高职教师在课程资源开发中的现实处境及其成因分析

高职教师参与高职课程资源开发对于促进高职教师自身的发展,丰富高职课程资源的内容都具有重要的意义。我国高职教师在课程资源开发中表现出来的主要问题有:课程资源开发意识薄弱,参与课程资源开发的自主性不足,课程资源开发范围窄化以及课程资源开发能力有限。造成这些问题的主要原因有:高职教师对课程资源的内涵缺乏全面而深刻的理解,对自身在课程资源开发中的功能认识不清,缺乏合法的课程资源决策权,等等。

论新型农民的职业教育与培训

新型农民是指从事农业或相关产业的职业者,他们必须具备较高的文化素质、科技素质、经营管理素质、法律素质、思想道德素质和身体素质。我国农民素质现状与新型农民的素质要求还具有一定的差距。尤其是需要通过职业教育与培训来提高我国农民的科技素质、经营管理素质和法律素质。

面向农村发展的职业教育政策设计

城乡职业教育统筹发展是城乡统筹发展的重要内容。推动职业教育面向农村发展是统筹城乡职业教育发展的重要举措,不仅是形成城乡职业教育良性互动关系的内在需求,也是职业教育服务新农村建设的外在表现。推动职业教育面向农村发展主要依赖于各级政府的力量,要求各级政府在招生政策、办学政策、财政政策和教学政策等方面做出相关规定,从而为职业教育面向农村发展提供良好的政策环境。

面向农村发展的职业教育政策设计

推动职业教育面向农村发展是统筹城乡职业教育发展的重要举措,具有十分重要的意义。不仅能改变我国职业教育现状,逐步缩小我国城乡职业教育发展差距、统筹利用职业教育资源,而且有利于"三农"问题的解决。推动职业教育面向农村发展主要依赖于各级政府的力量,要求各级政府在招生政策、办学政策、财政政策和教学政策等方面做出相关规定,从而为职业教育面向农村发展提供良好的政策环境。

我国不同地区职业中学教育经费来源比较——以上海等六省市为例

以上海、浙江等六省市为例,对我国职业中学教育经费来源进行比较。分析发现,要使我国职业中学获得更多的教育经费收入,有必要采取以下措施:在地方政府投入不足的地区,必须实行适当的财政转移支付制度,不断缩小东部和中西部地区的生均教育经费差距;采取必要的政策措施继续减轻贫困学生家庭的经济负担;要广泛吸纳社会资金的注入,增加职业中学其他渠道的资金来源。

Protein A/G亲和层析在HCV抗体纯化中的应用效果

目的分析蛋白A/G亲和层析柱在纯化抗HCV血清的影响因素,以便选择最佳使用条件提高ProteinA/G亲和柱的利用效率。方法分别将抗HCV血清用不同处理方式、不同上样方式、不同使用次数的亲和柱进行纯化,并收集纯化样品进行检测、分析。结果用饱和硫酸铵粗纯后,在蛋白A/G亲和层析柱的纯化效果更好;样品在亲和柱内吸附30min可提高亲和柱的对目的蛋白的吸附。结论使用初纯的抗体并增加吸附时间能提高亲和层析柱的利用率,并有效延长亲和柱的使用寿命。

穴位注射治疗肾绞痛的疗效观察

目的观察穴位注射对肾绞痛的止痛效果。方法将136例肾绞痛的病人随机分为观察组和对照组,各68例。观察组采用穴位注射的治疗方法,对照组采用常规肌注的治疗方法。结果观察组与对照组显效率为42.6%和11.8%,总有效率分别为91.2%和73.6%。2组疗效比较有显著性差异(u=3.85,p<0.001)。结论穴位注射治疗肾绞痛的效果明显优于肌肉注射。

高血压管理中心对社区高血压病人实施护理干预效果评价

高血压病是一种常见的慢性疾病，长期患病可引起多器官损害。如血压控制不好会发生脑卒中，或严重影响患者的生活质量甚则危及生命。现将2003年1月～2006年1月高血压管理中心对社区高血压病人实施护理干预效果报道如下。

pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响

在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响 ,为提高疫苗的产量 ,在传统的氯仿抽提条件下 ,使用不同pH值 (pH1.0～ 12 .0 )的磷酸盐缓冲体系进行氯仿抽提 ,检测抽提后甲肝病毒(HepatitisAVirus ,HAV)抗原滴度和感染性滴度 ,结果表明 :经氯仿抽提后 ,HAV抗原滴度和感染性滴度均在pH8.0～ 9.0时最高 ,相应得率也比常规处理的得率有显著的提高 .说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高 ,成品疫苗产量的增加具有实际应用价值 .

