优化溃结方对溃疡性结肠炎气滞血瘀模型大鼠的影响及其作用机制研究

背景经验方优化溃结方能有效提高溃疡性结肠炎(UC)患者生活质量,促进肠黏膜愈合和临床缓解,但其作用机制尚不完全明确。目的探讨优化溃结方对UC气滞血瘀模型大鼠的影响及其作用机制。方法2023年9—10月,选取SPF级雄性SD大鼠70只并采用随机数字表法将其随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组,每组10只。采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇二次致炎法结合束缚法建立UC气滞血瘀模型。正常组大鼠在造模时使用0.9%氯化钠溶液灌肠,并与其他组大鼠进行同步抓取、固定,在造模成功后给予等体积水灌胃,1次/d,共灌胃14次;模型组大鼠在造模成功后给予等体积水灌胃,1次/d,共灌胃14次;柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组大鼠分别在造模成功后给予柳氮磺胺吡啶药液0.54 g/kg灌胃、低剂量优化溃结方药液0.837 g/kg、标准剂量优化溃结方药液1.674 g/kg灌胃、黄芪药液1.8 g/kg、红花药液0.9 g/kg,均为1次/d,均灌胃14次。采用高精度透射电镜观察7组大鼠干预后结肠组织超微结构变化,并比较7组大鼠干预后结肠组织趋化因子受体4(CXCR4)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、转化生长因子激酶1(TAK1)表达水平。结果低剂量组、标准剂量组大鼠干预后结肠组织超微结构趋于正常。模型组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值、mRNA相对表达量高于正常;柳氮磺胺吡啶组、低剂量组、标准剂量组、益气组、活血组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值、mRNA相对表达量低于模型组(P<0.05);标准剂量组大鼠干预后结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1蛋白灰度比值低于柳氮磺胺吡啶组,活血组大鼠干预后结肠组织VEGFA、TAK1 mRNA相对表达量低于柳氮磺胺吡啶组(P<0.05)。结论优化溃结方及其益气、活血组分可有效降低UC气滞血瘀模型大鼠结肠组织CXCR4、VEGFA、TAK1表达水平,其治疗作用可能是益气组分、活血组分通过协同调节结肠组织中CXCR4、VEGFA、TAK1表达水平而实现。

优化溃结方对溃疡性结肠炎大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB信号通路的影响

目的观察优化溃结方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR/MyD88/NF-κB)信号通路的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、优化溃结方组、柳氮磺吡啶组,每组10只。除空白组外,其余3组均参考三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇二次致炎法结合束缚法建立UC气滞血瘀型大鼠模型。造模成功后优化溃结方组大鼠予优化溃结方药液1.674 g/(kg·d)灌胃,柳氮磺吡啶组大鼠予柳氮磺吡啶药液0.54 g/(kg·d)灌胃,空白组、模型组不予任何治疗。14天后检测各组大鼠血清白细胞介素17A(IL-17A)、IL-10、IL-22水平,结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达水平。结果与空白组相比,模型组血清IL-17A、IL-22水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,优化溃结方组、柳氮磺吡啶组IL-17A、IL-22水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05);优化溃结方组IL-17A、IL-22、IL-10水平与柳氮磺吡啶组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组相比,模型组结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,柳氮磺吡啶组、优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达与柳氮磺吡啶组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论优化溃结方可能通过调节TLR/MyD88/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,减轻炎症反应,修复结肠组织的超微结构,从而修复UC大鼠结肠黏膜屏障功能。

基于16S rDNA测序技术探索优化溃结方治疗溃疡性结肠炎的机制

目的从肠道菌群角度分析优化溃结方治疗溃疡性结肠炎(UC)的基本原理。方法采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇二次致炎法结合束缚法制备UC大鼠模型。将24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、优化溃结方组、柳氮磺胺吡啶组,每组6只。分析4组大鼠治疗前后结肠炎疾病活动指数(DAI),粪便标本菌群的变化。结果与模型组比较,优化溃结方组、柳氮磺胺吡啶组DAI均差异有显著性(P<0.05)。柳氮磺胺吡啶组与优化溃结方组DAI评分比较,无差异(P>0.05)。正常组与模型组存在显著差异的菌属,排名前9位的属水平OTU分别为粪杆菌(Faecalibacterium)、经黏液真杆菌属(Blautia)、狭义梭菌属1(Clostridium sensu stricto 1)、异杆菌属(Allobaculum)、拟杆菌(Bacteroides)、Ruminococcaceae.UCG.013、苏黎世杆菌属(Turicibacter)、乳酸菌(Lactobacillus)、罗姆布茨菌(Romboutsia)。给予优化溃结方治疗后,厚壁菌门、芽孢杆菌纲、乳杆菌目、乳杆菌科、双歧杆菌科、格氏乳杆菌种、鼠乳杆菌种、乳酸菌属相对丰度显著增加(P<0.01);拟杆菌门、变形菌门、梭状芽孢杆菌纲、拟杆菌纲、丹毒丝菌纲、γ变形菌纲、梭菌目、丹毒丝菌、拟杆菌属、Turicibacter、狭义梭菌属1、Ruminococcaceae UCG-013相对丰度显著减少(P<0.01)。优化溃结方组治疗后罗姆布茨菌属、异杆菌属、苏黎世杆菌属多于柳氮磺胺吡啶阳性药组。结论优化溃结方通过增加UC气滞血瘀模型SD大鼠肠道有益菌、减少有害菌的相对丰度,改变肠道细菌数量,降低DAI,降低肠道炎性反应,从而治疗疾病。