神经生长因子改善糖尿病大鼠随意皮瓣缺血坏死的机制

目的:探讨神经生长因子(NGF)改善糖尿病大鼠随意皮瓣缺血坏死的分子机制。方法:①建立Wistar大鼠I型糖尿病模型,将这些大鼠随机分为模型组(DM组)和实验组(DM+NGF组)两组,设计9 cm×3 cm的改良McFarlane皮瓣并进行皮瓣移植,观察两组皮瓣的存活情况并统计存活面积。采集大鼠皮瓣组织,利用HE染色和免疫组化染色研究皮瓣存活与血管生成的关系,通过Western blot实验研究两组CD31、VEGF血管指标蛋白表达差异以及AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路的变化。②利用建立的高糖人脐静脉内皮细胞(HUVEC)模型,将细胞实验分为细胞模型组(DM组)和细胞实验组(DM+NGF)组两组,通过CCK-8增殖实验、MCM2+细胞免疫荧光实验、细胞划痕实验、Transwell实验和血管成管实验,分析在高糖环境下NGF对HUVEC细胞的增殖、迁移和血管形成的影响。利用STRING数据库探讨NGF对VEGF、SDF1α、HIF-1α、PDGFA、TGF-β1等常见血管生成相关因子的互作情况以及功能富极化分析;通过RT-qPCR和Western blot验证NGF对其表达的影响。通过RNA-seq测序和Western blot分析NGF对HUVEC的影响机制。结果:动物实验方面:DM+NGF组比DM组皮瓣存活面积多(P<0.01);CD31免疫组化染色发现DM+NGF组CD31阳性微血管密度比DM组高(P<0.01),且DM+NGF组CD31和VEGF表达均较DM组高(P<0.05);而皮瓣组织AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路的RAGE下降(P<0.05),而p-ERK1/2上调(P<0.05)。细胞实验方面:成功建立了25 mmol/L高糖模型,100 ng/mL NGF能促进HUVEC的增殖(P<0.01);与DM组比,DM+NGF组的细胞迁移和细胞血管生成能力明显加强(P<0.01),且DM+NGF组的VEGF、PDGFA、HIF-1α、Arg-1和bFGF相对表达量更高(P<0.05),而KEGG和GO功能富集化富集结果主要与血管形成和AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路途径等相关。结论:NGF可能通过影响AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路促进糖尿病大鼠内皮细胞血管生成,从而改善随意皮瓣的缺血坏死。

ABO血型鉴定中人源抗体的应用与评价

目的评价ABO血型鉴定中单克隆定型试剂及人源抗-A/B在吸收放散试验中的应用。方法单克隆定型试剂及人源抗-A/B与标准A、B、O、AB 4种表型红细胞在4℃、室温、37℃条件下反应比较特异性;与A1/B细胞反应的效价、凝集时间及凝集强度评价亲和力;对29例正反定型不符的标本进行检测,评价单克隆定型试剂及人源抗-A/B在吸收放散试验中对弱抗原的检出能力。结果人源抗-A/B特异性及亲和力较低,单克隆定型试剂有交叉反应性,人源抗-A/B在吸收放散试验中可以检出大部分的弱抗原,且不存在交叉反应性。结论在ABO血型鉴定试验中,人源抗-A/B结合吸收放散试验可以作为鉴定ABO弱抗原的补充,血清学试验中选择合理的试剂及相应的方法学,才能得出准确结果,确保临床输血安全。

287例意外抗体致新生儿溶血病回顾性研究

目的 研究引起新生儿溶血病的意外抗体特异性分布情况及与临床的相关性,为临床准确诊治提供参考。方法 回顾性分析2012年1月~2022年8月送检至本实验室检测并证实的287例非ABO-HDN病例,鉴定致病意外抗体特异性;采用χ^(2)检验分析母亲既往输血史、妊娠史、意外抗体效价、患儿性别、是否合并ABO新生儿溶血病与是否换/输血治疗的相关性。结果 287例非ABO-HDN涉及6个血型系统的13种意外抗体,Rh-HDN占比为96.17%(276/287),其中抗-D-HDN为47.04%(135/287)。未合并ABO-HDN的非ABO-HDN需要换/输血治疗的比例明显高于合并组,P<0.05。意外抗体高效价组(>8)需要换/输血治疗的比例明显高于低效价组(≤8),P<0.05。而患儿的性别,母亲的既往输血史以及妊娠史与是否需要换/输血治疗(病情严重程度)之间,各组间无统计学差异。结论 了解非ABO-HDN意外抗体的特异性分布及其特性,各类因素与疾病的相关性及其临床意义,有利于及时对患儿采取必要的干预手段,减少并发症的危害。

