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甲型流感病毒H1N1亚型HA基因的克隆及序列分析
1
作者
钟媚共
邱贤秀
+2 位作者
向阳飞
吴崇超
王一飞
《山东医药》
CAS
2013年第4期1-3,7,共4页
目的克隆甲型流感病毒H1N1亚型血凝素HA基因,并对其进行序列分析。方法利用TRIzol Rea-gent法提取甲型流感病毒H1N1亚型的总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增HA基因,经酶切、连接后,构建pET 28a(+)-HA重组质粒。利用生物信息学工具对H...
目的克隆甲型流感病毒H1N1亚型血凝素HA基因,并对其进行序列分析。方法利用TRIzol Rea-gent法提取甲型流感病毒H1N1亚型的总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增HA基因,经酶切、连接后,构建pET 28a(+)-HA重组质粒。利用生物信息学工具对HA的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果成功构建了pET 28a(+)-HA重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的HA基因序列同源性达到99%。结论对HA基因进行克隆及生物信息学的分析,为深入研究HA在病毒侵入细胞及抗原变异中的作用机制及后续HA抑制剂的体外筛选奠定基础。
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关键词
流感病毒
H1N1亚型
血凝素
克隆
序列分析
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职称材料
蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化
被引量:
1
2
作者
杨辉
吴崇超
+5 位作者
陈佳
陈伟
杨依丽
罗勇
姚冬生
熊盛
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期116-120,共5页
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。...
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度>98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。
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关键词
蓝藻抗病毒蛋白-N
连接肽
发酵
纯化
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职称材料
蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测
被引量:
1
3
作者
陈佳
吕芬
+5 位作者
吴崇超
彭舟
魏博
杨辉
陈伟
熊盛
《安徽农业科学》
CAS
2013年第8期3323-3326,共4页
[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(...
[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。
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关键词
蓝藻抗病毒蛋白N
流感病毒
GP120
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职称材料
题名
甲型流感病毒H1N1亚型HA基因的克隆及序列分析
1
作者
钟媚共
邱贤秀
向阳飞
吴崇超
王一飞
机构
暨南大学生物医药研究开发基地
暨南大学药学院
出处
《山东医药》
CAS
2013年第4期1-3,7,共4页
基金
国家自然科学基金广东联合基金(U0632010)
广东高校皮肤黏膜释药制剂产学研结合示范(暨研究生创新培养)基地(cgzhzd0905)
文摘
目的克隆甲型流感病毒H1N1亚型血凝素HA基因,并对其进行序列分析。方法利用TRIzol Rea-gent法提取甲型流感病毒H1N1亚型的总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增HA基因,经酶切、连接后,构建pET 28a(+)-HA重组质粒。利用生物信息学工具对HA的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果成功构建了pET 28a(+)-HA重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的HA基因序列同源性达到99%。结论对HA基因进行克隆及生物信息学的分析,为深入研究HA在病毒侵入细胞及抗原变异中的作用机制及后续HA抑制剂的体外筛选奠定基础。
关键词
流感病毒
H1N1亚型
血凝素
克隆
序列分析
Keywords
influenza virus
subtype H1N1
hemagglutinin
cloning
bioinformatics analysis
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化
被引量:
1
2
作者
杨辉
吴崇超
陈佳
陈伟
杨依丽
罗勇
姚冬生
熊盛
机构
暨南大学生物医药研究开发基地
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期116-120,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(30873082)
中央高校基本科研专项资金项目(21610709
21610506)
文摘
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度>98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。
关键词
蓝藻抗病毒蛋白-N
连接肽
发酵
纯化
Keywords
Cyanovirin-N Linker Fermentation Purification
分类号
TQ936.2 [化学工程]
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职称材料
题名
蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测
被引量:
1
3
作者
陈佳
吕芬
吴崇超
彭舟
魏博
杨辉
陈伟
熊盛
机构
暨南大学生物医药研究开发基地
出处
《安徽农业科学》
CAS
2013年第8期3323-3326,共4页
基金
"重大新药创制"科技重大专项"十二五"计划第二批课题(2012ZX09103-301-033)
暨南大学科研培育与创新基金(11611206)
文摘
[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。
关键词
蓝藻抗病毒蛋白N
流感病毒
GP120
Keywords
Cyanovirin-N
Influenza virus
GP120
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甲型流感病毒H1N1亚型HA基因的克隆及序列分析
钟媚共
邱贤秀
向阳飞
吴崇超
王一飞
《山东医药》
CAS
2013
0
下载PDF
职称材料
2
蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化
杨辉
吴崇超
陈佳
陈伟
杨依丽
罗勇
姚冬生
熊盛
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
下载PDF
职称材料
3
蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测
陈佳
吕芬
吴崇超
彭舟
魏博
杨辉
陈伟
熊盛
《安徽农业科学》
CAS
2013
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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