DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中的应用研究

本文探讨DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中应用的可行性。应用DNATyper mtDNASNP60^(TM)试剂盒对100个汉族无关个体和20组全同胞进行mtDNA SNP检验;取25 pg/μL马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行种属特异性测试;取5、10、20、40μmol/L血红素进行抗抑制性测试;取两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后进行稳定性测试;分别应用VeriFiler^(TM)Plus PCR扩增试剂盒和DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对100份陈旧、腐败、降解检材进行检验。结果表明,100个汉族无关个体均获得清晰的mtDNA SNP分型结果,其检验结果与通过mtDNA测序获得的结果完全一致;100个汉族无关个体含有100种不同的单倍型;20组全同胞中每组个体之间mtDNA SNP分型结果相同;DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行检测,均未出现特异性分型;当血红素浓度≤40μmol/L时,所有mtDNA SNP位点均获得正确分型;两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后,所有mtDNA SNP位点均可正确分型;对于100份陈旧、腐败、降解检材,STR检出率为55%,mtDNA SNP的检出率为86%,mtDNA SNP的检出率显著高于STR。当模板DNA浓度大于5 pg/μL时,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒能得到完整的分型谱图。综上,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒可应用于陈旧、腐败、降解检材的检验,具有很好的实战应用价值。

DNATyper^(TM) 30六色荧光STR复合扩增冻干试剂的验证

本研究旨在测试DNATyper^(TM) 30冻干试剂的技术性能指标,评估其在法医学案件检验中的应用能力。制定测试方案,设置不同的存储条件和时间范围,通过检测标准DNA 9947A对冻干试剂的检出率、灵敏度、稳定性等方面进行测试,并使用案件样本对冻干试剂进行检测,同时将液体试剂和冻干试剂性能进行平行比对。结果显示,DNATyper^(TM) 30冻干试剂分型结果准确,可重复性好,具有较高的灵敏度(0.125 ng),对微量陈旧检材有很好的适应性,可常温状态下保存1个月以上。本研究表明DNATyper^(TM) 30冻干试剂可显著增加上样模板量、可延长试剂在常温下的保存时间、操作简单、灵敏度高,可满足微量DNA检测、试剂长途运输和常温携带的需要。

Y-STR单倍型匹配概率与基因座数量关系的构建

目的本文探索一种衡量Y-STR系统效能的方法,应用种群结构参数θ构建Y-STR单倍型匹配概率与基因座数量关系模型,旨在分析影响Y-STR检测系统效能进入平台期的因素,确定进入平台期的基因座数量区间。方法预测了体系中每个数量基因座对应的所有可能基因座组合子集,统计每个子集对应的θ值。统计了DNATyper Y36(36)、Y filer plus(27)、PPY23(23)、Yfiler(17)等4个常用Y-STR检测系统在3个不同数量级模型库(873、9577和83 999条)的θ值,构建数量关系模型。此外,还统计了5个Y-STR案件样本在数据库中的检索结果以验证理论模型的推导结果。结果在θ最大值的拟合曲线中,DNATyper Y36系统在3个数量级数据库中进入平台期的节点分别是27、37和55个基因座;在θ最小值的拟合曲线中,该值分别是19、25和28个基因座。结论对数据库模型的研究表明,系统中Y-STR基因座数目的增加与θ值呈反比,随着基因座数目增加,其对θ值减小的影响逐渐降低,最终会进入"停滞效应",又称"平台期"。数据库容量决定了系统进入平台期的节点,数据库容量越大,则进入平台期的节点越靠后,体系中纳入GD值较高的Y-STR基因座及快速突变基因座可促使更快进入平台期。

DNATyper^(TM)Y29试剂盒的性能确证

目的评价DNATyper^(TM) Y29试剂盒法医学应用价值。方法该试剂盒是五色荧光标记,包含29个Y-STR基因座,可以用于5色电泳测序仪,适用于Y-STR案件检验和数据库建设工作。该试剂盒包含AmpFlSTR■Yfiler■ki的17个Y-STR基因座以及另外的12个Y-STR基因座。本文通过不同反应体积、退火温度和循环次数对该体系进行方法验证,并且从灵敏度、准确性、种属特异性、混合样本、男性特异性、批次间试剂稳定性、不同检材的适应性与一致性等方面对其进行测试。结果该试剂盒分型结果准确、灵敏度高(最低检测模板可达62.5 pg);在1600:1的高浓度女性背景条件下,仍可以获得男性完整分型,具有良好的男性特异性;男性混合样本中,1:3-3:1的混合范围内,可以获得完整分型;此外,试剂盒还具有良好的种属特异性测试、一致性和稳定性。结论上述结果表明该试剂盒可用于法庭科学实际案件检验与Y-STR DNA数据库建设。

D19S433稀有等位基因落入相邻基因座1例

1案例资料1.1简要案情翁某笛、肖某明(女)和翁某纶(女)的血样来自北京通达首城司法鉴定所检案存留,要求鉴定翁某笛、肖某明是否为翁某纶的生物学父、母亲。1.2初级检验应用DNA IQTMCasework Pro Kit和Maxwell 16提取工作站提取血样DNA,应用DNATyper19TM试剂盒,在AB 9700型PCR扩增仪上对上述检材DNA进行PCR扩增,扩增产物经AB 3500XL型遗传分析仪进行检测,采用GeneMapperlD-X软件进行结果分析,操作过程按照试剂盒和仪器说明书进行。