基于人肾类器官构建顺铂诱导急性肾损伤模型

目的基于人肾类器官建立顺铂诱导急性肾损伤(AKI)模型。方法①基于人多能干细胞(hiPSC)诱导技术设计并构建含有多种细胞类型的肾类器官,利用HE染色法和免疫荧光技术鉴定组织结构和细胞类型。②基于构建的人肾类器官模型,将顺铂20,50和75μmol·L^(-1)分别作用于人肾类器官模型48 h,观察肾类器官形态变化,Live/Dead染色法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肾损伤因子1(Kim-1)和炎症细胞因子白细胞介素8(IL-8)mRNA表达水平。结果①组织学和免疫荧光实验结果表明,hiPSC诱导分化后可产生成熟的人肾类器官,该类器官具有原始肾小管样结构,并包含近端肾小管、远端肾小管、足细胞、肾间质内皮细胞和肾小管上皮细胞在内的多种细胞类型。②单次给顺铂20,50和75μmol·L^(-1)均造成细胞形态结构的破坏,管状结构大量消失;Live/Dead染色结果表明,顺铂可引起肾类器官细胞凋亡,20μmol·L^(-1)组细胞存活率<50%,75μmol·L^(-1)组存活率接近0。与正常对照组比较,Kim-1和IL-8 mRNA水平在不同浓度顺铂致AKI模型中均显著升高(P<0.01)。结论成功构建人肾类器官模型,验证了使用人肾类器官体外模拟化疗药物致AKI的可行性,Kim-1联合IL-8有望为临床预测药物引发AKI的可能性和不良反应的应对措施提供科学依据和判断标准。

肾类器官血管化研究进展

肾类器官是利用人多能干细胞或组织来源的成体干细胞诱导分化形成主要包含肾小管结构的类器官,由于缺乏血管网络的支持,其组织结构不成熟和生长受限,如何实现肾类器官的血管化是该领域亟待解决的难题。目前,免疫缺陷动物移植、改变诱导分化方案、微流控芯片及调整细胞外基质和氧气浓度等方法可促进肾类器官血管化,为肾类器官科学研究及其临床应用提供了新的研究视角。

转Bcl和Rip基因小麦的鉴定和遗传分析

对转Bcl、Rip基因小麦的T1、T2和T3代植株进行了分子检测和抗病性鉴定,并根据检测结果对其遗传行为做了探讨与分析。T1代检测结果表明,选择标记基因nptⅡ的分离符合孟德尔遗传规律;功能基因Rip的分离比2.62∶1,符合孟德尔分离规律;功能基因Bcl的分离比为4.50∶1,偏离了孟德尔遗传规律。T1代植株Southernblot分析结果表明,功能基因Bcl和Rip已经稳定整合到小麦基因组上,多数植株为单拷贝整合。T2代纯合稳定植株Southernblot分析结果表明,功能基因Bcl和Rip在小麦染色体上多为双拷贝整合。白粉病和全蚀病鉴定结果表明,功能基因对白粉病和全蚀病均有一定的抗性。农艺性状调查结果表明,除了株高外转基因植株其它农艺性状与受体品种一致。

青稞粉液化糖化工艺研究

通过单因素和正交试验,探讨不同因素对青稞粉液化糖化过程的影响。试验结果得出60目青稞粉的最佳液化条件,料水比为1∶4.0(g/mL),α-淀粉酶添加量为500.1 nkat/g,pH为6.0～6.5,液化温度为85℃,液化时间为30 min;最佳糖化工艺条件,pH为4.5,糖化酶添加量为5 001.0 nkat/g,糖化温度为60℃,糖化时间为60 h。

住宅小区供电设计探讨与改进

小区供电采用单回路放射式当某一线路发生故障时不影响其它用户,切换操作方便,继电保护简单,易于实现电网自动化管理。对二级负荷供电时,应有备用电源。但投资较高,可靠性较差,相比较采用环网供电,可节省投资,同时也提高了供电的可靠性。

从文化史角度看晚明书法巨轴形式与内容产生因素

晚明时期大量出现的书法巨轴是明代书法史上最为辉煌、最具有时代代表性的笔墨。这些书法巨轴中所展现的出的笔法、章法、结构与墨法的运用和表现出的的艺术自觉性都对后世产生了极大影响。本文从文化史角度去分析晚明书法巨轴长生的环境与土壤。

阮元碑学思想浅析

阮元是碑学理论家极为重要的一位，但是大家提起他时总是拿其“南北书派”观点和“尊碑抑帖”来概括他的观点。但是真的就只是这样吗？本文以“古今”、“碑帖”“南北”着三个角度入手浅析阮元碑学思想。

