心肌肌钙蛋白Ⅰ与心力衰竭

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌兴奋收缩耦联的主要调节蛋白 ,是肌肉舒缩的分子开关。因其具有高度的组织特异性及检测的敏感性 ,自二十世纪九十年代以来 ,已被作为诊断心肌损伤首选的血清标志物 ,并且在疾病的预后评估中具有重要价值。研究显示收缩蛋白的降解及磷酸化修饰可能在心肌细胞的损伤及功能下降中起重要作用 ,而到目前为止 ,对无症状性心功能不全 ,临床上还没有敏感的诊断方法 ,即使对于明显的心力衰竭患者 ,也缺乏一个判断其心肌损伤程度的指标 ,血清心肌肌钙蛋白I可能会成为一个比较理想的评价心力衰竭患者的指标。同时对肌纤维蛋白结构和功能的研究也为心脏疾病的诊治提供了新的信息 ,其中针对肌纤维设计新药就是一个值得开拓和有应用前景的领域。

中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白基因突变研究

目的:初步探讨中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白T基因突变情况,为该病的早期防治和康复介入奠定理论基础。方法:提取58例肥厚型心肌病(hypertrophiccardiomyopathy,HCM)患者外周血白细胞基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增心肌肌钙蛋白T(cTnT)基因8、9、11号外显子,产物做单链构象多态性(SSCP)分析,出现异常条带者直接测序验证。结果:58例临床确诊的HCM患者cTnT基因8,9,11号外显子,除160位密码子存在ATC和ATT多态性外,未发现基因位点的异常。结论:与国外报道的肥厚型心肌病约20%是由肌钙蛋白T基因突变引起相比较,中国人群肥厚型心肌病患者基因突变可能存在不同的特点。

中国肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白I基因突变类型的研究

目的研究中国肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因突变类型。方法肥厚型心肌病患者58例,男36例,女22例,年龄10～77岁,平均(46±18)岁。正常对照100例,男60例,女40例,年龄10～68岁,平均(33±12)岁。聚合酶链反应(PCR)扩增肥厚型心肌病患者及正常对照组cTnI基因5、7及8号外显子,结合单链构型多态性及直接测序法分析结果。结果未见国外已报道的cTnI基因突变类型(Pro82Ser,Arg145Gly,Arg145Gln,Arg162Trp,ΔAAG183,Asp196Asn,Gly203Ser,Ser199Asn,Lys206Gln,8号外显子缺失33bp),但在7号外显子发现一新的Arg145Trp突变。此外,在7号外显子尚见179位密码子GAG→GAA多态性。结论所研究的肥厚型心肌患者群未发现国外报道的cTnI基因突变类型。与国外比较,中国肥厚型心肌病cTnI基因突变类型可能具有不同的特点。

大鼠心肌肌钙蛋白I基因Lys184缺失突变重组腺病毒载体的构建

目的:构建SD大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)赖氨酸(Lys)184缺失突变重组腺病毒载体。方法:利用PCR定点突变方法给大鼠cTn I基因引入Lys184缺失突变,将扩增片段克隆至pMD18-T载体,在C末端用PCR法加6×组氨酸(His)标签序列后,再亚克隆至Adeno-X腺病毒DNA,转染HEK 293细胞,包装形成重组腺病毒(Ad-cTnILys184del)。结果:PCR及测序结果表明,重组腺病毒序列正确,Western blot证明有融合突变蛋白表达。结论:本研究成功地构建了大鼠cTnI Lys184缺失突变重组腺病毒载体,为后续的功能研究提供了有价值的研究材料。

C反应蛋白对小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙的影响

目的:研究C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙[Ca2+]i的作用。方法:原代培养小鼠主动脉内皮细胞,取生长状态良好的内皮细胞分为对照组(未加CRP)和不同浓度CRP处理组,25 min后观察各组内皮细胞[Ca2+]i。将内皮细胞用1μmol/L阿托伐他汀预处理30 min后,加入100 mg/L CRP,观察阿托伐他汀对CRP作用的影响。结果:与对照组相比,CRP可显著升高内皮细胞胞内[Ca2+]i并呈剂量依赖关系;阿托伐他汀可明显降低CRP引起的[Ca2+]i升高。结论:CRP可导致和加重小鼠主动脉内皮细胞的炎症反应,阿托伐他汀可部分拮抗CRP的致炎作用。