树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测

目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a（＋）-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1（OH）3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）的比较结果为：弗氏佐剂组（GMT：97 420）＞Al（OH）3佐剂组（GMT：67 202）＞MF59佐剂组（GMT：55 128）;其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组（P＜0.001）;Al（OH）3组显著高于原蛋白组（P＜0.01）;而MF59组显著高于原蛋白组（P＜0.05）.结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.

元谋县绿色蔬菜产业的发展现状与对策分析

蔬菜产业是云南省元谋县的主营产业,经历30多年的发展,已经初具规模,且已经实现商品化、生产经营化。在农民增收实践的过程中,以农村经济发展为基础,实现富民产业化已经成为当前元谋县的主要产业经济发展规划。随着蔬菜营销市场的不断变化,元谋县蔬菜产业也面临着严峻挑战。基于此,在分析元谋县蔬菜产业现状的基础上,提出了绿色蔬菜产业发展的措施。

元谋县蔬菜工厂化育苗发展研究

实施工厂化育苗,延长蔬菜产业链,是加快云南省元谋县传统农业向现代农业转变、粗放经营向集约经营转变的措施,也是促进产业结构调整、保护生态环境、壮大蔬菜产业、推进标准化生产、带动基地发展、提高农产品质量、增加农民收入和推动农村经济发展的最有效途径。基于此,本文简析工厂化育苗的科学内涵、主要优点,阐述元谋县蔬菜工厂化育苗发展前景及发展对策,为当地农业生产提供理论依据。

抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒pGEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E.coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204800、1∶204800、1∶3200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5.5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。

以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株

目的以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株,为以Vero细胞为基质生产流感疫苗奠定基础。方法以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)为母本株,与WHO推荐的2007～2008年度北半球流感疫苗生产用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1)共同感染SPF鸡胚和Vero细胞,用抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)抗体筛选重配病毒,在Vero细胞连续传12代,采用血凝抑制试验和RT-PCR鉴定病毒型别。将重配病毒经Vero细胞大量培养,重配前的病毒经鸡胚大量培养,分别经甲醛灭活,制备灭活疫苗,免疫ICR小鼠,检测其免疫原性。结果获得了1株Vero细胞适应的高产H1N1流感病毒株,连续传9代后,病毒血凝滴度维持在512,免疫原性与重配前的毒株相比,差异无统计学意义。结论通过流感病毒Vero细胞适应株与流行株的重配和抗体筛选,可以获得H1N1流感病毒Vero细胞适应株。

低血清培养Vero细胞和流感病毒条件的优化

目的优化低血清培养Vero细胞和流感病毒的条件,为开发Vero细胞流感疫苗奠定基础。方法分别在DMEM/F12和SLM-199培养基中,添加不同浓度的血清,培养Vero细胞,观察细胞连续传代的生长状态;接种流感病毒后,检测病毒培养液不同pH值、不同浓度TPCK-胰酶和病毒不同接种量对病毒血凝效价的影响。结果用SLM-199在1.0%血清浓度下培养的Vero细胞接种流感病毒血凝效价较高,病毒培养液pH值为7.2,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,接种病毒MOI为1.0时,72h收获的病毒血凝效价最高。结论已筛选出低血清培养Vero细胞和流感病毒的适宜条件。

狂犬病病毒CTN-1株G蛋白的原核表达及基本功能评价

目的原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能。方法采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体p GEX-5X-1,构建重组表达质粒p GEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85%,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1。结论成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础。

