von Willebrand因子的分子生物学研究

von Willebrand因子(vWF)是1个大分子血浆糖蛋白,在调节血小板粘附于受损血管壁的过程中起关键的作用。同时,vWF还是血浆因子Ⅷ的载体,具有稳定因子Ⅷ活性的功能。本文主要讨论vWF的分子结构、生物合成、生理功能及其病理状态——血管性假血友病(vWD)的基因缺陷。 vWF的分子结构 vWF的互补DNA(cDNA)基因于1985年分别在4个不同的实验室克隆成功,这一进展大大地推动了vWF分子及其基因结构的研究。现已知道,vWF基因位于第12位染色体短臂(12 p12 12pter),全长150-200个千碱基对(kb),其中至少包括36个外显子,转录的vWF m RNA长约9.0kb,翻译1条2813个氨基酸的多肽链。

dsPAα1的缺失突变体的构建及其活性

纤溶酶原激活剂dsPAα1(Desmodusrotundussalivaryplasminogenactivatoralpha 1)从吸血蝙蝠(Desmodusrotundus)唾液中提取 ,它包括Finger、EGF、Kringle和蛋白酶区 .dsPAα1的功能可能与其分子结构相关 ,特别是其Finger区和EGF区 .构建、表达了缺失Finger和EGF区的dsPAα1的缺失突变体 (dsPK) ,研究dsPAα1的结构与功能的关系 .Western印迹检测 ,转染后细胞上清见dsPK条带 ;用小分子底物S2 76 5测定dsPAα1和dsPK的酶动力学常数 ,在无纤维蛋白存在下 ,两者的Km 和kcat Km基本一致 .但在纤维蛋白存在下 ,dsPAα1的kcat Km 值增加了 3 9倍 ,而dsPK仅增加了 1 6倍 ;溶栓试验显示dsPK具有溶栓作用 ,但溶栓作用显著低于dsPAα1;PAI 1对dsPAα1和dsPK具有同等的抑制作用 .

一种快速分离真核细胞RNA的方法

以改良的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿法从真核细胞中制备RNA,经琼脂糖微电泳检查,可清楚见到三条真核细胞核糖体RNA带(28S,18S,和5S);经Norther blot检测可见未降解的1.9Kb肌动蛋白mRNA杂交区带。该法具有快速、简便、产率和纯度均较高等优点。

DNA抽提与基因探针标记的几种方法比较

比较了苯酚—氯仿、NP—40和盐酸胍3种不同的 DNA 抽提方法,并对基因探针标记同位素掺入法(缺口平移法和随机引物法)和非同位素掺入法在单拷贝基因检测中的应用进行了探讨。

新辅助化疗联合腹腔温热灌洗预防胃肠道癌术后复发

1999年1月起我们将新辅助化疗与术中腹腔温热灌洗化疗联合应用于进展期胃肠道癌手术病人，取得较好的疗效，报道如下。

阑尾炎性疾病并存结肠癌的诊断体会

目的：提高对急、慢性阑尾炎及阑尾脓肿(以下简称：阑尾炎性疾病)并存结肠癌的认识。方法：回顾近15a来在阑尾炎性疾病手术前中后发现的32例结肠癌患者的诊断经过，分析二者之间的相互关系。结果：在32例结肠癌患者中术前检查发现癌肿14例(43．75％)，术中发现12例(37．50％)，术中不能判断4例(12．50％)，漏诊2例(6.25％)，拒绝检查2例(6．25％)。病理分期：DukesB期13例、DukesC期16例、DukesD期3例：其中根治性切除26例(81．25％)、姑息性切除4例(12．5％)、肿瘤旷置2例(6.25％)。结论：提高对40a以上阑尾炎性疾病患者可能合并结肠癌的认识，加强术前术后肠道检查及术中的探查，可较早发现结肠癌，增加根治性手术切除率，有助于提高大肠癌的5a生存率。

高龄急腹症病人的围术期处理体会（附73例报告）

随着人类平均寿命的增加。需要外科处理的高龄病人亦相应增加，尤其是高龄急腹症病人增加更为明显。由于此类病人年龄大。往往合并心、肺、肝、肾及内分泌系统疾病。在围手术期处理中有特殊性。面将我科1997—01／2000—10治疗的73例此类病入的体会报告如下。

