外泌体负载甲氨蝶呤递药体系的构建及表征

目的以巨噬细胞来源外泌体(exosomes,Exos)为载体,包载抗肿瘤药物甲氨蝶呤(methotrexate,MTX),构建一种纳米载药体系(MTX-Exos),并对其理化性质及在体外对肝细胞癌增殖的抑制作用进行研究。方法通过超速离心从RAW264.7细胞中提取纯化Exos,采用超声孵育法将MTX载入Exos,利用动态光散射(dynamic light scattering,DLS)、透射电镜(transmission electron microscope,TEM)和Western blot对其进行表征,并通过MTT实验研究了该递药体系抑制肝细胞癌增殖的作用。结果最优处方下的MTX-Exos的平均粒径为(174.3±3.2)nm,Zeta电位为(-10.8±0.3)mV,载药量为(2.81±0.02)%,外观形态呈茶托状双层膜结构并表达外泌体特异性蛋白Alix和TSG101。MTX-Exos对肝癌细胞的毒性作用比游离MTX更强。结论Exos成功负载MTX,制备方法简单可行,在体外试验中对肝细胞癌的增殖展示出良好的抑制作用。

灵芝孢子粉通过JAK1/STAT6信号通路抑制M2型巨噬细胞极化

目的探究灵芝孢子粉对M2型巨噬细胞极化的影响及其可能的作用机制。方法采用IL-4(100 ng·mL^(-1))刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,建立M2型巨噬细胞模型,分别给予灵芝孢子粉1、2、4 mg·mL^(-1)进行孵育。CCK8法观察灵芝孢子粉对正常巨噬细胞活力的影响,流式细胞术检测M2型巨噬细胞表面分子CD206和CD86的表达,RT-q PCR、ELISA检测TGF-β1、IL-10和Arg-1的表达;Western blot检测JAK1和STAT6磷酸化表达水平。结果与正常组相比,IL-4组M2型极化相关标志物CD206、TGF-β1、IL-10和Arg-1等表达显著升高(P<0.001),JAK1、STAT6磷酸化蛋白水平显著上升(P<0.001);灵芝孢子粉干预后,上述M2型极化相关标志物和蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05,P<0.001)。结论灵芝孢子粉可以抑制M2型巨噬细胞极化,其作用机制可能与抑制JAK1/STAT6信号通路有关。

藤黄碳量子点的制备、表征及其抗肿瘤活性研究

目的以藤黄为碳源制备出新型中药衍生碳量子点,探究其抗肿瘤活性。方法通过碱掺杂一步水热法制备藤黄碳量子点,并通过透射电镜、紫外-可见光谱、荧光光谱、X射线光电子能谱、傅里叶红外光谱进行表征,MTT法进行细胞毒性评价。结果碳量子点平均粒径为3.33 nm,分散均匀,量子产率为0.4%,在365 nm紫外灯照射下发出蓝色荧光,紫外-可见光谱和荧光光谱表明藤黄碳量子点具有优异的荧光特性,最大激发波长在367 nm,发射波长在455 nm,细胞毒性实验发现藤黄碳量子点对免疫细胞RAW264.7细胞毒性低,而对Bel 7402肝癌细胞呈现出高抗肿瘤活性。结论成功制备了以藤黄为来源的荧光碳量子点,具有极好的水溶性和优异的光致发光性,通过细胞毒性研究发现该碳量子点可改善原材料藤黄的药理活性,对正常细胞呈现低细胞毒性而对肿瘤细胞表现出高抑制活性,具有一定的抗肿瘤效果,也为后续进一步研究抗肿瘤活性机制提供了一定的基础。

牡荆素白蛋白纳米粒的制备及其药动学研究

该文旨在制备牡荆素白蛋白纳米粒(VT-BSA-NPs)以改善牡荆素(vitexin,VT)水溶性差而导致的体内生物利用度低的问题。利用反溶剂结晶法制备VT微粉,对VT微粉的形貌大小和理化性质进行研究,结果显示VT微粉粒径在(187.13±7.15)nm,外貌形态近似球形,大小分布均匀;相较于VT原料药,VT微粉的化学结构并未发生变化。去溶剂化-交联固化法将VT微粉制备成VT-BSA-NPs,通过单因素考察和正交试验对制备工艺进行筛选并对最优处方的粒径、PDI、Zeta电位、EE和形态学等进行质量评价,结果显示VT-BSA-NPs的平均粒径为(124.33±0.47)nm,PDI为0.184±0.012,Zeta电位为(-48.83±2.20)mV,包封率为83.43%±0.39%,均符合制剂相关要求。形态学结果表明VT-BSA-NPs外观呈近球形,形状规整,表面无黏连。体外释放结果显示相较于VT原料药,VT-BSA-NPs的释放速率显著降低,具有良好的缓释效果。LC-MS/MS建立VT的体内分析方法学并研究VT-BSA-NPs在大鼠体内的血浆药代动力学,结果表明该分析方法的特异性良好,提取回收率均大于90%;与VT原料药和VT微粉相比,VT-BSA-NPs能够显著提高AUC、MRT和t_(1/2),有利于提高VT的生物利用度。

茯苓多糖衍生碳点的细胞行为学研究

碳点的生物学行为,特别是关于细胞摄取和细胞内分布机制研究,是其生物医学应用的基础。本研究以茯苓多糖为原料,采用水热法合成了蓝色荧光碳量子点,探索碳点进入细胞的具体生物学行为,以评估其生物学活性。利用透射电子显微镜、紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射和X射线光电子能谱对其进行了表征;以免疫细胞-RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)和癌细胞-4T1细胞(小鼠乳腺癌细胞)这两种不同的细胞系为研究对象,研究茯苓多糖碳点在细胞内的摄取动力学过程及其摄取途径、分布和外排等过程。研究结果显示,茯苓多糖衍生碳点的粒径分布范围为2~10 nm,平均粒径为6.85 nm,主要由C、O和N元素组成,具有-OH、C=O、C-N、C=C等丰富的表面官能团,荧光量子产率为4.72%。碳点进入细胞可呈现出一定的浓度和时间依赖性,不同的细胞系,摄取内吞途径不一。在RAW264.7细胞内主要以巨噬细胞特有的吞噬作用摄取进入细胞内,少部分通过小窝蛋白介导的内吞作用,而对于4T1细胞主要是通过网格蛋白介导的内吞作用和巨胞饮过程。综上,合成的中药衍生碳点具有良好的荧光特性、低细胞毒性和优异的生物相容性,可用于细胞成像应用研究。

中药衍生碳点研究进展

中药炭药及中药提取物经高温炭化会产生"中药炭质药物纳米粒",其过程与碳量子点(carbon quantum dots,CDs)的制备工艺类似。由于粒径小于10 nm,称之为"中药衍生碳量子点"。炭药的质量标准是"存性",以中药为原材料制备而成的CDs,不仅具有止血、抗肿瘤等功效,而且具有低毒、水溶性好、生物相容性高、光致发光性能优异等特点,可用于离子检测、药物分析传感、细胞成像、药物递送等领域。从中药衍生碳点在疾病治疗、生物传感和细胞成像等方面的最新进展进行了综述,并对其当前面临挑战和未来发展方向提出建议。