花姜酮通过免疫原性死亡影响黏液表皮样癌的机制研究

目的 探究花姜酮(zerumbone,Zer)治疗黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)的机制研究,以期为临床上开发MEC靶向治疗药物提供新的思路以及理论依据。方法 购入MEC细胞系H292及H3118,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑[3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT]检测出Zer对MEC细胞系的IC50;在IC50的浓度下,进一步通过集落形成实验检测细胞增殖,利用流式细胞术检测细胞凋亡及表面钙网蛋白(calreticulin,CRT)蛋白水平,Western blot检测细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达水平,观察Zer是否可以影响MEC的免疫原性死亡;最后为探寻Zer可能的分子调控机制,采取pcDNA3.1-STAT3上调MEC细胞中信号转导因子和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的水平,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测转染效率及qRT-PCR、Western blot检测内质网应激相关因子活化的转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、ATF3及转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的表达水平,三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)测定试剂盒检测培养基中ATP含量,MEC。结果 Zer组细胞凋亡率高于Control组(P<0.05),Zer组H3118细胞上清液中HMGB1蛋白含量高于Control组(P<0.05),Zer组H3118细胞中ATP含量高于Control组(P<0.05),Zer组细胞内质网应激相关基因ATF4、ATF3及CHOP的蛋白和mRNA表达水平均高于Control组(P<0.05),Zer组的MEC细胞中STAT3 mRNA水平低于Control组(P<0.05),Zer+oe-STAT3组细胞内质网应激相关基因ATF4、ATF3及CHOP的蛋白和mRNA表达水平均低于Zer+oe-NC组(P<0.05)。结论 Zer介导STAT3促进MEC细胞内质网应激由此诱导MEC细胞免疫原性死亡。

一测多评法同时测定五苓胶囊中8种成分

目的建立一测多评法同时测定五苓胶囊(泽泻、茯苓、猪苓等)中猪苓酮B、猪苓酮A、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Agilent Polaris C_(18)-A色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.9 mL/min;柱温25℃;检测波长248、220、208 nm。以白术内酯Ⅰ为内标,计算其他7种成分的相对校正因子,测定其含量。结果 8种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.99%~100.06%,RSD 0.65%~1.47%,一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法简便准确,可用于五苓胶囊的质量控制。