应用凝血因子Ⅷ基因内XbaⅠ/FⅧ_(E22)RFLP对甲型血友病携带者的诊断

用FⅧ基因内第22外显子FⅧ_(E22)为探针,分析苏州地区正常人XbaI/FⅧ_(E22)RFLP,显示出9.6/4.8Kb 的多态性,频率为0.36/0.64.PIC 值为0.46。并以此为基础对1例甲型血友病携带者进行检测。

基因探针在大肠杆菌中的扩增及其提纯

本文报道了基因探针在大肠杆菌中的扩增与提纯方法。含基因探针的质粒用氯化钙方法转染大肠杆菌,被转染的细菌与质粒在培养液中同步扩增,然后用碱裂解法抽提扩增后的质粒。结果表明:(1)质粒的转化效率与其浓度有关;(2)经转染、扩增与抽提后,获得了大量的纯化质粒DNA;(3)纯化后的基因探针能满意地用于DNA 标记及分子杂交。

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶的最新研究进展

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSPs)是一类通过氨基末端跨膜区域锚定在细胞膜上的丝氨酸蛋白酶。激活后的TTSPs通过其特异性底物参与多种生理和病理过程,功能异常可导致肿瘤、耳聋、缺铁性贫血、心血管疾病等。

人脐静脉内皮细胞体外培养的影响因素

人脐静脉内皮细胞体外培养对于血管内皮细胞的结构和功能研究提供了一条十分有效的途径。本文研究了影响人脐静脉内皮细胞体外培养的几个因素。实验提示:存活细胞数随脐带离体时间而减少,脐带离体24h 尚有50%的存活细胞;培养液中血清的最适浓度为10～16%;胶原和纤维结合蛋白等细胞外基质成分均有利于内皮细胞粘附和生长;肝素。

聚合酶链反应条件控制与优化

聚合酶链反应作为一种强有效的DNA 体外扩增技术,已被广泛地应用于一些遗传性疾病的临床基因诊断。然而,它对反应条件的变化颇为敏感.本文观察了不同反应物成分及时间/温度参量对聚合酶链反应产量和特异性的影响.通过探讨这些因素如何影响扩增结果,以及它们之间在扩增过程中如何相互作用等问题,加深了对影响条件优化的相互关联的各生物化学及生物物理参量的理解,为优化扩增条件提供依据。

深反射大炮揭示的青藏高原侧向碰撞带地壳骨架结构

青藏高原东南缘处于印度板块与欧亚板块碰撞的侧翼,揭示该地区的岩石圈结构有助于完整理解青藏高原碰撞造山的动力学过程,对构建大陆碰撞成矿理论框架至为关键.本研究对横过青藏高原侧向碰撞带的一条深反射地震剖面的15个大炮资料,进行了针对性静校正、去噪等处理和单次叠加成像,结果剖面显示了侧向碰撞带岩石圈结构的骨架特征:(1)双程走时(TWT)8~10 s的强反射(Tc)将地壳分为上、下两层;Tc可能是大型滑脱构造的拆离面,其存在使上地壳的变形与下地壳解耦;(2)Moho间断面反射(Tm)为3~4个同相轴的窄带反射波组,横向不连续,与深大断裂交汇处被错断,但断距不大;(3)在兰坪—思茅地块下方TWT21 s和扬子克拉通西缘下方TWT22~24 s存在相向倾斜的反射波组(TL);以Tc、Tm和TL构成的骨架结构,定性地描绘出剖面下方岩石圈地幔以汇聚为主、地壳块体以侧向滑移为主和上地壳为薄皮逆冲或滑脱的分层动力学模式.该岩石圈变形样式明显不同于以正向碰撞挤压、地壳缩短垂向增厚为主的“冈底斯模式”.

