闸管安全、稳定工作,是HVDC换流阀关键器件之一。换流阀阻尼电阻发热量大,一般采用水冷散热。经现场调研,阻尼电阻器主要失效形式是O型圈老化失效、密封性能下降进而发生冷却液渗漏,O型圈性能好坏直接影响阻尼电阻器的使用寿命。该文研究了换流阀阻容电阻O型圈老化机理,结合化学反应速率公式和橡胶材料性能参数变化动力学公式建立了换流阀阻尼电阻器O型圈寿命模型,设计了加速老化试验,通过试验数据处理确定了模型中各项参数,最终估算出样品在实际应力和工作温度下的预期寿命。

一种塔康天线的小型化设计

针对传统塔康天线结构尺寸较大不适用于车载安装的问题,提出了一种圆柱阵塔康天线小型化设计方案。根据圆柱阵列天线的方向图合成原理,通过适当地减少天线阵元数量和重新设计相适应的馈电电路,使圆柱阵塔康天线的直径缩小35%以上。仿真结果表明,24阵元圆柱阵塔康天线性能符合设计要求,验证了天线小型化的可行性。

串补间隙触发控制系统故障分析

强制触发型火花间隙是超、特高压串联补偿电容器组重要的过电压保护设备,间隙触发控制系统则是用于实现对主间隙进行强制性触发控制的电气设备。检修记录显示间隙触发控制系统已成为串补成套装置中故障率较高的薄弱环节,而且多数故障是由间隙触发控制箱(GTCB)内的触发控制模块和电源模块引起。本文结合串补间隙触发系统的基本设计思路,提出了此类故障的排查方法。然后进一步结合工程检修实例详细分析了导致这些故障的根本原因,提出了预防故障发生的优化和改进方法。该研究成果全面提高了我国串补的运维检修技术,部分研究成果还可推广应用于超特高压交直流输电领域在线监测等需要从高电位获取电能的CT取能类电源应用场合。

新孢子虫NcGRA2蛋白多克隆抗体的制备及其亚细胞定位

目的制备重组新孢子虫NcGRA2t全蛋白去掉信号肽多克隆抗体并纯化,研究其在新孢子虫虫体内的定位。方法用新孢子虫NcGRA2t蛋白进行体外原核表达,纯化后免疫健康BALB/c小鼠,制备抗血清,采用Western blot分析抗体特异性,采用免疫荧光法检测NcGRA2蛋白在新孢子虫处于细胞内阶段和细胞外阶段时的亚细胞定位。结果Western blot检测,制备的鼠抗NcGRA2t多克隆抗体能与新孢子虫裂解抗原发生特异性反应。间接免疫荧光分析,NcGRA2蛋白在细胞内阶段和细胞外阶段的虫体细胞质中均呈现绿色荧光。结论本研究制备并纯化了新孢子虫NcGRA2蛋白多克隆抗体,用该抗体可检测到新孢子虫NcGRA2蛋白存在虫体的细胞质中。

吉林省牛东方泰勒虫与嗜吞噬细胞无形体的流行病学调查

为了进一步了解吉林省牛东方泰勒虫和嗜吞噬细胞无形体的流行情况,对采自吉林省洮南,松原,珲春3个地区的103份牛血液样本,采用PCR和巢式PCR方法分别东方泰勒虫与嗜吞噬细胞无形体进行检测。结果显示,东方泰勒虫在洮南、松原和珲春地区的感染率分别为8.7%,12.5%和92.5%,嗜吞噬细胞无形体在洮南、松原和珲春地区的感染率分别为0,7.5%和12.5%。本研究首次在吉林省洮南地区和松原地区牛体内检测到东方泰勒虫,首次在松原地区和珲春地区牛体内检测到嗜吞噬细胞无形体。本研究结果为吉林省控制和预防牛东方泰勒虫病与嗜吞噬细胞无形体病提供了有效的流行病学依据。