西安地区无偿献血者血型分布与受血需求状况调查

目的 :了解西安地区 1999/2 0 0 2年无偿献血者血型分布及西安某医院用血需求状况 .方法 :用纸板法对 1999/2 0 0 2年的无偿献血者进行ABO血型鉴定 ,用凝胶法对某医院受血者做血型鉴定 ,贮血量与受血量按单位输入微机统计分析 .结果 :西安地区无偿献血人群血型分布构成比例与既往常驻有偿献血人群已有明显变化 ,B型已明显上升 ,O型明显下降 (P <0 .0 1) ,血型分布构成及逐月采血入库血量基本能满足临床用血的需要 ,但西安某医院临床用血量大于采血入库血量 ,尚需调剂其他采血单位血液才能满足临床用血需要 .结论 :西安地区无偿献血者血型构成比例已发生变化 .

无偿献血者HBsAg筛检方法与试剂价值评价

目的 :评价无偿献血者HBsAg筛检方法与试剂筛检价值 .方法 :以卫生部临床检验中心HBsAg临床科研血清盘样本 6 0份及随机抽取 2 0 0份西安市无偿献血者血清为评价样本 ;用国产试剂条法、国产ELISA试剂及进口ELISA试剂对评价样本作盲法筛检 ;以卫生部临床检验中心血清盘及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准 ,用四格表法计算评价真实性及可靠性指标 ,并对ELISA法cut off值的合理性进行评价 .结果 :国产艾康试剂条、国产英科新创ELISA与进口意大利富源ELISA试剂的灵敏度分别为 6 2 % ,86 % ,1 0 0 % ;特异度分别为 99% ,1 0 0 % ,96 % ;尤登指数分别为 0 .6 1 ,0 .86 ,0 .96 ;3种试剂的重复符合率均为 1 0 0 % ;国产英科新创规定的cut off值较合理 ,进口意大利富源HBsAgELISA试剂盒cut off值规定值偏小 .结论 :3种方法与试剂的灵敏度以进口意大利富源试剂盒最好 ,但特异度比国产试剂差 ,3种试剂的重复性均好 ,3种试剂联合筛检可保证输血的安全性 ,试剂条法灵敏度虽差 ,但特异度达 99% ,在无偿献血者的粗筛快检中可降低血液报废率 ,仍有其临床应用价值 .如能使国产HBsAg筛检试剂灵敏度提高 ,进口HBsAg筛检试剂特异度增高 ,将使临床应用价值更大 .

三种抗-HCV检测试剂盒对无偿献血者筛检价值评价

目的 :评价 3种抗 HCV筛检试剂对无偿献血者的筛检价值 .方法 :以卫生部临床检验中心抗 HCV临床科研血清盘标本 5 0份为评价标本 ,分别用快速试剂法 ,国产ELISA试剂及进口ELISA试剂对评价标本作盲法检测 ,以卫生部临床检验中心血清盘标本所提供的阴性和阳性结果为金标准 ,用四格表法计算出评价真实性及可靠性指标 ,并对ELISA法的cut off值的合理性进行评价 .结果 :快速试剂法 ,国产英科新创ELISA试剂盒与进口傲拓ELISA试剂盒的灵敏度分别为4 8% ,88% ,76 % ,特异度均为 1 0 0 % ,准确度分别为 74 % ,94 % ,88% .约登指数分别为 0 .4 8,0 .88,0 .76 .3种试剂盒的重复符合率均为 1 0 0 % .国产英科新创ELISA试剂盒规定的cut off值是合理的 ,而进口傲拓ELISA试剂盒规定的cut off值太高 .结论 :3种试剂盒的灵敏度与准确度以国产ELISA试剂盒为最好 ,3种试剂盒的重复性均好 ,因此使用 2种优选的国产ELISA试剂盒对血液进行联合筛检 ,既可以保证输血的安全性 。

天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达

目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将所获阳性重组质粒转化感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行W estern b lot鉴定。最后用N i-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化。结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经N i-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。

低剂量γ射线照射外周血对抗氧化系统的兴奋作用

目的探讨低剂量γ射线照射外周血对抗氧化功能的影响。方法对10份人全血采用γ射线照射,照射剂量1Gy,分别于照射前及照射后1、2h检测血清还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果γ射线照射后1h与照射前比较,血清GSH含量升高(P<0.01)、MDA含量降低(P<0.01),而SOD、GSH-Px、T-AOC及CAT活性升高(P<0.01)。照射后2h与照射后1h比较,GSH含量进一步升高(P<0.01),MDA含量进一步降低(P<0.01);除SOD外,GSH-Px、T-AOC及CAT活性进一步升高(P<0.01)。结论低剂量γ射线辐射可明显提高抗氧化能力,即对抗氧化系统有兴奋作用。