1例骨髓增生异常综合征多次受血患者血清存在抗-M,抗-cE和抗-Jkb抗体的鉴定及配血输血策略

目的通过对临床送检的1例骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)多次受血患者的抗筛阳性标本进行鉴定,探讨此类复杂不规则抗体的鉴定思路、方法及输血方案。方法鉴定标本ABO,Rh,MNS和Kidd等血型,应用2种谱细胞及筛选出的无偿献血者细胞配合吸收放散实验进行抗体筛查、复杂不规则抗体特异性鉴定,采用盐水法、凝聚胺法和间接抗球蛋白方法进行交叉配血。结果患者血型血清学结果为O,CCDee,M-N+和Jk(a+b-),其血清中检出Ig M-M,Ig G-c E和Ig G-Jk^(b)抗体,筛选M,c,E及Jkb抗原均为阴性的供血者与患者进行交叉配血,配血相合后进行输注。结论针对多次受血患者产生的复杂不规则抗体,应灵活运用灵敏度高的血清学方法,联合多种谱细胞,准确鉴定出抗体特异性,为临床提供相合的血液,有效保障输血的安全性。

水位波动下砂层中颗粒运移及沉积特性试验研究

受大型水利工程调控及季节性降水影响,江河湖沿岸地下水位呈现出周期性变化规律,水位波动是地下水回灌等工程中影响砂层中颗粒运移及沉积特性的重要因素。通过砂层迁移-沉积试验系统开展了颗粒迁移-沉积特性试验,并采用浊度-浓度关系、穿透曲线、颗粒粒径、沉积量、流出液颗粒粒径分布、孔隙水压力及细观观测等方式实现了从宏观到细观、从定性到定量分析颗粒的迁移-沉积规律。结果表明:在相同的波动幅度下,随着水位的不断升高,悬浮颗粒横向上扩散的趋势愈加显著且渗透力作用逐渐增强,颗粒更容易沉积在多孔介质表面或孔隙通道角落中;在不同波动幅度下,注入小粒径颗粒时,随着波动幅度增加流出液浓度及峰值增大,大粒径颗粒与小粒径颗粒呈现相反规律;在相同尺寸的多孔介质中,悬浮颗粒粒径越大相对浓度峰值越低,大颗粒在孔隙中更容易由于筛滤作用发生沉积,从而造成多孔介质孔隙率和渗透性降低。

陕西省稀有血型血液信息化供应平台的建立

目的 建立陕西省稀有血型血液信息化供应平台。方法 稀有血型信息化供应平台由标本接收、结果登记、供者档案和库存血液组成。首先在标本接收模块录入待检测血型的无偿献血者献血码,再登记无偿献血者每个血型系统抗原鉴定结果,保存后导入稀有血型信息化供应平台数据库。当收到非常见血型血液或稀有血型血液(缺失多个常规抗原或缺失某个高频抗原)申请时,在供者档案模块通过数据库查询相应抗原阴性的献血者及其血液状态(有无库存)并动态监测稀有血型血液库存状态。结果 建立的稀有血型血液信息化供应平台数据库中录入稀有Rh表型献血者5.060%(273/5 398),缺失多种常规抗原献血者1.540‰(51/33 010),缺失高频抗原的O型献血者病例共13例,其中Jk(a-b-)表型0.019‰(3/158 484),Di(a+b-)表型0.436‰(2/4 586),Fy(a-b+)表型4.030‰(8/1 983)保存于稀有血型实体库。结论 稀有血型血液信息化供应平台可解决临床上对稀有血型血液的迫切需求,保障输血安全。

