hVDAC1蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其结构功能的初步表征

电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)是线粒体外膜上最丰富的蛋白,在调节线粒体的物质代谢与能量代谢、以及线粒体介导的细胞凋亡中起重要作用,因而与肿瘤及神经退行性疾病的发生密切相关.VDAC1是三种VDAC变体中表达量最高、分布最广泛的一种.由于VDAC1的高度保守性,因此成为多种疾病治疗包括抗肿瘤治疗的理想靶点.获得足量的VDAC1蛋白是进一步研究其结构功能、筛选与VDAC1相互作用的药物分子的基础.从生物样品中直接分离纯化VDAC1,不仅条件苛刻,而且得率很低.因此利用DNA重组技术在大肠杆菌中重组表达VDAC1是获得足量蛋白、用于后续研究的重要途径.成功构建了C端带有His-tag的hVDAC1的重组蛋白原核表达质粒pET28a/hVDAC1,在大肠杆菌中以包涵体形式表达,并通过盐酸胍变性、在变性条件下通过NTA-Ni亲和层析柱纯化蛋白后进行复性的方法,获得了高纯度的hVDAC1.圆二色谱检测显示该蛋白二级结构以β-折叠为主、符合hVDAC1的二级结构特征.利用流式细胞仪检测结果显示:FITC荧光标记的hVDAC1可以与脂质体膜、细胞膜特异性结合.证明克隆表达纯化的hVDAC1具有特征的膜蛋白结构和功能,为体外筛选与hVDAC1相互作用的各类分子奠定了基础.

小学数学典型错例分析和矫正策略探讨

在小学数学教学过程中,学生们由于年龄较小,认知水平、仔细程度及学习能力等方面存在一定的缺失,使得学生们在解题过程中经常出现相应的问题及错误,教师在教学过程中应学会充分利用学习过程中的典型错例,将其转化为培养学生学习能力的一种教学资源,促使学生们通过典型错例进行思考、深入分析及探究,分析自己解题过程中错误所在,继而采用相应的策略进行优化及矫正,培养学生们的数学思维及数学意识。本次探究中主要针对小学数学教学过程中常见的典型错例进行了分析及提出相应矫正策略,详细如下文。

相分离介导细胞内短距离囊泡运输

细胞内的囊泡运输大致分两类,一类是经典的马达蛋白与细胞骨架依赖性的长距离运输,另一类是局域的短距离运输。短距离运输也有明确的方向,却不依赖马达蛋白或细胞骨架,长期以来科研人员对短距离囊泡运输的原理缺乏清晰的理解。以突触囊泡(synaptic vesicle,SV)的定向转运为例,该研究发现了一种新的由相分离介导的、钙信号调控的、定向的运输方式。具体来讲,一个名为Pclo(Piccolo)的支架蛋白,通过与囊泡发生受钙信号调控的相分离,一方面介导囊泡从储备池的提取,另一方面促进囊泡在活性区的栓系。此外,该研究还发现,在普通的动物细胞中,TFG(Trk-fused gene)的相分离可以介导COPII(coat protein complex II)囊泡从内质网(endoplasmic reticulum,ER)到内质网–高尔基体中间体(ER-Golgi intermediate compartment,ERGIC)的转运。因此,相分离提供了一种普适的介导短距离囊泡定向运输的方式。