白细胞过滤对单采血小板保存中趋化性细胞因子含量的影响

目的:研究保存前白细胞过滤对单采血小板保存过程中趋化性细胞因子含量的影响。方法:应用细胞分离机单采血小板,然后经白细胞过滤,并于标准条件下保存5 d,同时设自身对照。间隔取样用ELISA法检测MCP-1,MCP-3,M IP-1α及RANTES含量。结果:对照组在保存1 d后,所有趋化性细胞因子含量明显升高,并与保存前比较有显著差异(P<0.05),过滤组中趋化性细胞因子含量分别在不同保存时间与保存前比较有显著增高,但其含量要显著低于对照组(P<0.05)。结论:保存前白细胞过滤能有效减少单采血小板保存过程中趋化性细胞因子含量,因此能有效地预防单采血小板输注后的副反应。

检测肺癌中辅助性T细胞(Th_1/Th_2)的临床意义

目的 探讨辅助性T细胞Th1 和Th2 细胞因子对肺癌患者的临床意义 ,为肿瘤的免疫治疗提供依据。方法 采用放射免疫 (RIA)和酶联免疫吸附法 (ELISA)检测 86例肺癌患者、5 9例肺良性病患者及45例正常对照辅助性T细胞分泌的细胞因子。以IL 2和TNF α的水平代表Th1 型细胞因子 ,IL 4、IL 6和IL 8的水平代表Th2 型细胞因子。结果 肺癌患者IL 2 [( 2 4.6± 12 .0 ) μg/L]的水平显著低于肺良性病患者[( 71.1± 2 5 .4) μg/L] (t =3 .82 ,P <0 .0 1)和正常对照 [( 69.3± 19.5 ) μg/L] (t =2 .76,P <0 .0 1) ,IL 6[( 0 .13± 0 .0 4) μg/L]的水平显著低于正常对照 [( 0 .2 3± 0 .0 5 ) μg/L ) (t =3 .3 9,P <0 .0 1) ,IL 4[( 2 5 4.2±78.0 ) μg/L]、IL 8[( 0 .49± 0 .16) μg/L]、TNF α[( 2 .76± 1.12 ) μg/L]的水平明显高于肺良性病患者 [( 63 .6± 18.6) μg/L ,( 0 .3 6± 0 .18) μg/L ,( 0 .96± 0 .2 0 ) μg/L]及正常对照 [( 60 .9± 19.6) μg/L ,( 0 .3 5± 0 .0 7) μg/L ,( 0 .93± 0 .19) μg/L] (t值分别为 4.10、4.89和 3 .76,P均 <0 .0 1) ,肺良性病患者和正常对照之间的IL 2、TNF α、IL 4、IL 8均未见明显差异 (P >0 .0 5 ) ,肺癌组IL 6的水平与肺良性病组 [( 0 .15± 0 .0 4)

无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的价值评价

目的 :评价无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的筛检价值。方法 :以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本 4 0份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清 10 0份为评价标本。用梅毒甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST)法 ,厦门新创梅毒抗体ELISA诊断试剂盒 (ELISA1)及北京金豪梅毒抗体ELISA诊断试剂盒 (ELISA2 )对评价标本作盲法筛检 ,以卫生部临床检验中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。用四格表法评价真实性与可靠性指标 ,并对二种ELISA试剂盒的Cut-off值的合理性进行评价。结果 :TRUST法、ELISA1及ELISA2试剂盒的灵敏度分别为 6 8.2 % ,95 .5 % ,10 0 .0 % ,特异度分别为 77.8% ,94 .4 % ,94 .4 % ,约登指数分别为 0 .4 6 ,0 .90 0 .94 ,重复试验符合率分别为 90 .0 % ,10 0 .0 % ,10 0 .0 % ,二种ELISA试剂盒的Cut-off值较合理。结论 :ELISA试剂盒的灵敏度、特异度及重复试验符合率要远高于TRUST法。尽管TRUST法的灵敏度与特异度较低 ,在无偿献血者的粗筛快检中可降低血液报废率 ,因而在无偿献血中的仍有很高价值 ,如果将ELISA试剂盒的灵敏度与特异度加以提高 ,将会具有更大的临床应用价值。

