数值标记法在组织制片风险管理中的应用

在病理常规工作中，从组织取材到切片制作之间的制片流程涉及诸多的操作环节，人为因素或仪器因素造成的失误，有可能会使组织在数量上发生异常增多或减少的现象，从而增加诊断风险，甚至会导致严重的不良事件。因此，本文应用数值标记法对组织的数量进行标识，为分析风险发生的可能性与评估风险的严重性提供直观的依据。

计算机Word设计在不干胶病理标签上的应用

在应用MicrosoftExcel制表操作中，笔者发现存在多余的单元格，易产生误操作，且对带多种标记的标签打印操作较繁琐。为此，笔者借助计算机打印标签字迹清晰工整的优势，利用MicrosoftWord清晰简洁的标签功能制表编号，经针式打印机打印输出，取得良好效果。

k-ras基因在中国结直肠癌患者中的突变状态

目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测结直肠癌中k-ras基因外显子2中第12、13编码子上最常见的7种突变类型,即第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T、34G>C及第13编码子的38G>A,同时将两种检测结果进行比对分析.结果:(1)经直接基因测序,确认在280例结直肠癌中,k-ras基因测序阳性(基因突变型)94例,阳性率33.57%(94/280),其中第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T及34G>C的突变率分别为14.64%(41/280)、4.29%(12/280)、0.36%(1/280)、2.86%(8/280)、3.57%(10/280)、0.36%(1/280),第13编码子的38G>A的突变率为7.5%(21/280);(2)94例k-ras基因测序阳性(基因突变型)病例中,实时荧光定量PCR阳性91例[灵敏度96.8%(91/94)],阴性3例;186例基因测序阴性(野生型)中,实时荧光定量PCR阴性184例[特异性98.9%(184/186)],阳性2例;实时荧光定量PCR法与直接基因测序法符合率为98.2%[(91+184)/280];(3)k-ras基因突变与患者性别、年龄相关(均P<0.05),而与肿瘤部位、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移无相关性(均P>0.05).结论:(1)中国结直肠癌患者中存在较大比例的k-ras基因突变(33.57%),在临床选取表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR单抗靶向药物治疗结直肠癌患者之前均应常规检测k-ras基因突变状态,从而为靶向治疗提供可靠的参考依据;(2)实时荧光定量PCR检测结果与基因测序检测结果高度一致,实时荧光定量PCR能够准确、快速、简便的检测出结直肠癌k-ras基因突变位点,可用于结直肠癌k-ras基因突变的检测;(3)k-ras基因突变与结直肠癌的生物学行为无明显相关性,但在≥60岁的女性人群中k-ras基因突变率较高.

N-甲基亚硝基脲诱导胸腺淋巴瘤病理形态学及超微结构研究

本研究探讨N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的肿瘤细胞起源及分型。应用光学显微镜、透射电子显微镜和免疫组织化学方法,对诱发肿瘤进行观察。结果表明,光学显微镜下胸腺结构破坏,代之以弥漫分布的中等大小的淋巴样肿瘤细胞。免疫组织化学检测显示,瘤细胞表达CD3和TdT。超微结构观察显示,瘤细胞表面无突起,核形相对规则或伴有扭曲核,胞质内细胞器极少。结论:MNU诱导的所有肿瘤为胸腺T淋巴母细胞淋巴瘤。

Leica全自动染色封片一体化工作站在病理常规制片中的应用体会

近年来随着医学的发展,大中型医院规模的扩大,病理工作量也随之增长,传统的手工操作难以适应大批量制片工作的要求。全自动染色封片机以其操作量大、稳定性好、效率高等优点已被越来越多的病理实验室接受并使用,并逐渐替代手工操作[1]。本科室自2009年引进Leica ST 5020＋CV5030全自动染色封片一体化工作站应用于常规制片,取得了良好的制片效果,现将应用体会介绍如下。

原发系统性间变性大细胞淋巴瘤分子分型的病理学研究

目的探讨间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma,ALCL)分子分型及免疫表型特点,为ALCL的分型、诊断、治疗和预后提供依据。方法采用免疫组化EnVision法对40例原发系统性ALCL进行分子分型,以是否表达间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)免疫标记分为ALK+组和ALK-组,分析其临床病理特征及CD30、ALK、T细胞标记、细胞毒相关抗原、EMA、Galectin-3的表达特点。结果 ALCL患者以男性多见,ALK+病例明显多于ALK-,青少年患者多为ALK+,ALK-常见于中老年患者。形态学上ALK+和ALK-较难鉴别,瘤细胞均强表达CD30,两组CD45RO、Galectin-3、CD43、细胞毒相关抗原表达无差异,多为(+)。ALK+者多表达EMA,瘤细胞大部分表达T细胞抗原CD2、CD4、CD45RO,CD5、CD7(-),CD8、CD3常(-);ALK-瘤细胞大部分表达T细胞抗原CD3、CD2、CD4、CD5,少数表达CD8、EMA;EBV+的ALK+组和ALK-组各1例,两者Ki-67增殖指数均>70%,差异无显著性。结论形态学相同的ALCL,通过免疫组化检测ALK蛋白可将其分为ALK+和ALK-两个独立的分子亚型,二者具有不同的临床特点、免疫表型及预后。

