人肝癌巴马小型猪异种移植模型的建立

目的建立人肝癌巴马小型猪异种移植模型,探索人肝癌细胞是否能在猪的肝脏中存活,为建立人肿瘤细胞异种移植的大动物模型和临床肿瘤治疗、药物试验等研究奠定实验基础。方法将表达GFP的人肝癌细胞通过腹腔镜手术注入15只肝部分切除的巴马小型猪的肝实质中。实验分为3组(G0组、G1组和G2组)。G0组为对照组,巴马小型猪肝脏实行肝部分切除术后注射生理盐水;G1组巴马小型猪实施肝部分切除术后注射人肝癌细胞;G2组巴马小型猪实施肝部分切除术后注射人肝癌细胞,术后12小时饲喂免疫抑制剂。定期采集各组实验动物的外周血,检测实验动物天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的变化,检测血清中是否存在人类甲胎蛋白(AFP)。对巴马小型猪的肝脏进行取材,苏木素-伊红(HE)染色后镜下观察猪肝组织病理学特征。对实验组进行绿色荧光蛋白(GFP)免疫组织化学染色,检测组织中是否有人肝癌细胞的嵌合。结果各组巴马小型猪的AST和ALT指标在术后14天恢复到术前水平。GFP免疫组织化学结果显示在G1组和G2组巴马小型猪的肝脏中均能检测到人肝癌细胞。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果显示在实验组的外周血中可以检测到人AFP的表达,且G2组与G1组相比,差异具有统计学意义[AFP(μg/L):39.54±20.30比13.77±7.52,P<0.05]。HE染色结果显示G1组肝组织出现淋巴细胞浸润和肝细胞坏死。结论通过猪肝原位移植人肝癌细胞的方法可以建立人肝癌巴马小型猪异种移植模型。免疫抑制剂能促进移植的细胞存活。

基于CDIO模式的组织学与胚胎学教学改革

组织胚胎学是医学教学中的基础内容,所授知识是后续医学相关课程的学习基础。因此,对于组织学与胚胎学的教学具有重要意义。随着时代的不断发展,教育目的更加关注了对学生自身素质的教育,从卓越医生的培养目标出发,考虑引入国际优秀教育理念以弥补传统教学方式的不足,而CDIO符合这种需求,CDIO教育模式是近年来国际工程教育改革的最新成果,考虑把CDIO模式引入到组织胚胎学课程教学体系中,从教学内容、教学方法、考核考试等多方面提出有效的教学改革措施,建立一种基于CDIO的组织胚胎学教学模式。这种教学模式可以提高学生的学习热情,对培养学生的综合实践能力起到积极的作用,是解决目前组织胚胎学课程教学中遇到的问题较好的解决方法。

小鼠孤雌胚胎干细胞的建立及其向运动神经元分化的初探

文章采用小鼠的孤雌囊胚建立胚胎干细胞系,探究其向运动神经元分化的可能,为临床治疗以及研究基因组印记与神经分化的的关系提供理论基础。结果表明:卵母细胞孤雌激活率达到93.26%,成功建立了8个孤雌胚胎干细胞系,建系率达到23.53%。克隆表达多潜能标记Oct4及细胞表面标记SSEA-1,有高水平的碱性磷酸酶活性,在细胞第10代和第30代时核型分析检测显示为正常的40条染色体。体内、外均分化出三胚层来源的细胞。联合应用全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)及细胞外基质,小鼠孤雌胚胎干细胞可被诱导表达运动神经元的标志性标记HB9、Olig2。