保存前白细胞过滤对添加剂红细胞中细菌增殖的影响

目的探讨白细胞过滤对添加剂红细胞中细菌增殖的影响。方法3个单位添加剂红细胞以100 CFU/m l的浓度人为接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌及铜绿假单胞菌,然后等分为二,一份经白细胞过滤,另一份作为对照,置4℃保存14 d,每周取样作细菌培养计数。结果添加剂红细胞经白细胞过滤后,经2 w保存未见有金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌生长,残留的大肠埃希氏菌有显著增殖,但其增殖数量要明显低于对照组。结论保存前过滤白细胞能有效地减少或消除细菌的增殖,对预防细菌污染所致的输血反应有一定意义。

低剂量γ射线辐照离体全血对红细胞抗氧化功能的影响

目的探讨低剂量γ射线辐照离体全血对红细胞抗氧化能力的影响。方法采集20份人全血,以剂量1Gy的γ射线进行辐照,吸收剂量率为17Gy/min,分别于照射前及照射后1、2h取样检测红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活力及血浆中还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果外周离体全血经1Gyγ射线照射后1h,血清GSH含量升高,MDA含量降低,而T-AOC、SOD、GSH-Px及CAT活性升高,且与照射前比较差异有统计学意义(P<0.01);经γ射线照射2h后,除SOD活性与照射后1h比较,差异无统计学意义(P>0.01)外,MDA含量进一步降低,GSH含量及T-AOC、GSH-Px、CAT活性进一步升高,与照射后1h比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论外周离体全血经1Gyγ射线辐照后,可增强红细胞抗氧化能力,输注后可提高机体免疫功能。

γ射线照射对单采血小板保存中转化生长因子-β1

目的研究γ射线照射对单采血小板保存过程中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量的影响。方法应用COBESpectraTM细胞分离机单采血小板,以27Gy的γ射线照射,于标准条件下保存5d,同时设自身对照,间隔取样,采用ELISA方法检测TGF-β1含量。结果对照组单采血小板在保存1d后,TGF-β1含量与保存前比较升高有显著性(P<0.05),照射组保存3d后,TGF-β1含量与保存前比较差异无显著性(P>0.05)。保存5d后,TGF-β1与保存前比较升高有显著性(P<0.05)。在保存中的各时间点,其含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论27Gyγ射线照射能抑制单采血小板保存过程中TGF-β1含量的升高,可以有效地预防单采血小板输注后引起的免疫抑制。

天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰

目的对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析。方法选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物。通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰。通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性。结果突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为30000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000。初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性。结论成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径。

西安某医院1999/2002无偿献血者梅毒感染状况调查

目的 :了解西安某医院 1 999/2 0 0 2无偿献血者梅毒感染状况 ,为安全输血制定有效预防措施提供科学依据 .方法 :用TRUST及ELISA方法对献血者进行梅毒抗体筛检 ,阳性者用TPPA法确认 .比较不同时间、年龄、职业分布上的感染率 .结果 :西安某医院 1 999/2 0 0 2年 85 4 74名无偿献血者的梅毒感染率为 2 .4 1‰ ,且有逐年上升趋势 (P <0 .0 1 ) ,以31～ 5 0岁年龄段感染率较高 (P <0 .0 1 ) ,职员与个体户梅毒感染率远高于其他职业人群 .结论 :西安某医院 1 999/2 0 0 2无偿献血者梅毒感染率较高 。

低剂量γ射线辐照对血清抗氧化系统的兴奋效应

目的:探讨低剂量γ射线辐照人全血对血清抗氧化酶活性的影响。方法:20份人全血,以剂量为1 Gy的γ射线进行辐照,吸收剂量率为17 Gy/min,分别于照射前及照射后1、2 h取样检测血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)活力及还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果:离体全血在剂量为1 Gyγ射线照射后1 h,可见血清中GSH含量升高,MDA含量降低及T-AOC、SOD、GR、GSH-Px、CAT活性升高,且均与照射前比较有显著差异(P<0.01)。经γ射线照射2 h后,除SOD活性与照射后1 h差异无显著性外,MDA含量进一步降低,GSH含量及T-AOC、GR、GSH-Px及CAT活性进一步升高,与照射后1 h比较有显著差异(P<0.01)。结论:低剂量γ射线辐照能明显提高血清抗氧化能力,即可诱导抗氧化系统的兴奋效应。

