RNA干扰Id2基因表达抑制PC-3前列腺肿瘤干细胞的增殖及侵袭能力

背景:Id基因是碱性螺旋-环-螺旋因子的内源性负性调节因子。该因子参与细胞的增殖、分化和生存,并在不同类型肿瘤的进展和浸润过程中表现出功能的多样性。目的:探讨沉默Id2基因表达对人前列腺肿瘤干细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:取对数生长期的PC-3人前列腺癌细胞,采用无血清悬浮培养法分离肿瘤干细胞球,流式细胞仪检测肿瘤干细胞表面标记CD44^+CD24^-表达。构建sh RNA-Id2表达载体,转染至前列腺肿瘤干细胞,以未转染的前列腺肿瘤干细胞为对照。转染后48 h,采用RT-PCR与Western blot实验检测前列腺肿瘤干细胞Id2基因及蛋白的表达;采用MTT法、Transwell小室检测前列腺肿瘤干细胞的增殖和侵袭能力;采用Western blot与RT-PCR检测前列腺肿瘤干细胞上皮标志物E-钙黏蛋白、间质细胞标志物波形蛋白及上皮细胞-间充质转化调控转录因子Twist的表达。结果与结论:(1)采用无血清悬浮培养法成功分离出肿瘤干细胞球,第3代前列腺肿瘤干细胞表面标记CD44^+CD24^-表达率为(85.69±8.96)%,显示培养的肿瘤干细胞球高表达肿瘤干细胞表型;(2)转染后48h,sh RNA-Id2转染组细胞Id2基因及蛋白表达明显低于未转染组(P <0.05),显示成功干扰了前列腺肿瘤干细胞Id2表达;(3)shRNA-Id2转染组前列腺肿瘤干细胞的增殖速度和侵袭能力低于未转染组(P<0.05);(4)sh RNA-Id2转染组前列腺肿瘤干细胞的上皮标志物E-钙黏蛋白表达高于未转染组(P<0.05),间质细胞标志物波形蛋白、上皮细胞-间充质转化调控转录因子Twist表达低于未转染组(P <0.05);(5)结果表明,RNA干扰Id2基因表达可通过调控E-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist表达抑制前列腺肿瘤干细胞的增殖及侵袭能力。

环孢霉素A调控高脂血症大鼠血管内皮LOX-1表达的机制研究

目的观察环孢霉素A(CsA)对高脂血症大鼠血管内皮凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响及其机制。方法首先建立高脂血症大鼠模型,然后分别采用高〔5mg/(kg·d)〕、低〔1mg/(kg·d)〕剂量的CsA对高脂血症大鼠进行灌胃7d,正常血脂的大鼠(正常对照组)及单纯高脂血症模型组于同时点用等量生理盐水灌胃。干预结束后,分别采用Western blot、免疫组织化学方法观察大鼠胸主动脉血管内皮上LOX-1和C-反应蛋白(CRP)蛋白的表达,并采用试剂盒检测血清中氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)以及活性氧簇(ROS)的表达水平。结果与单纯高脂血症模型组相比,不同剂量的CsA均可上调高脂血症大鼠血管内皮细胞上LOX-1的表达(P<0.05),而对血清中ox-LDL的表达没有明显影响(P>0.05);不同剂量组CsA均可增加高脂血症大鼠血管内皮上CRP的表达以及血清中ROS的表达水平,以高剂量组最明显(P<0.05)。结论在高脂环境中,CsA除了能通过上调ox-LDL血清水平刺激LOX-1上调外,还能通过激活CRP和ROS途径上调LOX-1的表达水平,这些因素可能促进动脉粥样硬化的发生。