2493例RhD阴性献血者的基因分析及4个新RHD等位基因的鉴定

目的研究中国汉族人群RHD等位基因多态性和分子机制。方法2008年1月-2011年9月，对2493例初筛为RH阴性的无偿献血者，采用单克隆抗体鉴定RhD／C／c／E／＇e抗原，D抗原鉴定同时采用间接抗球蛋白法；采用PCR·SSP方法测出d／d、D／d、DEL／d型，再用商用RHD基因检测试剂盒鉴定D／d型的样本中的弱D—15、RHD．CE（2-9）-D、DVI-Ⅲ和Dva型；对于排除前述基因型的样本，对其RHD基因10个外显子序列进行测序比对分析。结果2493例中，有1686名为R／／D基因完全缺失（0／O），占67．6％，其它808名检出有RHD基因：其中20．7％（516／2493）为DEL型（RHD1227G〉A／a），RHD—CE（2-9）-D／d为最常见的融合基因型，占6．5％（163／2493），其次为DⅥ·nl（RHD—CE（3-6）-D／d），占1．2％（31／2493），弱D15型为常见的弱D型，共检出62例（2．5％）；发现的4个新等位基因，分别是RHO78delC／d、RHD520G〉A＋1080dellO／dRHD、438G〉C／d和RHD101A〉G／d。结论汉族人群RHD等位基因多态性与高加索人群存在差异，有丰富的类型和不同分子机制。

1例弱D24型的血清学表型与分子背景研究

目的分析鉴定1名RhD抗原弱阳性个体的血型血清学表型及分子背景。方法对1名常规RhD血型初筛为阴性的无偿献血者,采用间接抗球蛋白试验检测D抗原,并用常规血清学方法检测其RhC、c、E、e抗原表型;采用特异性PCR技术测定其RHD合子型,并作RHD基因全长编码区10个外显子序列测序。结果血型血清学鉴定该个体存在有弱的D抗原,其他Rh血型抗原为ccEe;RHD合子型为D/d;对RHD基因10个外显子的测序结果显示编码区存在1 013 T>C的突变,证实该个体为弱D24型。结论中国人群中的弱D型有待于进一步的发现和研究。

RHAG 236G>A突变致Rh_(mod)的分子背景研究及家系调查

目的对1例Rhmod标本,进行血清学方法和基因分析及家系调查,研究其相关分子机制和遗传方式。方法血清学方法鉴定标本的ABO血型和Rh C/c/E/e抗原。鉴定RHD基因的合子型和扩增RHD和RHAG 10个外显子并测序。对先证者的亲属进行家系调查。结果先证者为AB型,Rh血型为D-c-E-,C、e弱阳性。先证者RHD合子型为D/D型,先证者RHD外显子测序结果未发现有碱基的突变,在先证者的RHAG等位基因上发现236G>A的杂和突变。家系调查显示在先证者哥哥的RHAG等位基因上也存在236G>A的杂和突变。结论本研究中发现的Rhmod标本是由RHAG基因236G>A导致,能够稳定遗传突变。

1252T>G致新的弱D型血清学和分子生物学研究

目的分析研究1例新的弱D型个体的血清学和分子生物学特点。方法采用盐水法鉴定Rh D/C/c/E/e抗原,并采用间接抗球蛋白法(IAT)进一步鉴定Rh D抗原,采用盐水法和抗人球蛋白法进行抗体筛查;采用商用基因检测试剂盒对标本进行CDE基因检测;对其RHD基因10个外显子序列进行测序分析比对。结果血清学检测显示该标本为D变异型,RHCE血型为C+c+E-e+,抗体筛查为阴性。CDE基因试剂盒检测为DCcee,RHD外显子序列测序分析发现第10外显子存在1 252 T>G碱基突变,其余外显子序列则与正常RHD基因一致。结论该标本存在RHD1 252 T>G碱基突变,为新的弱D型。