肥厚梗阻型心肌病化学消融术酒精用量对术后早期血流动力学和心脏重构的影响

目的:探讨经皮室间隔心肌化学消融术(PTSMA)最适酒精使用剂量。方法:连续选择2007年1月～2010年12月在本院接受低剂量酒精(≤2.0 ml)消融的肥厚梗阻型心肌病(HOCM)患者10例;按1∶2配比的病例对照研究,选择2000年1月～2006年12月接受较大剂量酒精(>2.0 ml)消融治疗的患者20例作为历史对照组,分别评估两种治疗方案对术后早期血流动力学和心脏重构的影响。结果:低剂量和对照组术后即刻[(28.0±8.8)mmHg和(27.5±7.2)mmHg]、术后3个月[(29.5±6.6)mmHg和(28.1±5.0)mmHg]的左心室流出道压力阶差(LVOTPG)均较基线时[(69.9±13.1)mmHg和(70.6±13.4)mmHg]显著性下降(P<0.01),术后室间隔厚度明显减小(P<0.01),左心室舒张末内径无变化;而两组间术后即刻、术后3个月LVOTPG水平及下降幅度均无差异(P>0.05);相关分析显示,酒精用量分别与术后即刻LVOTPG以及术后3个月LVOTPG、室间隔厚度和左室舒张末内径等变化无相关性(P>0.05)。结论:小剂量酒精消融同样导致术后早期血流动力学和心脏结构的改善。

构建检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变的寡核苷酸探针

目的:等位基因特异性寡核苷酸杂交是基于分子杂交原理而建立的经典的突变检测方法,也是DNA芯片技术的重要组成部分,常用于突变筛查。实验拟建立一种适合快速大规模检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T)的方法。方法:实验于2002-07/2004-06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所临床生物学诊断与治疗实验室完成。直接测序研究证实的具有cTnⅠ基因Arg145Trp突变的肥厚型心肌病患者2例,正常对照1名,受试者对实验均知情同意。自外周血白细胞抽提DNA,聚合酶链反应扩增心肌肌钙蛋白Ⅰ基因含有突变位点的外显子,点于硝纤膜上,分别在不同的温度条件(48,52,56℃)下再与生物素标记的突变及野生探针杂交,摸索最佳杂交条件。根据最佳杂交条件,分别在100倍浓度无关探针条件下行非特异性竞争杂交,在100倍浓度未标记的特异寡核苷酸探针条件下行特异性竞争杂交。结果:采用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素和NBT/BCIP观察杂交结果:①突变及野生探针在48℃杂交时,除阴性对照外,2个患者及正常对照样本均见明显阳性信号。②在52℃及56℃条件下突变探针正确检出两个突变样本,但以56℃结果最佳。③100倍浓度无关探针杂交存在时,对生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果没有影响,2个患者样本均见明显阳性信号。100倍浓度未标记的突变寡核苷酸探针存在时杂交,完全抑制生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果。结论:所设计的寡核苷酸探针能够检测出肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T),适合该突变的快速大规模筛选。

PCR-SSCP检测肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白Ⅰ基因7号外显子突变

目的研究聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法检测肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因7号外显子突变的可行性。方法肥厚型心肌病患者59例(2例曾直接测序证实7号外显子Arg145Trp突变),PCR扩增cTnI基因7号外显子,予PCR-SSCP检测突变,与直接测序结果进行比较。结果2例Arg145Trp突变者均有异常条带,余未证实突变者未见阳性条带。结论PCR-SSCP检测肥厚型心肌病cTnI基因Arg145Trp突变具有良好的检出性,可作为大规模人群筛查的工具。

心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病

目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行WesternBlotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量。结果:12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P<0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白I水平均正常(P>0.05)。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr55000,24000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达。③模型组在Mr55000,30000,28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P<0.05)。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在Mr55000,28000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55000,30000,28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000,见肌钙蛋白I表达,未见降解片断。结论:AdcCTnIArg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。