GⅡ.4型人诺如病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗GⅡ.4型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法PCR扩增GⅡ.4型HuNoV VP1基因序列,将其插入至原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒p GEX-5X-1-VP1,转化至E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过亲和层析纯化获得重组蛋白GST-VP1。利用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经GST-VP1抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并进行纯化。采用间接ELISA法、Biacore法和Western blot法分别检测单克隆抗体的效价、亲和力及特异性。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pGEX-5X-1-VP1构建正确。重组蛋白GST-VP1相对分子质量约85000,大部分以可溶形式存在,纯化后浓度为1.100 mg/mL。筛选获得3株能分泌GⅡ.4型HuNoV VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为NoV C1、NoV D9和NoV H6,效价均可达1∶10^7以上,亲和力常数KD(M)分别为4.422×10^-7、4.303×10^-8、7.540×10^-7 mol/L,均可与HuNoV VP1天然蛋白及GST-VP1重组蛋白发生特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GST-VP1蛋白,并通过杂交瘤技术制备了高效价的GⅡ.4型HuNoV VP1特异性单克隆抗体,为GⅡ.4型HuNoV免疫诊断和疫苗的研发奠定了基础。

病毒基因组耦联报告基因用于筛选适宜丙型肝炎病毒培养的亚细胞克隆株

目的快捷筛选到适合丙型肝炎病毒（HCV）培养的细胞系。方法将荧光素酶报告基因耦联到JFHlHCV基因组中，检测了多个人肝细胞系对HCV的易感性，进一步利用耦联荧光素酶的HCV复制子模型筛选并经过IFN-Ot处理更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株。结果实验结果显示BEL7402、BEL7404、QSG7701、SMMC7721、QGY7701、QGY7703和HepG等肝细胞均不易感染HCV，仅限于Huh7细胞能被HCV感染。同时实验获得了更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株——Huh7G3。结论在利用IFN-仅处理细胞的过程中，通过检测荧光素酶活性，显示IFN-Ot对HCV亚基因组的复制抑制效果具有剂量依赖效应，研究同时显示：HCV复制子细胞能否抵抗HCV的超感染依赖于细胞内是否存在HCVRNA复制而不是其复制水平的高低。

MF59佐剂对脊髓灰质炎灭活疫苗诱导恒河猴细胞免疫应答的影响

目的分析以MF59为佐剂的脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)免疫恒河猴后诱导的细胞免疫应答。方法将恒河猴分为4组:无佐剂低剂量组(IPVL-PBS组)、低剂量MF59佐剂组(IPVL-MF59组)、无佐剂高剂量组(IPVH-PBS组)和低剂量铝佐剂组(IPVL-AL组)。高剂量组IPV每剂中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗原含量分别为30、32、42 DU,低剂量组IPV每剂中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗原含量分别为3、3.2、4.2 DU,0.5 ml/剂,其中MF59为0.25 ml/剂,氢氧化铝为0.5 mg/剂,均于第1、28、56天经恒河猴后腿肌肉注射,分别于免疫后第28、56、84天采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体效价;分别于免疫后第56和84天,取外周血,分离淋巴细胞,上流式细胞仪检测特异性抗原刺激下的Th1型细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-6)分泌水平,以及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例的分布情况。结果恒河猴经3次免疫后,IPVL-MF59组血清中和抗体阳转率明显高于其他各组,达75%以上。恒河猴免疫后第56天,IPVL-MF59组IFNγ和TNF分泌水平明显高于IPVL-AL组(P均<0.05),IL-6分泌水平明显高于IPVL-PBS和IPVH-PBS组(P均<0.05);免疫后第84天,各组IL-2、IFNγ、TNF均稳定在同一水平,IL-4、IL-5分泌水平均明显高于第56天(P均<0.05)。免疫后第84天,IPVL-MF59组CD8+T淋巴细胞百分比均明显高于IPVH-PBS和IPVL-PBS组(P均<0.05)。结论 MF59佐剂能增强IPV诱导的TNF和IL-6的分泌水平,增强Th1和Th2类反应。

肠道病毒71型鼠源性中和单克隆抗体的制备

目的制备肠道病毒71型(enterovirus A 71,EV71)鼠源性中和单克隆抗体。方法以灭活EV71病毒液为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得抗EV71单克隆抗体;ELISA法检测抗体的特征,获得具有高效结合性的单克隆抗体;SDS-PAGE和Western blot法鉴定Protein A纯化的抗体;通过体外和体内中和试验鉴定抗体的中和特性。结果得到3株针对EV71 VP1的高效结合性单克隆抗体15H7、15G7和6G2,且15H7经中和试验证明具有较强的中和活性。结论成功制备了EV71鼠源性中和单克隆抗体,其在小鼠体内能成功地抑制病毒增殖。