Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。

幽门螺杆菌临床株粘附素HpaA基因的克隆表达及在诊断中的价值

目的 构建表达幽门螺杆菌临床株粘附素 (HpaA)的重组质粒 ,在大肠杆菌中表达获得重组蛋白 ,探讨重组蛋白作为Hp抗原在感染诊断中的价值。 方法 用PCR方法从幽门螺杆菌临床株DNA中扩增HpaA基因片段。克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达 ,表达产物经纯化和Westernblot鉴定后 ,作为Hp抗原 ,ELISA法对 10 0例临床标本进行相应抗体检测 ,并与细菌培养、组织学染色和快速尿素酶试验比较来评价其应用的可行性。结果 经酶切、测序分析插入的基因片段全长 783bp ,与基因文库中的粘附素基因同源性达 98 87%。表达蛋白经SDS -PAGE分析 ,相对分子量 (Mr)约为 300 0 0 ,可溶性表达占全菌的 4 1 6 7%以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 90 %以上的重组蛋白。Westernblot证实了其免疫反应性。通过对临床病例的检测结果显示细菌培养、组织学染色、快速尿素酶试验和HpaA抗体检测的敏感性、特异性和准确性分别为 10 0 0 %和 80 9% ;10 0 0 % ;和 90 5 % ;90 5 %和 85 8% ;93 3%和 85 9% ,相差不多。结论 HpaA能在大肠杆菌中高效表达 ,具有较强的免疫反应性 ,作为检测试剂敏感性和特异性均较好 ,有望成为Hp新的非侵入性的检测方法。

幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究

目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 。

解脲脲原体的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5种喹诺酮类药物的MIC,用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变。结果UU对多西环素最敏感,其次为米诺环素、交沙霉素、司帕沙星及克林霉素,对大环内酯类药物阿奇霉素和罗红霉素高度耐药。而司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的MIC范围在0.25～8μg/mL,抑制UU活性强于氧氟沙星和环丙沙星。10株喹诺酮类耐药UU中有3株只有parC基因第80位TCA→TTA的突变,氨基酸由丝氨酸→亮氨酸,1株GyrA基因第95位密码子GAC→GAA的突变,氨基酸由天冬氨酸→谷氨酸。6株两者同时存在。结论在UU治疗中可首选多西环素,其次为米诺环素和交沙霉素。gyrA基因95位密码子和parC基因80位的突变密码子与UU耐喹诺酮类药物密切相关。

sprE基因敲除粪肠球菌突变株的构建和功能的初步研究

目的构建丝氨酸蛋白酶同源基因(serine protease gene,sprE)敲除粪肠球菌突变株,来研究sprE基因的功能。方法用pTX4577质粒构建粪肠球菌sprE基因重组自杀质粒pCQ001,通过体内同源重组,筛选获得sprE基因的突变株,体外研究不同温度和氧化条件对突变株生长能力的影响。结果经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和southern blot进行鉴定获得基因突变株#sprE,突变株在40℃的生长能力以及在氧化条件下的存活率均明显降低。结论sprE基因敲除粪肠球菌突变株#sprE构建成功,为进一步研究其功能打下基础。

HpaA蛋白在幽门螺杆菌感染诊断中的应用

目的建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+-NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性。结果经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%。结论以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。

肠球菌小鼠腹膜炎模型的建立

目的:建立肠球菌毒力相关性小鼠腹膜炎模型,用于肠球菌类毒力因子的研究。方法:用粪肠球菌标准毒株OG1RF和粪肠球菌sprE基因缺陷突变株来建立小鼠腹膜炎模型,通过腹膜炎指标的检测来判断毒力下降情况。结果:突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,存活率也明显高于标准株。6h和12h外周血白细胞变化低于标准株,6h腹水TNF-α水平和活化TNF-α低于标准株组。结论:肠球菌毒力相关性小鼠腹膜炎模型建立成功,可用于肠球菌其它可能毒力因子的研究。