黄芪甲苷促进缺氧损伤后人主动脉内皮细胞血管新生的研究

目的:研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对缺氧损伤后人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)的保护作用及对血管生成的影响及可能机制。方法:体外培养HAECs,8%O2制备缺氧模型,实验分为对照组、缺氧组、AS-Ⅳ治疗组,50μg/mL)。观察AS-IV对缺氧损伤后HAECs的保护作用及对细胞迁移能力、增殖活性和体外成环的影响以及自噬在血管生成过程中的作用。结果:缺氧损伤后与对照组比较,HAECs细胞上清释放的损伤标志物乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)浓度增加[(25.33±1.70)U/L vs.(5.33±1.25)U/L],细胞活力降低[(81.12±0.72)%vs.(100±3.07)%],细胞迁移能力降低,增殖能力降低,体外成环数下降[(30.91±3.78)个vs.(62.10±7.56)个],自噬相关蛋白Beclin及LC3-Ⅱ表达下调(P<0.05)。加入AS-Ⅳ治疗后,与缺氧组比较,细胞上清LDH释放量减少[(18.33±1.25)U/L],细胞活力提高[(85.71±2.48)%],细胞迁移能力增强、增殖活性增加,基质胶体外成环数增加[(48.64±4.80)个],自噬相关蛋白Beclin及LC3-Ⅱ表达上调(P<0.05)。结论:AS-Ⅳ可减轻缺氧对HAECs的损伤,可能通过激活自噬通路促进HAECs血管新生。

急性心肌梗死患者血小板反应素-4基因A387P多态性分析

目的 研究中国汉族人群血小板反应素-4（thrombospondin-4，TSP-4）基因G29926C（A387P）多态性与急性心肌梗死（AMI）发病的关联性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法分析TSP-4A387P多态性，病例组为302例经冠脉造影确诊的AMI患者，对照组为337例冠脉造影阴性、排除冠心病诊断者。结果GC基因型在AMI组和对照组的分布差异无统计学意义（5．3％vs7．1％，P=0．34），未检测到CC纯合子。C等位基因频率在AMI组和对照组分别为2．6％、3．6％（P=0．35），对照组TSP-4387A—P变异频数明显地低于西方人群（3．6％vs19．6％～23．2％）。多元logistic回归分析显示TSP-4A387P多态性与AMI的发生无显著性相关（OR=0．81，95％CI：0．41～1．62，P=0．55）。结论TSP-4基因387A—P变异在中国汉族人群中发生频率明显地低于西方人群，且与AMI的发病无显著相关性。

黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护作用

目的:研究黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护作用。方法:采用两肾一夹制备肾血管性高血压大鼠,术后2周将大鼠随机分为手术组和黄芪甲苷治疗组[5.0 mg/(kg·d)],以假手术组为正常对照,治疗2周后,观察大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体超微结构的变化,应用免疫组化染色法观察大鼠胸主动脉内皮细胞锰超氧化物歧化酶(SOD2)的表达。结果:术后2周大鼠收缩压明显高于正常对照大鼠。手术组大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体内嵴断裂、消失,基质电子密度降低,肿胀、空泡化明显;黄芪甲苷治疗后大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体损伤程度明显减轻。手术组大鼠胸主动脉内皮细胞SOD2表达水平较正常对照大鼠明显降低,黄芪甲苷治疗后恢复至正常大鼠水平。结论:黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体的损伤有保护作用,上调主动脉内皮细胞SOD2表达是其可能途径之一。

