表皮生长因子受体EGFR及其信号传导

表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)是ErbB家族成员之一,具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体。EGFR被配体激活后启动胞内信号传导,经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应,调节转录因子激活基因的转录,指导细胞迁移、黏附、增殖、分化、凋亡,且与肿瘤的形成和恶化密切相关。本文对EGFR的结构特性、几种重要的信号通路及各个信号通路之间的交联,以及信号的衰减等方面的研究进展进行了综述。

翻译起始区突变对猪卵透明带-3β蛋白在E.coli表达的影响

目的:探讨翻译起始区(translation initiation region,TIR)突变对两种氨基酸序列长度不同的猪卵透明带蛋白pZP3β161和pZP3β263在大肠杆菌中表达的影响。方法:应用DNASIS软件辅助分析,分别设计5条不同的上游引物对两种pZP3β基因的TIR区的G+C含量和自由能进行合理调整,PCR扩增后将获得的基因片段克隆入pET-3c载体,于大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达。结果:TIR对pZP3β表达有明显的影响,其表达的pZP3β161蛋白和pZP3β263蛋白分别占菌总蛋白的25％和15％。结论:在不改变氨基酸的条件下,通过对目的基因TIR进行适当改造,能够有效提高目的蛋白的表达效率。

非融合膜外型猪卵透明带-3β蛋白在原核系统中的表达

目的:通过基因工程的方法在原核表达系统中表达去除了信号肽和跨膜区的膜外型猪卵透明带蛋白pZP3β。方法:设计适宜引物,采用PCR方法,在基因水平对膜外型pZP3β的翻译起始序列进行适当调整,获得的基因克隆入pET-3c载体,并进一步在大肠杆菌E.coli BL21(DE3) pLysS中表达。结果:得到表达率约10%的非融合膜外型pZP3β蛋白的表达,并经Western-blot鉴定为目的蛋白。结论:外源蛋白在不改变氨基酸序列条件下,在基因水平的适当调整可以有效提高其表达率。

猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究

目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导。结果:SDS-PAGE分析表明tunc-pZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在WesternBlot免疫印迹中能被特异性抗体识别。结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能。

粉防己碱的抗氧化能力与心肌保护作用的相关性研究

目的:探讨粉防己碱(tetrandrine,TET)的体内外抗氧化作用及该作用与其心肌保护药理功能的关系。方法:测定TET的体外清除DPPH自由基能力以及对过氧化氢(H_2O_2)损伤的H9c2大鼠心肌细胞活力的影响。并利用皮下注射异丙肾上腺素(ISO),在大鼠体内造成心肌损伤模型,从死亡率和心电图两方面观察TET的心肌保护作用。再初步检测TET对大鼠左心室超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)以及丙二醛(MDA)4个体内抗氧化能力指标的影响。结果:TET能够显著性地、呈剂量依赖性地清除体外DPPH自由基、降低H_2O_2对H9c2细胞的生长抑制率。并且,预先腹腔注射TET能够降低ISO引起的大鼠死亡率和心电图ST段电压上抬的幅度,初步检测后发现,TET亦能够升高大鼠左心室SOD、CAT和GSH水平,降低MDA含量。结论:TET具有良好的心肌保护功能,其作用可能与它抗氧化的能力有关。

关于农村养老问题的思考

本文从分析当前农村老人的基本特征及其变化发展趋势出发,从社会心理、文化根基的变迁以及经济状况的变化等,探讨了农村养老问题,并分析农村现有的两种主要养老模式——“家庭养老”和“社会养老”模式所面临的困难,提出了新的养老模式——“老年集体自养模式”,并论证了其可行性和现实意义。

TIR突变的hbFGF在原核系统中高效的表达

目的:为获得非融合高表达hbFGF的大肠杆菌表达系统;方法:设计PCR引物,将hbFGF的5'端前10个密码子突变,优选大肠杆菌较偏好的密码子并降低G+C含量,通过双酶切法将突变后的hbFGF克隆入pBV220质粒载体中,筛选出重组子,再通过温控法对重组菌体进行诱导,分析表达情况,并进一步纯化和测活;结果:bFGF在该系统中高水平表达,表达量超过30%,其中绝大部分形成包涵体,经过包涵体变复性等纯化步骤后测活性,证明有生物活性;结论:TIR区域的基因突变对hbFGF在pBV220中高效表达起到关键作用.

丹参水提取物对去卵巢大鼠血脂和肝脏的影响

为研究丹参的雌激素样作用,将32只6月龄SD大鼠随机分成假手术组(Sham)、去卵巢手术组(OVX)、阳性对照17β-雌二醇治疗组(E2,1mg.kg-1.d-1,灌胃)和丹参治疗组(SM,600 mg.kg-1.d-1,灌胃),治疗12周后,检测大鼠体重的增加情况、子宫指数、血脂水平、血清转氨酶活性及抗氧化情况,并进行肝脏的组织学检测.结果显示,丹参水提取物治疗12周能明显抑制去卵巢诱导的大鼠体重的增加,刺激萎缩的子宫生长,改善血脂水平,降低丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)的活性,减轻肝脏的脂肪变性.丹参水提取物的这些保护作用,可能与其能降低氧化剂丙二醛(MDA)水平,增加超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性有关.

