诱导型衰老细胞模型的建立及Klotho启动子截短型突变体的构建和活性检测

目的:建立诱导型衰老细胞模型并检测抗衰老相关的Klotho基因启动子的不同截短型突变体的活性,为下一步研究奠定基础.方法:原代的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)经过流式细胞术分离鉴定后,通过设置不同过氧化氢的浓度,按时间梯度摸索诱导原代HUVEC细胞衰老的条件并最终通过SA-β-gal染色及定量PCR技术来确定其诱导条件.以全长的Klotho启动子为模版,通过PCR的方法,获得不同长度的Klotho启动子截短型突变体,并通过双萤光素酶报告基因系统检测试剂盒检测不同的启动子截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度.结果:培养基中过氧化氢浓度为600μM,处理96 h后,成功构建了诱导型衰老细胞模型;通过PCR的方法成功构建了长度分别为1 711 bp、1 262 bp、785 bp和735 bp的4个长度截短型突变体,并发现735 bp的截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异.结论:成功建立了诱导型衰老细胞模型,并成功构建了Klotho基因的启动子截短型突变体,检测和发现这些突变子在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异,为下一步治疗衰老相关疾病奠定了良好的工作基础.

点阵材料在准静态和动态压缩下的力学行为研究

点阵材料是一种多功能轻质材料,在能量吸收领域具有良好的应用前景。通过激光选区熔化技术设计并制备四种不同单胞构型的316L不锈钢点阵材料,具体为体心立方、面心立方、体心立方垂直棱柱、面心立方垂直棱柱。通过材料试验机和高速拉伸机开展在10-3 s-1和100 s-1应变率下的压缩试验,研究点阵材料在准静态和动态载荷下的力学性能。结果表明,单胞类型对点阵材料的能量吸收有显著影响。在点阵材料的单胞结构中增加Z方向垂直棱柱,可以极大增大应力平台应力。随着载荷速率的提高,点阵材料的能量吸收能力提高,由此表明点阵材料存在明显的应变率效应。

海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin的原核表达及其活性测定

本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性。首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3C-SUMO/Harobin重组质粒。重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导菌体表达,收集菌体分析发现大部分目的蛋白为包涵体。将获得的包涵体经尿素变性,用Ni-NTA亲和层析后,梯度透析复性融合蛋白。复性好的蛋白用Benzamidin Sepharose亲和层析纯化,得到高纯度的融合蛋白。进一步采用降解纤维蛋白原法测定融合蛋白活性。结果成功构建了pET3C-SUMO/Harobin重组载体,融合蛋白Harobin在原核系统中是以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性复性,并结合两步纯化法获得了90%纯度的融合蛋白;经过测定纤维蛋白原降解能力,显示融合蛋白具有降解纤维蛋白原的活性。

水嘴壳体的金属型铸造模具设计

在水嘴壳体的毛坯生产中，不可避免的要使用到铸造工艺，铸造的核心在模具设计上。目前金属型模具的应用已占到行业内的主流地位，因此根据金属型模具铸造成型后产品的各种不良情况，对模具进行合理设计以降低企业生产成本提高核心竞争力，是非常必要的。