黄芪甲苷逆转血管紧张素Ⅱ引起的主动脉平滑肌细胞线粒体功能障碍

目的 :研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,As-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)引起的线粒体功能障碍的逆转作用。方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),低血清培养液饥饿处理后分为24 h对照组、AngⅡ24 h处理组、48 h对照组、AngⅡ48 h处理组、As-Ⅳ治疗组。24 h对照组和AngⅡ24 h处理组使用线粒体呼吸功能检测仪进行线粒体呼吸功能检测,线粒体ATP含量检测;48 h对照组、AngⅡ48 h处理组和As-Ⅳ治疗组进行线粒体呼吸功能检测、线粒体ATP含量检测、电镜观察线粒体结构变化,共聚焦显微镜检测线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和Mn-SOD活性检测。结果:AngⅡ24 h处理组与24 h对照组相比,线粒体耗氧率(oxygen consumption rates,OCRs)出现下降,线粒体ATP含量减少(P≤0.05);AngⅡ48 h处理组与48 h对照组相比,线粒体OCRs显著下降,线粒体ATP含量明显减少(P<0.05),线粒体出现嵴模糊、肿胀、空泡,线粒体内ROS水平升高(P<0.05),Mn-SOD活性下降(P≤0.05);As-Ⅳ治疗组较AngⅡ48 h处理组线粒体OCRs和线粒体ATP含量明显回升(P<0.05),线粒体形态结构损伤减轻,线粒体内ROS水平降低(P<0.05),Mn-SOD活性升高(P≤0.05)。结论 :As-Ⅳ可以通过增强线粒体Mn-SOD活性,降低线粒体内ROS水平,进一步减轻线粒体结构损伤并提高线粒体OCRs和ATP含量,从而逆转AngⅡ引起的线粒体功能障碍。

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的 :研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)氧化应激损伤的改善作用。方法 :体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H_2O_2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H_2O_2损伤组细胞经H_2O_2(400μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H_2O_2损伤12 h后加入含50μg/m L AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H_2O_2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果:H_2O_2损伤后HAECs丙二醛(MDA)含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧(ROS)水平显著增加,超氧化物歧化酶(SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性及线粒体膜电位显著降低;H_2O_2损伤的HAECs经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论:AS-Ⅳ对H_2O_2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一。

黄芪甲苷联合依那普利治疗改善小鼠急性心肌梗死后心功能

目的:探讨黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)联合依那普利治疗急性心肌梗死小鼠对心功能改善及其促血管新生的作用机制。方法:24只8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术(Sham)组、对照(CTL)组、依那普利(Enalapril)组、黄芪甲苷+依那普利(AS-Ⅳ+Enalapril)组,除Sham组外,对CTL组、Enalapril组、AS-Ⅳ+Enalapril组3组小鼠均行冠状动脉左前降支结扎术构建心梗模型。对Enalapril组(Enalapril 7.5 mg/kg)、AS-Ⅳ+Enalapril组(AS+Ⅳ 10 mg/kg+Enalapril 7.5 mg/kg)小鼠分别以对应药物进行治疗。2周后行超声检查测定心功能。以HE染色观察心脏病理改变。以CD31/VEGFR3免疫荧光染色观察各组血管密度及血管新生情况。结果:与CTL组相比,Enalapril组和AS-Ⅳ+Enalapril组小鼠心功能得到明显改善,且AS-Ⅳ+Enalapril组优于Enalapril组;CD31/VEGFR3双荧光染色显示,与CTL组相比,Enalapril组和AS-Ⅳ+Enalapril组小鼠梗死边缘区血管密度增高,新生血管比率增高,且AS-Ⅳ+Enalapril组优于Enalapril组。结论:黄芪甲苷联合依那普利可有效改善急性心肌梗死后小鼠的心功能,并可促进心肌梗死边缘区血管新生。

PAPP-A基因多态性与子痫前期的相关性研究

目的:探讨妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)基因多态性与子痫前期的相关性。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)对129例子痫前期患者(轻度子痫前期64例,重度子痫前期65例)和137例同期入院产检并在南京医科大学第一附属医院分娩的正常孕妇,进行PAPP-A基因位点S1224Y(A/C)(dbSNP:rs7020782)多态性的分析,比较各基因型及等位基因的频率在子痫前期组和正常组间、重度子痫前期组和轻度子痫前期组间的差别。结果:AC基因型频率在子痫前期组(44.2%)高于对照组(31.4%,P﹤0.05);AC基因型频率在重度子痫前期组(75.4%)明显高于轻度子痫前期组(12.5%,P﹤0.001);C等位基因频率在重度子痫前期组(40.8%)明显高于轻度子痫前期组(18.7%,P<0.001)。结论:PAPP-A基因位点S1224Y(A/C)的AC基因型,C等位基因可能是子痫前期的重要遗传危险因素,并与病情的严重程度相关。