屎肠球菌Hyl蛋白的免疫保护性研究

目的用基因工程方法获得屎肠球菌类透明质酸酶(Hyalronidase,Hyl)蛋白,经口服免疫小鼠后,探讨机体产生的免疫应答和抗感染保护作用。方法Hyl用Ni2+-NTA柱纯化后,作为抗原给小鼠灌胃进行免疫,ELISA检测小鼠血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。并用屎肠球菌TX0016腹腔攻击已免疫的小鼠,观察其免疫保护性。结果重组蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,灌胃免疫小鼠后。ELISA检测结果血清IgA、IgG,粪sIgA,肠粘液sIgA明显高于对照组(P<0.01)。通过细菌攻击后,小鼠的平均存活时间也明显长于对照组。结论重组蛋白Hyl经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部粘膜免疫作用和抗菌保护作用。Hyl有望作为预防屎肠球菌口服疫苗的候选抗原。

临床医学专业医学微生物学双语教学的实践与探索

目的:对临床医学专业医学微生物学双语教学进行实践与探讨。方法:以临床医学专业本科学生为研究对象,进行医学微生物学双语教学,再通过座谈、问卷调查、期末考核等方式进行评价。结果:医学微生物学双语教学得到绝大部分学生的认可(95.0%),认为双语教学内容占整个教学内容的比例以20%～40%最为适宜;以中文讲解为主,融合英文课件为最合适的双语教学方式;试卷中英文试题比例以20%为宜;期末考试与往年相比,两组成绩的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:医学微生物学双语教学不影响专业知识的学习,是一种可行的教学模式。

肠球菌兔心内膜炎模型的建立

目的:建立肠球菌毒力相关性兔心内膜炎模型,用于肠球菌类毒力因子的研究。方法:用粪肠球菌(Enterococcus faecalis)标准毒株OG1RF和粪肠球菌sprE基因缺陷突变株来建立兔心内膜炎模型,通过心内膜炎相关指标的检测来判断毒力下降情况。结果:突变株在兔心内膜炎模型中产生赘生物的大小、重量以及菌落计数都明显低于标准株。结论:肠球菌毒力相关性兔心内膜炎模型建立成功,可用于肠球菌其他可能毒力因子的研究。

屎肠球菌类毒力基因hyl功能的动物实验研究

目的构建屎肠球菌透明质酸酶基因(hyaluronidase,hyl)突变株(*hyl),通过动物实验来研究hyl基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价屎肠球菌hyl基因突变株(*hyl)的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,存活率也明显高于野生株,引起的兔心内膜炎的病理改变也较野生株轻微。结论hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。

两歧双歧杆菌抗福氏痢疾杆菌感染的机制研究

目的：以福氏痢疾杆菌感染大鼠为模型,研究两歧双歧杆菌对福氏痢疾杆菌感染大鼠肿癌坏死因子-α（TNF-α）水平的影响,从而探讨其抗福氏痢疾杆菌感染的机制。方法：先用硫酸链霉素给正常大鼠灌胃,出现菌群失调症状,再通过福氏痢疾杆菌灌胃感染大鼠,使用两歧双歧杆菌液干预治疗福氏痢疾杆菌感染大鼠,检测干预治疗后各组大鼠血及脾中TNF-α的含量。结果：福氏痢疾杆菌感染各组与正常组相比,大鼠体内血及脾中TNF-α的含量均有明显差异;福氏痢疾杆菌感染各组中,未干预组、生理盐水组及双歧杆菌组脾中TNF-α的含量有显著变化。其中,双歧杆菌组的TNF-α水平升高更明显。结论：两歧双歧杆菌对福氏痢疾杆菌感染机体的TNF-α分泌有一定促进作用,是其抗福氏痢疾杆菌感染的可能机制。

重症监护病房的肠球菌种类及其耐药性分析

目的:了解我院重症监护病房肠球菌的种类及对其耐药情况进行分析。方法:用法国梅里埃公司生产的全自动细菌分析仪Vitek-32进行肠球菌鉴定和K-B法进行药敏试验。结果:113株肠球菌中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.18%,其中粪肠球菌63株占55.75%,屎肠球菌31株占27.43%。肠球菌对替考拉宁和万古霉素的耐药性最低,但屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性明显高于粪肠球菌。结论:临床对肠球菌的检测应达到种的水平,屎肠球菌对抗菌药物的耐药性较粪肠球菌为高,已经检测出对糖肽类抗生素万古霉素及替考拉宁耐药的肠球菌,值得重视。