大黄素对膳食诱导的高脂血症大鼠的血脂调节作用及其分子机制

本研究主要对大黄素膳食诱导的高脂血症大鼠的血脂调节作用和其分子机制进行探索。SD雄性大鼠随机分为4组(每组8只):正常组、高脂血症组、辛伐他汀组和大黄素组。正常组给予正常饲料,其它组给予高脂饲料,辛伐他汀组(10 mg/kg)和大黄素组(10 mg/kg)连续灌胃给药38 d,试验结束采血测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),比较各组的动脉粥样硬化指数(AI);肝脏做组织病理学分析;胸主动脉做体外孵育测总一氧化氮(NO),实时荧光定量PCR和免疫印迹分别测血管的内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的mRNA转录和蛋白表达水平。结果表明:大黄素组能够显著降低TC、TG、LDL-C(P<0.05,P<0.05,P<0.001)和AI(P<0.001)。病理学结果显示大黄素能够降低肝细胞的脂肪变性程度。胸主动脉体外培养结果显示大黄素能够显著提高总NO(P<0.05);PCR和免疫印迹结果显示大黄素能够上调eNOS的基因和蛋白水平(P<0.05,P<0.001)。因此,大黄素能够降低血清TC、TG和LDL-C,保护肝细胞,减低动脉粥样硬化发生危险;其作用的分子机制可能与上调内皮细胞eNOS/NO系统、保护血管内皮有关。

国产实时荧光定量PCR试剂与GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的对比分析

目的评价国产实时荧光定量PCR(FQ-PCR)试剂与GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测痰标本结核分枝杆菌的临床应用价值,并比较两者的检测效能。方法收集2017年1月至2018年12月于深圳市南山区慢性病防治院就诊的210例疑似肺结核患者的痰标本,同时做涂片镜检、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养、GeneXpert和FQ-PCR检测。以MGIT 960培养为参考,比较GeneXpert和FQ-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,比较两者与MGIT 960培养结果的一致性及两者之间的一致性。按照涂片镜检结果分级报告标准,将痰标本分为荷菌量逐步递增的6个组,即阴性组、少量组、+组、++组、+++组、++++组,比较GeneXpert和FQ-PCR检测各个组阈值循环数(Ct值)均值的差异。结果GeneXpert检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.7%(123/147)、87.9%(51/58)、94.6%(123/130)、68.0%(51/75);FQ-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.7%(123/147)、89.8%(53/59)、95.3%(123/129)、68.8%(53/77)。FQ-PCR、GeneXpert分别与MGIT 960行Kappa检验,一致性分别为85.4%(176/206)和84.9%(174/205),Kappa值分别为0.70、0.66;对GeneXpert和FQ-PCR检测结果行Kappa检验,一致性为92.8%(194/209),Kappa值为0.85。FQ-PCR检测显示,阴性组与少量组的Ct值均值比较[(33.87±5.00)和(27.29±1.30)个],差异有统计学意义(t=5.56,P<0.001);GeneXpert检测分别为(33.32±6.05)和(23.99±3.36)个,差异有统计学意义(t=5.19,P<0.001)。检测涂片阴性标本时,FQ-PCR与GeneXpert检测的Ct值均值[(33.87±5.00)和(33.32±6.05)个]差异无统计学意义(t=0.32,P=0.750);检测涂片阳性(少量组、+组、++组、+++组、++++组)标本时,FQ-PCR检测的Ct值均值[分别为(27.29±1.30)、(27.95±2.85)、(25.88±3.62)、(24.79±2.46)、(22.38±2.72)个]均明显高于GeneXpert检测[分别为(23.99±3.36)、(23.10±4.05)、(20.22±2.81)、(20.31±4.16)、(16.48±2.78)个],差异均有统计学意义(t值分别为2.60、4.71、6.08、3.85、9.02,P值分别为0.030、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001)。结论国产FQ-PCR试剂与GeneXpert检测结果一致性较好,对结核病大规模筛查、降低检测成本具有临床应用价值。

Xpert MTB/RIF和荧光定量PCR在痰液标本中快速检测结核分支杆菌的比较

结核病作为全球最严重的公共卫生威胁,世界卫生组织发布的2015年全球结核病报告显示结核菌的感染率首次逼近艾滋病,2014年共有960万新发结核病病例,150万人死于结核病,其中40万人同时感染了艾滋病毒。我国2014年新发结核病病例93万,仅次于印度与印度尼西亚而位居全球第三。

一氧化氮合成酶水平对高血压辅助诊断的临床应用研究

目的对高血压、正常高值血压、正常血压人群分别采用硝酸还原酶比色法进行血清一氧化氮合成酶(NOS)、一氧化氮(NO)的测定,研究其效果。方法本研究选取我院管理的高血压患者、血压正常高值,各30例,在同一时期选择正常体检者30名作为正常对照组。对三组研究对象进行硝酸还原酶比色法测血清NOS、NO水平。结果正常高值组NOS和NO水平显著高于高血压组,且显著低于正常对照组(P<0.01)。高血压组NOS和NO水平与正常对照组相比均显著降低(P<0.01)。结论NOS和NO可作为高血压辅助诊断,且具有重要的临床应用价值。

一氧化氮合成酶和一氧化氮检测对高血压早期诊断的临床研究

目的探讨血清一氧化氮合成酶(NOS)、一氧化氮(NO)对高血压的早期预测价值。方法回顾性分析2016年1月-2017年12月来深圳市南山区慢性病防治院就诊的高血压患者、正常高值者、血压正常者各50例,检查血常规、血清NOS和NO含量;比较组间差异;分析NOS、NO与各临床参数之间的相关性。结果正常高值组NOS和NO显著高于高血压组,且显著低于对照组(P<0.01)。高血压组NOS、NO含量与对照组相比均显著降低(P<0.01)。NOS、NO与收缩压(SBP)和舒张压(DBP)均呈负相关(P<0.05)。NOS、NO与血红蛋白(HGB)呈负相关(P<0.01)。结论NOS、NO可以作为高血压的早期预测指标。