子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其通过Rac1调控子宫颈癌细胞丝状伪足的形成

目的探讨子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其临床意义,探究miR-101通过调控靶基因Rac1在子宫颈癌细胞丝状伪足形成中的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测18例子宫颈癌患者和20例健康体检者血清中miR-101的表达量。采用qRT-PCR法检测正常对照组、NC mimic组、miR-101 mimic组子宫颈癌SiHa细胞内miR-101的表达水平,并验证其转染效率。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-101与Rac1的靶向关系,并通过Western blot、qRT-PCR和免疫荧光实验检测Rac1 mRNA和蛋白表达水平。miR-101 mimic与Rac1 mimic共转染至SiHa细胞后电镜下观察丝状伪足的形成,罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察F-actin的表达。结果miR-101在子宫颈癌血清(0.54±0.06)和细胞(0.93±0.03)中低表达(P<0.01),并与子宫颈癌分化程度有关(Z=2.974,P=0.003)。miR-101靶向负调控Rac1的表达(P<0.05),即上调miR-101表达后Rac1 mRNA和蛋白表达水平均降低(0.40±0.01、0.22±0.03)(P<0.05)。上调miR-101表达后SiHa细胞丝状伪足数减少(39±3)(P<0.01),且F-actin蛋白表达明显降低,过表达Rac1可部分逆转miR-101对丝状伪足形成(57±3)(P<0.01)及F-actin蛋白的抑制作用。结论子宫颈癌患者血清中miR-101低表达与其分化程度呈负相关,miR-101靶向调控Rac1抑制子宫颈癌细胞丝状伪足的形成。