人包皮成纤维细胞来源的多能性干细胞的建立

目的探讨人包皮成纤维细胞重编程为诱导多能性干细胞(iPSCs)的方法。方法利用反转录病毒携带绿色荧光蛋白(GFP)作为指示,转导到人包皮成纤维细胞中,确定最佳的病毒感染剂量,应用经典的Yamanaka方法,联合小分子物质组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸盐(VPA)诱导人包皮成纤维细胞为多能性干细胞。通过碱性磷酸酶(AKP)染色及免疫荧光细胞化学方法,检测人胚胎干细胞多能性标记物在所建立的诱导多能性干细胞(iPSCs)中的表达,RT-PCR检测拟胚体(EB)三胚层特异基因的表达。结果以GFP作为指示,建立了高效的反转录病毒感染体系,将人包皮成纤维细胞重编程为iPSCs;所建立的iPSCsAKP染色阳性,表达人胚胎干细胞多能性标记物OCT4、TRA-1-60和TRA-1-81,体外诱导分化后具有三胚层特异基因的表达;小分子物质VPA的添加并未显著提高重编程效率。结论在GFP所指示的最佳病毒感染剂量下,联合小分子物质VPA成功建立了人包皮成纤维细胞来源的iPSCs。

孤雌胚胎干细胞来源的诱导多能干细胞的建立及对印记基因表达的影响

目的通过诱导多能干细胞(i PSCs)技术重编程孤雌胚胎干细胞,探讨i PSCs技术对孤雌胚胎干细胞的多能性及印记基因的影响。方法从孤雌激活的囊胚中建立了孤雌胚胎干细胞;利用反转录病毒将多能性转录因子转入孤雌胚胎干细胞中,建立孤雌i PS细胞。结果建立的孤雌来源的i PS细胞体内外分化能力与孤雌胚胎干细胞的差别无显著性;Real-time PCR结果显示,孤雌i PS细胞母源印记基因的表达明显高于孤雌胚胎干细胞,父源印记基因表达下降,多能性基因表达升高。结论 i PSCs技术能影响基因的表达,尤其是印记基因,印记使其更接近于正常受精来源的胚胎干细胞中印记基因水平。

人肝癌HepG2细胞小鼠荷瘤模型的建立及免疫耐受的探讨

目的建立正常免疫背景小鼠的人肝癌荷瘤模型,探讨人肿瘤细胞与胎鼠异种嵌合产生的免疫耐受。方法用绿色荧光蛋白(GFP)标记人肝癌细胞系Hep G2,将GFP-Hep G2细胞注射入孕16.5d的胎鼠腹腔内,观察新生小鼠腹腔内荷瘤情况及酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清人甲胎蛋白(AFP)含量;小鼠成年后进行皮下成瘤实验及流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群变化。结果观察到经胎鼠腹腔注射的人GFPHep G2细胞在新生鼠体内种植并生长于肝脏,分泌人甲胎蛋白;皮下荷瘤实验观察到经胎体注射GFP-Hep G2细胞诱导免疫耐受后,部分小鼠成年后仍可支持皮下Hep G2细胞荷瘤,流式细胞术检测表明,诱导耐受后的小鼠免疫系统仍对人肝癌细胞保留有较弱的攻击。结论通过胎鼠腹腔注射人GFP-Hep G2细胞可以建立人肝癌细胞小鼠荷瘤模型,部分荷瘤后的小鼠具有免疫耐受的能力。

基础医学硕士新生培养策略探讨

基础医学发展离不开硕士研究生的工作,但在其培养过程中,尤其是研究生新生阶段,会出现学习盲目、动手能力差、自律性差等问题。针对这些问题,学校应当开展公共技术平台课、热门科研课题讲座等;导师应多与学生沟通、进行"一对一"责任制和给予学生物质精神奖励等;并指导学生应有明确的实验目的、实验计划并学会"学习"。

诱导多能干细胞技术及应用研究的进展

2006年，Yamanaka等人^[1]从24个候选转录因子中优选出4因子（Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4）导入胎鼠成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）中，建立了与小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stemcells，mESCs）具有相似特性的细胞系，即诱导多潜能干细胞（iPs）。2007年，他们^[2]再次使用该四因子，成功地建立了人iPS细胞系。由于iPS既避免免疫排斥，又不涉及伦理道德问题，因此具有广泛且重要的临床应用价值。本文回顾了过去几年在iPS细胞研究领域中的新发现，并对这项技术的临床应用进行了展望。