青藏高原东南缘壳幔结构探测研究新进展

青藏高原东南缘的岩石圈变形特征和动力学过程显著不同于以正向碰撞为主要形式的青藏高原本体。其变形样式在地壳浅部以侧向滑移为主,并伴随一系列尚待揭示的深部过程。毫无疑问,青藏高原东南缘的岩石圈结构探测研究是理解青藏高原碰撞造山、深部动力学过程不可或缺的重要环节。而揭示与侧向碰撞变形的深部过程相伴生的成矿带的岩石圈三维结构和深部动力学背景,对大陆碰撞成矿理论框架的完整性至为关键。通过对青藏高原东南缘的壳幔结构探测研究成果和基本认识进行了较系统的梳理,重点介绍青藏高原东南缘及邻区深部结构地震学探测研究近十几年的新进展、新认识,主要涉及壳幔结构的天然地震成像、人工源地震探测剖面和深部动力学等研究方向,供对青藏高原地学研究感兴趣的地质科研人员参考。

冬小麦氮磷营养特征及其与土壤养分动态变化的关系

通过田间试验 ,研究了冬小麦氮、磷营养特征、土壤养分的动态变化及二者的关系。结果表明 ,返青前冬小麦吸收氮、磷很少 ,返青后均迅速增多 ,至孕穗～灌浆初期达一生吸收的高峰 ( N0 P0 吸氮在拔节～孕穗阶段达高峰 )。灌浆以后 ,氮磷营养不同 ,磷素吸收仍维持较高水平 ,而且灌浆初期至成熟阶段积累的磷素所占比值较大 ;氮素则积累减少 2 8.2 7%～ 3 1 .1 9%。越冬前至返青期 ,土壤碱解氮和速效磷均比较稳定。返青后氮磷变化明显不同 ,碱解氮显著减小 ,并于灌浆初期出现最低值 ;而速效磷明显增大 ,且于孕穗期出现一峰值。相关分析表明 ,冬小麦吸收氮。

老年人腹腔镜胆囊切除术54例

我院自1998年6月至2002年2月共完成电视腹腔镜胆囊切除术(LC)400例，其中老年人54例，现将老年胆囊疾病病人行LC手术处理问题分析如下。

从绒毛细胞中抽提DNA的体会

近年来应用孕早期的绒毛组织作DNA分析,对某些遗传性疾病进行产前诊断,具有早期,快速、准确的优点。DNA 分析的第一步就是要从绒毛细胞中抽提NDA。

应用凝血因子Ⅷ基因多态性产前诊断血友病甲

以凝血因子Ⅷ重组基因克隆 FⅧ_(E18—st14)为探针,用限制性内切酶 Taq I 酶解后所产生的限制性片段长度多态性(RFLP)连锁分析,成功地对1例血友病甲高危胎儿进行了产前基因诊断,排除了血友病甲的可能,使妊娠得以继续进行。另外,对该家系的血友病发病机制进行了分析与探讨。

北方寒区温度对苜蓿青贮的发酵品质及营养成分影响

研究旨在探讨北方寒区温度对紫花苜蓿青贮发酵品质及营养成分的影响,采用小规模双因素设计(温度×贮藏时间),设置常温组[(25±2)℃,RT组]与低温组[(4±2)℃,LT组],分别在青贮1、3、5、7、15、30 d与60 d开封取样,分析感官品质以及青贮过程中营养成分、发酵品质和微生物变化。结果表明:随着青贮时间的延长,LT组青贮颜色、质地、气味等感官变化与常温青贮相比均较为缓慢,蛋白质(CP)和干物质(DM)损失量在30 d后趋于稳定,中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量随贮藏时间的延长呈下降趋势,但青贮30 d和60 d无显著差异;两组pH均呈现下降趋势,与青贮1 d相比,RT组在青贮7~30 d时pH显著下降(P<0.05),30 d与60 d时差异不显著(P>0.05),说明30 d青贮发酵基本趋于稳定;两组的乳酸(LA)、乙酸(AA)、丙酸(PA)和氨态氮/总氮(NH3-N/TN)值均呈上升趋势,RT组LA含量从7 d开始显著高于LT组(P<0.05);两组乳酸菌数量均呈现明显的上升趋势(P<0.05),在30 d到达顶点;15 d后,LT组乳酸菌数量显著低于RT组(P<0.05),RT组好氧性细菌数量在1~3 d内呈上升趋势,3 d后开始下降(P<0.05)。由此说明,低温季节或地区不利于紫花苜蓿常规青贮,需要在青贮中添加耐低温乳酸菌以改善发酵品质。