嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶及其氨基酸序列测定

扩展青霉 (Penicilliumexpansum)FS1884所产生的碱性脂肪酶经硫酸铵沉淀、Sephacr ylS 2 0 0柱层析后 ,再经嗜硫色谱 (ThiophilicChromatography)柱层析 ,被纯化了 173.8倍 ,最终比活为 5 6 94 .9U mg。纯化后的脂肪酶达到了SDS PAGE电泳纯、PAGE电泳纯以及毛细管液相色谱 (CapillaryLiquidChromatography)纯。该脂肪酶N 端氨基酸序列测定的结果是 :ATADAAAFPDLHRAAKLSSA 。

甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立

目的建立一种无需核酸提取,直接检测鼻咽拭子中甲型流感病毒H1HA pdm09、H3HA亚型和季节性流感病毒H1HA non-pdm09的POCT快速分型方法。方法针对3种流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列保守区设计高度特异性的引物和HyBeacon探针,同时以人类RNaseP基因作为内参。优化多重PCR反应条件,建立用熔解曲线分析甲型流感病毒基因分型的方法,并将其应用到ParaDNA核酸POCT检测仪,对50例甲型流感病毒抗原初筛阳性且经过实时荧光定量PCR检测的临床鼻咽拭子标本进行检测。结果该方法可在1.5 h内完成对3种甲型流感病毒亚型HA基因的特异性扩增和分型,与其他7种呼吸道病原微生物无交叉反应,其核酸检测下限为50 copies/μl。对临床50例甲型流感病毒抗原阳性的鼻咽拭子标本进行直接检测,检出H1HA pdm09阳性标本48例,H3HA阳性标本2例,未检出季节性流感H1HA nonpdm09阳性标本。结论基于HyBeacon探针和ParaDNA核酸POCT检测仪所建立的甲型流感病毒快速分型方法能同时检测H1HA pdm09、H3HA和季节性流感病毒H1HA non-pdm09。该方法无需核酸提取,操作简便,检测时间短,适于对甲型流感病毒抗原初筛阳性的鼻咽拭子开展现场基因分型检测,可为流感的诊治和防控提供及时快速的实验室依据。