比索洛尔通过ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路改善缺血再灌注诱导的H9C2心肌细胞损伤的研究

目的:探讨比索洛尔对缺血再灌注(I/R)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将H9C2心肌细胞分为对照组(Control组)、缺氧/复氧(H/R)模型组(Model组)、比索洛尔组(Bisoprolol组)、比索洛尔+凋亡信号调节激酶1(ASK1)重组蛋白组(Bisoprolol+ASK1组)。除Control组外,其余各组H9C2心肌细胞均进行H/R损伤处理。采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测细胞活力;采用流失细胞术检测细胞凋亡;采用酶联免疫吸附试验检测细胞中心肌损伤标志物[乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)]和炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;采用激光共聚焦检测细胞中钙离子浓度;采用蛋白质印迹法检测细胞中ASK1-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Model组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Model组比较,Bisoprolol组和Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均升高,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Bisoprolol组比较,Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:比索洛尔能够通过抑制炎症反应和钙超载,改善I/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路激活有关。

比索洛尔预处理通过调控ERK1/2途径抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和纤维化

目的探讨比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和纤维化的影响,并分析分子机制。方法构建缺氧/复氧细胞模型,将H9c2细胞分为对照组、模型组、比索洛尔组、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路激活剂(LM22B-10)组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫印迹法(Western blotting)法检测凋亡蛋白、纤维化蛋白和ERK1/2信号通路蛋白表达。结果与模型组比较,比索洛尔组H9c2细胞中LDH和CK-MB水平、细胞凋亡率,切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、I型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达以及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)/(ERK1/2)比值显著降低;细胞活力,B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)蛋白表达显著升高(P<0.05)。与比索洛尔组比较,LM22B-10组H9c2细胞中LDH和CK-MB水平、细胞凋亡率,Cleaved Caspase-3、Bax、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA、MMP-9蛋白表达以及(p-ERK1/2)/(ERK1/2)比值均显著升高,细胞活力,Bcl-2、TIMP-1蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论比索洛尔预处理通过抑制ERK1/2信号通路活化减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和纤维化。