小鼠胸腺淋巴瘤动物模型的建立

本研究通过腹腔注射N-甲基亚硝基脲(MNU)建立小鼠胸腺淋巴瘤动物模型。第0、8周2次给C57BL/6小鼠腹腔注射MNU诱导液50mg/kg体重注射后观察动物一般情况;第22周处死全部小鼠,解剖检查胸腺肿瘤的发生及其他脏器情况。结果表明:第22周时67.5%(27/40)实验小鼠产生胸腺淋巴瘤。不同性别对成瘤率影响无明显差异。结论:腹腔分次注射MNU可以诱导小鼠建立胸腺淋巴瘤动物模型,其生物学行为与人类相似。

多组织块集合包埋制片法在冷冻切片中的应用

外科医生常根据术中冷冻病理检查结果确定切缘是否有肿瘤浸润,以决定手术范围。口腔、额面部位的手术切缘数量多且多为同时送检,若一个切缘配一个组织托单一包埋,逐个制片,操作速度慢,耗时量多,不利于外科手术快速进行。本文拟用多组织块集中包埋于同一组织托上进行统一制片,经过实践证明此种方法制片速度快,用时量少,质量效果良好。

肾穿刺活检石蜡切片厚度对淀粉样蛋白刚果红染色的影响

在肾穿刺活检实验中，应用淀粉样蛋白刚果红染色已成为诊断淀粉样变性肾病的重要参考依据。淀粉样蛋白沉积物在HE染色中呈嗜伊红的均质、无结构的团块状沉积物，刚果红染色呈砖红色，将其置于偏光显微镜下观察，淀粉样蛋白沉积物呈苹果绿色的双折光性。本组采用石蜡包埋组织切片进行淀粉样蛋白染色时，发现染色结果与切片厚度有一定的相关性。本文着重探讨应用刚果红染色淀粉样蛋白切片厚度对染色结果的影响，为进一步分析肾穿刺活检制片提供参考。

N-甲基亚硝基脲诱导的胸腺淋巴瘤小鼠模型改进

本研究的目的旨在进一步提高N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导小鼠胸腺淋巴瘤模型的成瘤率并降低其死亡率。在前期实验的基础上,对给药方案和实验周期进行了调整。第0、4周2次给C57BL/6小鼠腹腔注射MNU诱导液,分组分剂量注射。注射后观察动物一般情况。于第24周处死全部小鼠,解剖检查胸腺肿瘤的发生及其他脏器情况,并应用病理学和免疫组织化学方法,对诱发的胸腺淋巴瘤及其侵袭脏器进行研究并鉴定肿瘤细胞来源、分型。结果表明:第25周83.3%(55/66)实验小鼠产生胸腺淋巴瘤,其中5只死亡,死亡率7.6%。结论:通过调整给药方案和实验周期后,使该模型的成瘤率从以前的67.5%提高到83.3%,死亡率从10%降低至7.6%。

CTGF和TGF-β_1在乙肝病毒相关性肾炎中的表达及其意义

目的:观察CTGF及其上游因子TGF-β1在乙肝病毒相关性肾炎(HBV-GN)肾组织中的表达情况,探讨它们在HBV-GN进展中的作用。方法:采用免疫组化检测87例HBV-GN患者肾活检组织中CTGF和TGF-β1的表达,进行半定量评分,分析其与临床病理指标的相关性。结果:87例中膜性肾病(MN)35例、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)26例、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)11例I、gA肾病(IgAN)9例及其他类型6例。正常肾组织CTGF和TGF-β1呈微弱表达或不表达,HBV-GN肾组织中CTGF和TGF-β1的表达明显高于对照组,不同病理类型中CTGF和TGF-β1的表达差异有统计学意义,CTGF和TGF-β1的表达与肾小管间质病变程度及肾小球的病变程度成正相关。结论:在HBV-GN中CTGF和TGF-β1参与其间质纤维化和疾病的进展。

少见部位间变性大细胞淋巴瘤的临床病理分析

目的探讨少见部位间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的分子分型及其临床病理特征。方法采用免疫组化法对9例发生在脑、支气管、牙龈等少见部位的ALCL进行分子分型,分析其临床病理、组织学形态及免疫表型特征。结果 ALCL的少见部位为脑、支气管、牙龈等处,以男性多见,分子分型以ALK+多见,形态学多为普通型,ALK+与ALK-形态学相似,瘤细胞均强表达CD30,LCA、Galectin-3、CD43、细胞毒相关抗原多为阳性。ALK+者6例表达EMA,瘤细胞6例表达CD2、CD4、CD45RO,CD5、CD7阴性,CD8、CD3常阴性;ALK-者瘤细胞表达CD3、CD2、CD4、CD5,CD8、EMA阴性;EBV阳性1例;7例Ki-67指数>80%。结论 ALCL发生在脑、支气管、牙龈等部位罕见,组织学上需与多种肿瘤鉴别,免疫表型有助于诊断。

