抑制内质网钙离子释放在诱导巨噬细胞自噬及逆转LPS耐受中的作用

目的观察LPS耐受巨噬细胞自噬水平以及抑制内质网Ca 2+释放是否具有上调自噬水平和逆转LPS耐受的作用。方法分离Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞,LPS 5 ng/ml诱导耐受4 h,随后给予LPS 100ng/ml刺激,ELISA检测TNF-α和IL-6水平,Western blot和免疫荧光检测自噬蛋白(Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ)表达水平,Fluo-4 AM探针检测胞内Ca 2+浓度;在LPS刺激的同时给予胞内Ca 2+螯合剂(BAPTA)或内质网IP3通道阻断剂(2-APB)或CaMKⅡ抑制剂(KN-93),检测对自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ表达以及TNF-α释放的影响。结果LPS耐受细胞经LPS再次刺激后,TNF-α、IL-6释放明显减少,自噬水平也显著下降,同时胞内Ca 2+水平异常增高;给予BAPTA或2-APB或KN-93能够降低胞内Ca 2+水平,上调LC3-Ⅱ/Ⅰ表达,增加TNF-α释放。结论LPS耐受的巨噬细胞自噬水平显著降低,抑制内质网Ca 2+通路是上调自噬水平并逆转LPS耐受的有效途径。