极早产儿和/或极低出生体重儿对青少年时脑体积影响的Meta分析

目的评估极早产和/或极低出生体重对青少年时脑体积的影响。方法系统检索Pub Med、EMBASE、the Cochrane Library、Web of Science、中国生物医学文献(CBM)、万方和知网(CNKI)数据库,检索时间从建库至2017年10月20日,纳入暴露组为出生胎龄≤32周和/或出生体重≤1 500 g、非暴露组为出生胎龄38~42周且出生体重≥2 500 g、队列终点(13~18岁)时使用MRI行脑体积测量的队列研究,排除出生时存在先天畸形或其他先天性疾病、随访期间存在可能影响测量结果的疾病及无法提取本文设定的测量指标(全脑、白质、灰质、小脑、海马和胼胝体的体积)的文献。采用NOS量表评价文献质量,R 3.4.0软件进行Meta分析,I^2检验文献异质性。结果 13篇英文文献(n=1 272)进入本文Meta分析,暴露组686例,非暴露组586例。13篇文献均随访不完整,9篇非暴露组与暴露组来源于同社区,3篇仅根据问卷回顾出生数据。13篇文献均描述采用1.5T场强的MRI、计算机软件自动测量体积,暴露组和非暴露组队列终点年龄均一致。Meta分析结果显示,暴露组与非暴露组相比,全脑(SMD=-0.66,95%CI=-0.81^-0.51)、白质(SMD=-0.51,95%CI=-0.64^-0.38)、灰质(SMD=-0.60,95%CI=-0.93^-0.28)、小脑(SMD=-0.45,95%CI=-0.64^-0.25)、海马(SMD=-0.48,95%CI=-0.73^-0.24)和胼胝体均(SMD=-0.43,95%CI=-0.63^-0.24)明显缩小,差异均有统计学意义。全脑和白质体积的Meta分析漏斗图检验未见发表偏倚。结论极早产和/或极低出生体重儿青少年岁时的脑整体体积和特定脑区域体积降低。

少突胶质前体细胞移植联合咪康唑修复脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘

背景:少突胶质前体细胞是中枢神经系统中成髓鞘细胞——少突胶质细胞的前体细胞,与中枢脱髓鞘疾病如脑白质营养不良有着密切关系,最近研究显示咪康唑可促进少突胶质前体细胞分化和髓鞘再生,咪康唑和少突胶质前体细胞二者联合可能用于脑白质营养不良的治疗。目的:探讨少突胶质前体细胞移植联合咪康唑对脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘修复作用。方法:采用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)基因敲除的shiverer小鼠作为脑白质营养不良模型,新出生shi-/-(MBP基因完全缺失)小鼠分为阴性对照组和治疗组,新出生shi+/+(MBP基因正常)小鼠作为阳性对照组。治疗组于生后24 h内移植少突胶质前体细胞,同时在生后1-5 d腹腔注射咪康唑,阴性对照组和阳性对照组分别以PBS和生理盐水代替少突胶质前体细胞和咪康唑。待小鼠8周龄时行MBP免疫荧光染色和Western blot检测MBP蛋白表达,透射电镜观察胼胝体区域髓鞘结构。结果与结论:(1)与阴性对照组比较,治疗组MBP荧光表达明显增强,平均荧光强度值差异有显著性意义(P<0.05),但与阳性对照组比较,治疗组MBP荧光强度显著下降(P<0.05);(2)治疗组的MBP蛋白表达量比阴性对照组高,但比阳性对照组低,差异有显著性意义(P<0.05);(3)透射电镜下,阴性对照组髓鞘罕见,形态不规则且板层排列松散、紊乱;阳性对照组髓鞘明显增多、增厚,形态均正常且板层排列紧密、边界清晰;治疗组髓鞘数量较阴性对照组增多,部分近似正常,但多数髓鞘厚度仍明显减低;(4)结果表明,少突胶质前体细胞移植联合咪康唑有助于改善脑白质营养不良的脱髓鞘状况,但不能完全逆转受损髓鞘的病理状态。

辽宁大石桥市水文地质条件分析

通过对大石桥地区大量水文地质基础资料的总结和野外调查研究,从该地区水文地质特征入手,划分了研究区地下水系统,阐明了地下水系统的含水层特征、水循环系统和地下水动态特征,对促进该地区地下水资源的合理开发利用有着积极的作用。

Gitelman综合征1例临床特征及基因测序分析

Gitelman综合征(Gitelman syndrome,GS),是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,本文回顾分析1例GS患儿的临床资料以及患儿及其父母的基因测定结果,并通过SLCl2A3基因突变分析探讨其基因突变类型,报告如下。

表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒的构建及鉴定

目的构建表达HPV16E7基因的重组腺病毒质粒.方法设计携带酶切位点和无酶切位点的两对引物以扩增ccdBKan目的片段.分别将ccdBKan与质粒pBR322-Ad4-eGFP共转至电转感受态GB08red-gyr462构建两种表达ccdBKan基因的重组Ad4质粒.利用ccdB正反筛选系统与ExoCET/Red重组结合将HPV16E7基因插入Ad4的E1A区,构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒pBR322-Ad4-E 1 Amut-C16E7P,经酶切、测序验证.提取质粒pBR322-Ad4-EIAmut-C 16E7P释放基因组,转染293T细胞以包装和扩增病毒,用病毒感染293T细胞,检测HPV16E7基因在细胞内的转录水平和蛋白表达.重组病毒经肌肉接种BALB/C裸鼠,收集小鼠血清用于病毒中和实验.结果成功构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒,并在293T细胞中成功包装出重组病毒.qRT-PCR和Western blotting验证了重组病毒HPV16 E7基因的成功表达,病毒中和实验结果提示经重组病毒免疫后的小鼠血清能够中和Ad4-HPV16E7.结论成功构建了表达HPV16E7基因的重组腺病毒株,为进一步研究HPV16 E7在癌症发病机制中的作用以及HPV感染相关癌症的治疗方法提供新的思路和依据,并且可能为HPV治疗性疫苗的研究探索提供了一种潜在策略.