皮肤软组织肉芽肿性病变的巨细胞形态学定量研究

目的探讨巨细胞形态学定量分析在皮肤软组织肉芽肿性病变中的诊断与鉴别诊断价值。方法选择偶发分支杆菌(MF)肉芽肿、异物性肉芽肿、结核性肉芽肿及骨巨细胞瘤各10例进行组织病理学观察,并应用形态计量学分析方法对组织切片中的巨细胞参数进行测定。结果MF肉芽肿的形态学及巨细胞参数与异物性肉芽肿、结核性肉芽肿及骨巨细胞瘤的巨细胞有所不同。结论结合临床病理特点及巨细胞形态计量学检测,对皮肤软组织肉芽肿性病变的诊断与鉴别诊断有一定价值。

偶发分枝杆菌肉芽肿与结核性肉芽肿巨细胞形态学定量研究

目的:探讨巨细胞形态学定量分析在皮肤软组织偶发分枝杆菌(MF)肉芽肿和结核性肉芽肿中的诊断与鉴别诊断价值。方法:选择MF肉芽肿和结核性肉芽肿患者各10例进行组织病理学观察,并应用计算机形态计量学分析方法对组织切片中的巨细胞参数进行测定。结果:MF肉芽肿的形态学及巨细胞参数与结核性肉芽肿的巨细胞有所不同。结论:结合临床病理特点及巨细胞形态计量学检测,对MF肉芽肿和结核性肉芽肿的诊断与鉴别诊断有一定价值。

滤泡性淋巴瘤与黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的滤泡网免疫表达的差异

目的探讨滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)与黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lym-phoma,MALToma)免疫标记表达的差异及意义。方法对26例FL和12例MALToma做C4d、CD21、CD35、CD10和bcl-6的免疫组化SP法染色,并做CD35/C4d和CD21/C4d免疫组化双标染色,观察瘤性滤泡和植入滤泡中上述免疫标记物分布区域及阳性率。结果 26例FL中的瘤性滤泡和12例MALToma中的植入滤泡均出现扩大的、表达CD35和CD21的滤泡树突网,26例FL中有19例瘤性滤泡中央滤泡树突状细胞周围出现C4d沉积;12例MALToma中有6例植入滤泡的生发中心边缘有C4d沉积。FL的瘤性滤泡内的细胞可见CD10和bcl-6的表达而MALToma中植入滤泡CD10和bcl-6表达阴性。结论 FL的瘤性滤泡与MALToma植入滤泡中滤泡网免疫组化表达尤其C4d表达的差异,可以用于两者的鉴别诊断。

LEICA CV5030全自动封片机对不同宽度载玻片的匹配性研究

全自动封片机的应用,有效地解决了人工封片速度慢、效率低、封胶不均匀等缺陷[1]。但在实际应用中也会出现一些问题,主要是由于国外封片机制造商对使用载玻片的标准未做出明确说明,且国内载玻片的生产规格不标准、不统一,过窄、过宽的载玻片都会造成封片机运行故障,停止封片。

全切缘显示ESD标本病理检查方法的优点及推广

目的对"消化道内镜黏膜下层剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)标本取材规范"进行改进,并提出精确显示高级别上皮内瘤变(high grade intraepithelial neoplasia,HGEIN)早期浸润的方法.方法建立一种"全切缘显示"的ESD标本取材法,应用于120例消化道ESD标本.用0.05%24型蛋白酶消化40 min修复的Ⅳ型胶原免疫组化染色,观察HGEIN基底膜是否完整,判断有无早期浸润.对患者性别、年龄、病变的部位、肉眼分型、组织学类型、切缘侵犯情况等进行统计分析,以判断该取材法的临床实用性.结果食管30例、胃64例、肠26例;男性70例,女性50例,年龄23-81岁,平均58岁.肉眼分型:Ⅰ型42例,ⅡA型43例,ⅡB型29例,ⅡC型6例.组织学类型:HGEIN39例;癌变17例,其中3例为M1,5例为M2,6例为M3,3例为SM2.HGEIN有2例口端切缘侵犯.8例疑癌变标本,通过Ⅳ型胶原标记后6例证实为HGEIN,2例为癌变.结论 "全切缘显示"ESD标本病理检查方法,不仅上下切缘及两侧切缘都可以完整显示,且不增加工作量,无需大包埋盒和平推式滑动切片机等专用设备.对于HGEIN疑癌病例用Ⅳ型胶原免疫组化染色显示早期癌浸润效果佳.