γ射线辐照对红细胞抗氧化能力的影响

目的 探讨γ射线辐照对红细胞抗氧化能力的影响。方法 以剂量为 2 7Gy的γ射线对红细胞进行辐照并于 4℃条件下保存 ,于不同保存时间取样检测红细胞超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)活力及血浆中丙二醛 (MDA)含量并设自身对照。结果 γ射线辐照 1、7、14、2 1d红细胞中SOD及GSH PX活力明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,血浆中MDA含量随辐照后保存时间逐渐升高 ,与对照组差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 红细胞经 2 7Gyγ射线辐照及随保存时间的延长 ,红细胞抗氧化能力下降 ,细胞膜结构和功能受损加大。

肝炎患者及献血员中SENV-D/H感染情况分析

目的了解SEN病毒D亚型和H亚型在不同肝炎患者和献血员中的感染情况。方法采用巢式聚合酶链反应检测献血员及甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者血清SENV-D、SENV-H亚型DNA。结果无偿献血员SENV-D感染率为25.9%,SENV-H为24.4%;急性甲肝患者SENV-D感染率为14.5%,SENV-H为32.7%;慢性乙肝患者SENV-D感染率为46.0%,SENV-H为45.2%;丙肝患者SENV-D和SENV-H感染率均为65.0%;非甲非戊型肝炎患者SENV-D感染率为51.2%,SENV-H为43.9%。上述人员SENV-D/H感染率比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者中SENV-D/H的感染率高于无偿献血员和甲肝患者。

血液筛检试剂成本最小化策略

目的探索无偿献血者血液筛检策略,寻找最小试剂成本的最佳筛检方案。方法采用临床经济学最小成本分析方法,从11个筛检试验不同的排列组合所形成的3991.68万个不同的筛检方案,选出15个方案进行分析。结果采血前用HBsAg金标法筛检的方案,试剂成本最高,分别为83318.00元/1000人和82304.98元/1000人。以抗-HIV两种筛检试验均纳入逐项淘汰的方案,试剂成本最低,分别为58674.15元/1000人和58494.70元/1000人。结论应用最小成本分析法组成的筛检方案,可为最小试剂成本的最佳筛检策略提供依据。

γ射线照射对单采血小板保存中趋化性细胞因子含量的影响

目的:研究γ射线照射对单采血小板保存过程中趋化性细胞因子含量的影响。方法:应用COBE SpectraTM细胞分离机单采血小板,然后以27Gy的γ射线照射,于标准条件下保存5d,间隔取样用ELISA方法检测MCP-3,MCP-1,MIP-1α及RANTES含量。结果:对照组单采血小板在保存1d后,所有趋化性细胞因子含量与保存前比较显著升高(P<0.05),照射组保存3d后,RANTES、MCP-3、MIP-1α含量与保存前比较无明显差异(P>0.05),但在保存5d后,所有趋化性细胞因子均与保存前比较有明显升高(P<0.05)。在保存1d后照射组所有趋化性细胞因子含量均明显低于对照组(P<0.05)。结论:27G yγ射线照射能抑制单采血小板保存过程中趋化性细胞因子含量的升高,从而可以有效地预防单采血小板输注后的非溶血性发热反应。

供者淋巴细胞紫外线照射后输注的抗白血病作用研究

【目的】研究紫外线处理供者淋巴细胞输注的适当剂量 ,探讨其移植物抗白血病效应。【方法】将L6 15白血病细胞 (H 2 K) /BALB/c(H 2 d)F1小鼠分A、B为两组 ,A组接受没经过紫外线处理的供体小鼠脾淋巴细胞输注 ,B组接受不同剂量紫外线处理的供体小鼠脾淋巴细胞输注 ,观察其抗白血病效应和移植物抗宿主病发生情况。【结果】供体脾细胞经不同剂量紫外线照射后 ,增殖活性降低 ,但保留了细胞毒活性。紫外线剂量增高到 6 0J/m2 以后 ,细胞毒活性基本稳定。A组受体小鼠生存质量较B组低 ,解剖发现符合GVHD表现 ,B组受体小鼠平均生存期长于A组 (Wilcoxon秩和检验 ,P <0 .0 1) ,解剖未发现GVHD表现。【结论】6 0J/m2 的紫外线处理供者淋巴细胞可抑制移植物抗宿主病 ,保留抗白血病效应 。