抗-D产生与HLA-DRB1基因相关性研究

目的研究抗-D产生与HLA-DRB1基因的相关性。方法随机挑选297名汉族志愿献血者,采用PCRr SSO反向杂交Luminex高分辨分型技术对其进行HLA-DRB1基因分型,同时采用血清学方法进行RhD、C、c、E、e抗体检测;并以2012年中华造血干细胞库HLA分型资料作为正常对照。结果抗体组与对照组相比,DRB1*07∶01等位基因频率显著升高(P<0.05),其它等位基因频率在2组间的差异未发现有统计学意义。结论 DRB1*07∶01等位基因可能与RhD抗体产生有关。

D^(el)型孕妇产生抗-E1例报道

目的通过对1例无输血史的Del型孕妇产生抗-E案例进行探讨,研究Del型受者D抗原同种免疫反应特点。方法对该孕妇及其丈夫和新生儿进行常规血清学Rh血型抗原检测,对该孕妇进行ABO以外抗体筛查鉴定;孕妇与其丈夫RHD基因合子型测定,对孕妇RHD基因的10个外显子分别扩增后直接测序。结果血型血清学显示3人Rh血型分别为dCCee、DCcEe、DCcEe,孕妇ABO以外抗体鉴定为阳性,存在IgG型抗-E,抗-E效价为1∶8。基因分型测定为孕妇合子型为del/d型,丈夫为D/D型,对孕妇RHD基因10个外显子的测序结果显示,只存在1227位碱基G】A的突变。

凝聚胺漏检抗-Le^a致溶血性输血反应1例

Lewis血型抗体以IgM型抗体为主，且多数Lewis抗体在37℃无活性，因此在临床上不能引起足够重视，我们就最近遇到的1例凝聚胺漏检IgG型Lea抗体致严重溶血性输血反应的案例予以报道。

西安地区RhD阴性个体RHD 711D^(el) C等位基因频率研究

目的研究西安地区RHD基因711Del C等位基因分布状况。方法应用PCR方法检测RhD阴性个体,对特殊标本进行测序分析。结果在1 492名RhD阴性个体中,检出RHD 711Del C等位基因8例(占0.54%),且均为E抗原阳性。结论获得了西安地区RHD 711Del C基因分布的初步状况,RHD基因711Del C的突变可能与E抗原有相关性。

西安地区Rh阴性个体D基因多态性的研究

目的研究西安地区RhD阴性个体的RHD基因多态性分布状况,以及Del血型与其它Rh血型表形之间的关系。方法应用PCR方法检测RhD阴性表型的个体,分析Del血型的Rh表型分布,对特殊样本进行测序分析。结果在607例样本中,检出d/d基因型428例,占70.5%;Del型125例,占20.6%;弱D15型21例,占3.2%;RHD-CE(2—9)-D/d融合基因型31例,占5.0%;DⅥⅢ型2例,占0.4%;Del血型个体中具有C抗原者比例较高,但亦有其它表型存在;鉴定出1例新的RHD无效等位基因。结论对西安地区Rh阴性无偿献血者D基因多态性进行研究,揭示了Rh阴性个体D基因多态性,既有临床意义,也有遗传学意义。

Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应研究

目的研究Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应,为建立有区别的D亚型的输血规则提供参考。方法对RhD阴性孕妇进行基因分型,并检测是否有抗-D;总结分析孕妇妊娠次数以及胎儿红细胞的检出与产生抗-D之间的相关性。结果在122名RhD表型阴性的孕妇中,检出d/d基因型97例,Del型20例,弱D15型1例,RHD-CE(2—9)-D/d融合基因型3例,DⅥⅢ型1例。在97名RhD阴性(d/d)孕妇中,有38例产生抗-D;20名Del血型孕妇均未检出抗-D;3名RhD-CE(2—9)-D/d中有2例产生抗-D;1名弱D15型的孕妇未检出抗-D;1名DⅥⅢ型孕妇抗-D检出阳性。统计分析表明孕妇的妊娠次数以及外周血中检出胎儿红细胞的检出与抗-D的产生有相关性,这可以成为Rh阴性孕妇被D抗原免疫的证据。结论不同D亚型的个体可能会对D抗原有不同的免疫反应,我们认为在中国Del血型的受者可以接收D阳性血液。建立有区别的输血规则可以节约有限的Rh阴性血资源和提高输血安全。