低剪切力下调PPAR信号通路参与BALB/c小鼠局部血管早期病变的实验研究

目的 :研究局部血流低剪切力对BALB/c小鼠局部血管内皮细胞损伤及平滑肌细胞增殖的影响及其分子机制。方法:以左侧颈总动脉套管植入术造成局部血流剪切力变化。30只雄性BALB/c小鼠随机分为假手术组(n=10,普通饮食)、模型1组(n=10,套管植入术+普通饮食)、模型2组(n=10,套管植入术+高脂饮食)。术后喂养8周,监测小鼠体重,颈总动脉超声测量术后3 d和术后8周左、右颈总动脉血流峰值、血管舒张末内径及剪切力变化,检测血脂水平,HE染色观察颈总动脉病理形态学变化,测量血管中膜厚度,透射电镜观测颈总动脉内皮细胞、内皮下超微结构。芯片比较小鼠低剪切力区与自身正常剪切力区血管段基因表达谱变化,GO及KEGG信号通路分析与细胞迁移及增殖相关基因和信号通路的变化并行实时定量PCR(quantificational real time-polymerase chain reaction,QRT-PCR)验证。结果 :与假手术组相比,模型1组小鼠术后8周体重及血脂均无明显差异(P>0.05),模型2组小鼠术后8周体重增加明显,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均升高(P<0.05)。模型1、2组左侧颈总动脉套管近心端呈低剪切力变化,HE染色可见内皮细胞不同程度损伤,血管中膜增厚,无脂纹和斑块形成;电镜下可见有不同程度的内皮细胞空泡化形成,内皮下未见脂质空泡和脂滴堆积。合并高脂喂养加强了低剪切力导致的血管病变。芯片检测提示与自身正常剪切力血管段相比,低剪切力血管段标本呈现mi R-27a上调(>2倍),PPAR信号通路下调,MAPK、TGF-β、PI3K/Akt及NF-κB信号通路上调,包括TGFB2、END1、CTGF等促细胞迁移及(或)增殖的基因上调>2.0倍。QRT-PCR验证结果显示:相比于自身正常血管段,在低剪切力血管段中PPARG下调0.14倍,TGFB2和EDN1分别上调2.51倍和1.83倍,差异有统计学意义(P<0.05,n=4),与基因芯片结果相符。结论:BALB/c小鼠颈总动脉套管植入术后8周,与正常剪切力血管段相比,低剪切力血管段局部见内皮细胞损伤及中膜增厚,提示局部低剪切力变化是血管动脉粥样硬化早期病变的因素,可能与其血管壁局部PPAR信号通路下调后引起的促细胞增殖、迁移相关基因表达及信号通路激活有关。

抗人和肽素单克隆抗体的研制

目的制备抗人和肽素单克隆抗体并完成鉴定。方法合成人和肽素C端及N端氨基酸片段并耦联钥孔戚血蓝蛋白(KLH)作为抗原,分别免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤技术筛选出分泌抗人和肽素抗体的单克隆细胞株,动物体内诱生法收集腹水,葡萄球菌蛋白A亲和层析柱纯化腹水中的单克隆抗体(单抗),完成抗体亚类鉴定,用间接ELISA鉴定其活性,初步应用于免疫细胞化学检测。结果获得了3株特异性抗人和肽素单抗2h7、5b10及5e7,均属于IgG1亚类,2h7针对的抗原表位在和肽素C端,而5b10及5e7针对的抗原表位在和肽素N端。间接ELISA检测证实3株单抗均特异性识别人和肽素,其中2h7和5b10可应用于免疫细胞化学分析。结论成功制备出抗人和肽素单抗,能特异识别和肽素C端和N端,可应用于细胞免疫化学检测,为人和肽素的进一步研究提供依据。

超声心动图评定雄性Balb/c小鼠心脏形态和功能

目的:应用超声心动图评定雄性Balb/c小鼠的心脏形态和功能。方法:应用13MHz线控阵超声探头检测27只Balb/c雄性小鼠心脏(周龄:5-7周),超声检测后,进行戊巴比妥麻醉处死分离左室,测量湿重。结果:获得小鼠完整2维超声心动图,并记录雄性小鼠血流动力学参数。用M型超声心动图计算左室重量与左室湿重呈线性相关:y=1.15x+3.26(r=0.80)。结论:超声心动图参数能够评定小鼠的心脏形态和功能。