幽门螺杆菌药物敏感性测定及结果分析

目的:探讨幽门螺杆菌对常用药物的敏感性 ,为临床用药提并参考。方法:临床分离的48株幽门螺杆菌进行16种常用药的敏感性检测。结果:48株幽门螺杆菌对阿莫西林、万古霉素、呋喃妥因、呋喃唑酮的敏感率为100% ;对环丙沙星、克拉霉素的敏感率为95.8% ;对罗红霉素、阿米卡星、妥布霉素的敏感率分别为91.67 %、85.40 %、81.25 % ;其它药物的抑菌活性较差 ,而头胞哌酮无抑菌作用。结论:阿莫西林、万古霉素、呋喃妥因、呋喃唑酮等常用抗生素 ,可作为根除幽门螺杆菌的首选药物。

幽门螺杆菌粘附素hpa A和霍乱毒素B亚单位ctx B融合基因的原核表达

目的 构建幽门螺杆菌粘附素 (hpaA)和霍乱毒素B亚单位 (ctxB)融合基因的原核表达载体 ,诱导表达并进行纯化。方法 用PCR扩增hpaA和ctxB两个目的基因片段 ,克隆至同一pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的表达质粒pQE hct,转化E .coliDH5α ,经IPTG诱导表达融合蛋白HCT ;经Westernblot分析其免疫原性 ,采用镍离子柱进行纯化。结果 经测序HCT融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子质量约为 4 0 0 0 0。可溶性蛋白占菌体总蛋白的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组融合蛋白。经Westernblot检测可被Hp全菌抗血清和CT抗血清识别。结论 已成功构建融合蛋白HCT的原核表达载体并能高效表达 。

幽门螺杆菌感染慢性胃炎与红细胞免疫功能相关性研究

目的:探讨幽门螺杆菌感染慢性胃炎患者对红细胞免疫功能的影响。方法:采用红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)百分率试验和免疫复合物花环(RBC-ICR)百分率试验,检测86例Hp阳性慢性胃炎患者、42例Hp阴性慢性胃炎患者以及38例健康志愿者红细胞免疫功能情况。结果:慢性胃炎组RBC-C3bRR％低于正常组(P<0．01);RBC-ICR％高于正常对照组(P<0．05);Hp阳性慢性胃炎组RBC-C33bRR明显低于Hp阴性组(P<0．05),RBC-ICR明显高于Hp阴性组(P<0．05)。结论:慢性胃炎患者红细胞免疫功能低下与Hp感染存在相关性。

幽门螺杆菌粘附机制及抗粘附剂研究

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori ,Hp)对胃粘膜的的粘附是其致病的首要条件,了解其粘附机制是开展对Hp感染及其相关疾病防治的关键。本文就Hp的粘附机制及抗粘附剂的研究近况进行了综述。

幽门螺杆菌粘附素基因的原核表达

目的:构建幽门螺杆菌粘附素(hpaA)基因的原核表达载体,并诱导表达。方法:用PCR扩增hpaA目的基因片段,克隆至pQE-30表达载体中,构建含目的基因的表达质粒pQE-hpaA,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达蛋白HpaA;Western blot分析其免疫反应性。结果:经测序hpaA基因片段由783bp组成,可编码260氨基酸残基的多肽。经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为30000。可溶性表达占全菌的42%以上。Westernblot分析能与Hp全菌抗血清反应。结论:成功构建了粘附素hpaA基因的原核表达载体并能高效表达,为研制Hp疫苗提供理论依据。

唾液IgG抗体测定在幽门螺杆菌感染诊断中的价值

目的 :探讨唾液抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)IgG测定对Hp感染的诊断价值。方法 :用ELISA法测定67例Hp阳性及20例Hp阴性患者的唾液内抗HpIgG ,并与血清抗体测定结果比较。结果 :唾液抗HpIgG对Hp感染的敏感性为91 1% ,特异性为85 0% ,准确性为89 7 % ,与血清测定结果接近(分别为92 6 % ,90 0%和91 9 %)。结论 :唾液抗Hp抗体测定对Hp感染的诊断有较好的应用价值。