表达SARS-CoV-2 Omicron突变株RBD的重组4型腺病毒的构建与鉴定

目的构建和鉴定表达新型冠状病毒(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)Omicron株刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)的重组4型腺病毒。方法使用重叠延伸PCR和无缝克隆构建增强型绿色荧光蛋白和RBD双顺反子表达盒,将PCR得到的ccdB片段和pBR322-Ad4质粒进行同源重组获得中间质粒pBR322-Ad4-ccdB,使用PacI和SpeI酶切质粒pBR322-Ad4-ccdB后回收载体片段,回收片段与双顺反子表达盒在E.coli GB08Red中同源重组获得重组质粒pBR322-Ad4-RBD,用AsiSI线性化后转染HEK293T细胞获得重组腺病毒Ad4-RBD,RT-PCR验证RBD蛋白的转录,Western blot验证重组腺病毒中RBD蛋白的表达。结果重组腺病毒Ad4-RBD的滴度达到5×108 PFU/mL,并能在细胞中稳定表达外源基因。结论成功构建了表达SARS-CoV-2 Omicron株RBD蛋白的重组4型腺病毒,为SARS-CoV-2 Omicron株疫苗的研发提供了科学有效的依据。

Rac1促进异质型细胞叠套结构的形成

异质型细胞叠套结构(heterotypic cell-in-cell structure,heCICs)与肿瘤发生和发展密切相关,在生命科学研究中的重要性逐渐显露。Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)属于经典的Rho GTP酶,在细胞骨架以及细胞运动中起到关键调控作用。为研究Rac1在he CICs形成中的作用和机制,利用活细胞示踪剂cell-tracker分别标记肿瘤细胞和免疫杀伤细胞,建立heCICs模型。利用Rac1抑制剂NSC23766抑制Rac1活性后发现,肿瘤细胞与免疫杀伤细胞之间的heCICs形成率显著降低。通过分子克隆技术获得重组质粒pQCXIP-Rac1-EGFP,进行病毒包装感染肿瘤细胞获得Rac1过表达细胞系。进一步检测Rac1过表达对heCICs形成能力的影响,结果表明,Rac1表达水平升高后,heCICs形成率显著升高。本研究显示Rac1具有促进he CICs形成的作用,这为Rac1作为细胞叠套相关疾病的药物治疗靶点奠定了研究基础。

少突胶质前体细胞移植治疗早产儿脑白质损伤大鼠模型

目的探讨少突胶质前体细胞(OPCs)移植对治疗早产儿脑白质损伤(WMI)模型大鼠的长期作用。方法将80只3日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型对照组、5 d脑室/白质移植组、9 d脑室/白质移植组、14 d脑室/白质移植组(n=10);除假手术组外其余各组行右侧颈总动脉离断并缺氧80 min制备早产儿WMI模型;采用孕10~12周人胚胎脑组织制备OPCs。各移植组分别在造模后5 d、9 d和14 d将3×105OPCs注入右侧脑室/脑白质中,待大鼠60日龄和90日龄时分别对各组行电镜下脑髓鞘评估和神经功能评估。结果电镜下,大鼠60日龄时各移植组髓鞘损害程度相比模型组略有改善;无论是与同组60日龄大鼠还是与同日龄模型组大鼠比较,90日龄时各移植组的髓鞘均明显增厚,结构破坏更少,其中14 d移植组变化最为明显;但不同移植时间脑室和白质移植组间的髓鞘损害程度未见有明显差异。60及90日龄各移植组大鼠的神经功能缺陷评分(m NSS)均高于假手术组,但均低于模型组(P<0.05)。结论 OPCs移植可能对治疗早产儿WMI存在长期效应,延迟移植时间可能增强疗效。

传统的延续与流动——当代书法硕士八人漫谈

西方美术界,有“学院派古典主义”,他们所追求的,除了精湛的绘画技巧、传统的题材表现,尚反对一切粗鄙、庸俗的艺术风格及表现形式,且对偏激的个性表现(非传统)深恶痛绝,因而他们热衷于法则,热衷于规矩与古典,喜爱端庄大方、温文尔雅的艺术风格,同样地,“Academy”一词,最初是含有“正规”以及“走正路,不走歪路”的涵义在内的,但这一流派固执地恪守传统、反对艺术创作中作者对自我感情的表现,甚而反对一切艺术方面的改革,又为它招来了很大一部分的负面评价。