弱D15型D抗原同种免疫的分析研究

目的对弱D15型标本产生抗-D的原因进行探讨。方法对产生抗-D的Rh阴性标本鉴定其RHD合子型,对发现的弱D15型进行RHD基因10个外显子的测序;应用11种单克隆抗体通过流式细胞术进行弱D15型标本D抗原表位测定。结果 2例弱D15型标本,合子型显示为弱D15/d杂合,基因测序显示除了第6外显子存在845位碱基G>A的突变外,未发现其它突变;对其红细胞的D抗原表位分析显示存在抗原表位缺失。结论弱D15型存在抗原表位缺失,对D抗原会发生同种免疫,提示RhD抗原性的改变可能与空间结构改变有关。

RHCE基因编码区全长测序方法的建立

目的建立简易的RHCE基因编码区全长测序方法。方法依据RHCE基因序列的特异性,设计10对特异性引物分别扩增RHCE基因的10个外显子,同时再设计10条测序引物用于测序。将该方法用于检测3例Rh阳性标本、1例Rh阴性标本、1例D--表型标本及1例弱E表型标本。结果 10对特异性引物在统一的PCR条件下成功扩增出RHCE基因的10个外显子,3例Rh阳性标本及1例Rh阴性标本的测序序列与RHCE基因标准序列一致;D--标本PCR扩增和测序结果显示缺失第3、4和第5外显子,提示该个体携带一种新的由RHCE/RHD基因交换形成的等位基因RHCE-D(3-5)-CE;弱E标本测序结果发现在第5外显子存在一处碱基突变(762G>C),其他外显子测序结果未发现变异。结论 RHCE基因编码区全长测序方法可用于一般实验室进行RHCE基因测序。

IgG-Di^a抗体致新生儿溶血病1例

目的对1例由IgG-Di!a抗体引起的新生儿溶血病进行分析探讨。方法检测患儿及父母的ABO、Rh血型及Diego血型;对患儿进行新生儿溶血病三项实验,并检测患儿母亲血清与患儿红细胞是否反应;对患儿母亲血清及患儿红细胞放散液进行不规则抗体筛查和鉴定,同时测定不规则抗体的效价。结果患儿血型为O型C-c+D+E+e-、Di(a+),患儿母亲为O型C-c+D+E+e-、Di(a-),患儿父亲为O型C-c+D+E+e+、Di(a+);患儿新生儿溶血病检测直抗、游离、释放试验、患儿母亲血清与患儿红细胞反应均阳性,证实患儿患有新生儿溶血病;患儿母亲血清及患儿红细胞放散液中均检出IgG-Di!a抗体,患儿母亲血清中IgG-Di!a抗体效价为16。结论中国人群Di(a+)抗原的频率低,在选择对新生儿溶血病检测实验中所使用的ABO细胞、谱细胞以及不规则抗体筛查使用的筛查细胞时,应注意IgG-Di!a等低频抗体是否会存在漏检。

IgG-Jk^a联合IgG-cE、IgG-Fy^b抗体鉴定及输血策略分析

目的鉴定1例有复杂不规则抗体的标本,并探讨鉴定此类复杂不规则抗体的思路和方法及输血方案。方法对标本鉴定ABO、Rh、Duffy和Kidd等血型,采用盐水方法和间接抗球蛋白方法进行抗体筛选及鉴定抗体类型,采用盐水法、凝聚胺法和间接抗球蛋白方法进行交叉配血。结果患者血型血清学结果为O,CCDee,Jk(a±b+), Fy(a+b-);基因型结果为Jk(a-b+)和Fy(a+b-)。抗体鉴定结合交叉配血试验共检出血清中存在IgG-c、IgG-E、IgG-Fyb、IgG-Jk^a抗体,筛选以上4种抗原均为阴性的供血者与患者进行交叉配血相合后输注。结论对于复杂不规则抗体的鉴定,应当明确鉴定的思路,将多种实验技术和方法进行组合和分析,有效提高实验室解决疑难问题的能力,为临床提供相合血液,保障输血安全。