如何提高本科生基础医学课程的课堂注意力

基础医学是现代医学的基础,其所研究的人体正常与疾病状态下的形态和规律被其他所有临床医学所应用。但近年来基础医学课程的课堂上出现了学生注意力涣散的现象。基础医学课程课堂上学生注意力分散的原因来自方方面面,应该从教学管理、教师和学生等多个角度努力解决。

不同分化阶段诱导性多能干细胞移植实验研究进展

诱导性多能干细胞(i PSCs)是由动物体细胞重编程得到的具有胚胎干细胞特性的全能干细胞。近年来,随着多能干细胞诱导技术的不断优化以及体外分化技术的飞速发展,多种分化状态的多能干细胞被用于移植实验。我们结合最新研究进展,阐述各种分化阶段诱导性多能干细胞用于动物移植治疗的优缺点,以及最新移植方法所存在的问题。

不同分化阶段多能干细胞移植实验研究进展

诱导多能干细胞是由动物体细胞重编程得到的,具有胚胎干细胞特性的全能干细胞。近年来,随着多能干细胞诱导技术的不断优化,以及体外分化技术的飞速发展,多种分化状态的多能干细胞被用于移植实验。我们结合最新研究进展,阐述各种分化阶段i PS细胞用于动物移植治疗的优缺点,以及最新移植方法所存在的问题。

BMSC分泌SDF-1对脊髓损伤神经元存活及神经突生长的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对损伤的脊髓神经元存活及神经突生长的影响。方法利用脊髓损伤部位组织提取液处理神经元,建立细胞损伤模型。将BMSC与损伤神经元共培养,通过免疫细胞化学染色、MTT等实验手段检测神经元的存活及神经突的生长情况。为了确定BMSC是否通过分泌SDF-1发挥作用,我们应用RNAi技术沉默BMSC中SDF-1基因的表达,进一步选用SDF-1受体CXCR4、CXCR7的阻断剂AMD3100和CCX771,再次检测各组中神经元的存活及神经突的生长情况,探讨SDF-1可能的作用途径。结果与损伤神经元单独培养组相比,BMSC和损伤神经元共培养组中,神经元存活的数量提高,神经突的长度增长,差异显著(P<0.05)。shS DF-1 BMSC和损伤神经元共培养组中,神经元存活数量、神经突的长度也有所增加,但无显著性差异(P>0.05)。同时,CXCR4受体阻断剂抑制了BMSC对神经元的保护作用及对神经突生长的促进作用,而CXCR7受体阻断剂的影响不明显。结论 BMSC分泌SDF-1促进损伤神经元的存活及神经突的生长,该作用可能通过CXCR4受体途径实现。

巴马小型猪胎儿成纤维细胞重编程为诱导多能性细胞的研究

目的探讨巴马小型猪胎儿成纤维细胞重编程为诱导多能性细胞的方法。方法应用经典的逆转录病毒介导方法,将Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4四种人源性转录因子转导入巴马小型猪的胎儿成纤维细胞中,建立形态和特征类似猪上胚层细胞来源的猪多能性细胞(pig induced pluripotent cells,piPCs)。免疫荧光化学方法检测多能性细胞标记物,RT-PCR检测了该细胞体外三胚层相关基因表达水平。结果巴马小型猪胎儿成纤维细胞重编程的piPCs细胞呈AKP染色阳性,体外长期传代都保持正常的染色体核型,猪上胚层多潜能性细胞标记分子Oct4,Sox2,Nanog,Tra-1-60,Tra-1-81和SSEA-4呈阳性表达,并且表达小鼠胚胎干细胞(ES)多潜能性细胞标记分子SSEA-1,体外诱导分化后具有三胚层特异基因的表达,但是体内分化能力存在缺陷。结论巴马小型猪胎儿成纤维细胞重编程成功诱导成多能性细胞。

诱导多能干细胞在孤独症谱系障碍相关的神经发育性疾病中的研究进展

孤独症谱系障碍(ASD)是一种复杂的遗传性疾病,以重复刻板行为、社交互动障碍和语言受损为主要特征,常伴有大脑发育障碍。在涉及ASD的数百个基因中,某些与突触功能、脑神经网络连接异常、核小体包装等相关的基因分子机制已被发现。诱导多能干细胞(iPSCs)技术提供了一种用以精确模拟遗传神经发育障碍的工具。通过iPSCs技术可以获得患者特异性细胞系,并将其分化成特定的细胞亚型,如神经前体细胞、神经元,该技术推动了关于ASD等神经发育障碍疾病的病理研究和治疗靶点的验证。本文中综述了iPSCs诱导分化的神经元在ASD相关神经发育障碍疾病中应用的研究进展,并提出iPSCs在诱导产生神经元方面的不足及对未来研究前景的展望,如常间回文重复序列丛集/常间回文重复序列丛集关联蛋白(CRISPR/Cas)技术与iPSCs技术结合寻找胚胎时期疾病发生靶点,以期实现疾病的早期干预治疗。

曲细精管内移植多能干细胞的研究

近年来,干细胞体内分化的研究得到了广泛的开展,其中干细胞曲细精管内移植与分化的相关研究取得了令人瞩目的进展,常用的曲细精管内移植的方法有曲细精管注射法、睾丸输出管注射法和睾丸网注射法,各有优缺点。所移植的细胞可以为精原干细胞、体外分化的胚胎干细胞和诱导多能性干细胞及成体干细胞,从而为研究睾丸细胞功能、生物学特性及更好地保存个体基因组和治疗某些疾病所引起的少精子症、无精子症提供强而有力的生物学工具。

立体培养技术制造器官

人类可移植器官短缺的问题一直未能解决,体外再造人体器官的探索也一直没有停止。目前人们已可以在体外通过立体培养方法得到有功能的器官或是类器官。不同于传统的平面培养,立体培养可以使细胞与周围细胞或组织环境产生联系,形成立体的、相互紧密连接并通信协作的组织结构,进而共同发育形成器官。这为人类器官的体外再造提供了新思路。本文对现有的立体培养方案进行了分类叙述、分析及总结,并对下一步的发展进行了展望。

CRISPR/Cas9介导的疾病模型构建与基因修复研究进展

近年来,可编程核酸酶介导的基因编辑技术迅猛发展。CRISPR/Cas9技术源于细菌和古生菌的适应性免疫系统,主要由Cas9内切酶和向导RNA(guide RNA,gRNA)组成。Cas9内切酶在gRNA的指导下造成DNA的双链断裂,从而使研究人员能够精准高效地操纵特定基因组位点。同时,该系统可以揭示基因在疾病进程中所扮演的未知角色,在临床治疗中有应用潜能。现总结了CRISPR/Cas9技术在疾病模型构建与基因修复领域应用的研究进展。

猪来源异种细胞移植临床前研究进展

目的总结猪来源异种细胞移植临床前研究的进展。方法广泛查阅近年来与猪来源异种细胞移植临床前研究相关的文献,对研究进展进行总结分析。结果随着新型免疫抑制剂的应用及转基因猪的产生,猪来源的神经细胞、胰岛细胞、肝细胞和各种类型干细胞的异种移植研究取得了较大进展。猪来源异种细胞在受体体内存活时间大大延长,但距临床应用还有较长距离。结论猪来源充足,在细胞数量上能够得到充分保障,还具有可重复性。但如何更有效避免排斥反应、延长移植细胞在宿主体内存活时间及避免种间病毒传播仍是猪来源异种细胞移植研究重点。