基于过程性评价的药物化学课程教学探索与实践

目的探讨药物化学课程过程性评价对教学效果的影响。方法选择2016级药学A班90名学生作为实验组,采用过程性评价为主的全过程考核评价体系进行考核;2016级药学B班80名作为对照组,采用传统的终结性评价进行考核。通过综合考核和问卷调查,评估教学改革的效果和满意度。结果实验组学生的期末考试成绩、综合成绩均高于对照组(P<0.01)。过程性考核成绩排名与其综合成绩排名(r=0.774,P<0.001)呈现显著的正相关关系;考核方式科学、合理,充分调动了学生学习主动性,培养了学生独立思考、解决问题和创新思维的能力,提高了教师教学水平、课堂教学效果及人才培养质量。结论基于过程性评价的药物化学课程考核评价体系改革,在提高教学效果和教学质量,培养创新型药学人才中发挥着积极的促进作用。

Hsp90抑制剂WK-88-1对人乳腺癌细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂WK-88-1对人乳腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响。方法 MTT实验检测不同浓度的WK-88-1(1. 562 5,3. 125,6. 25,12. 5,25,50μmol/L)对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞存活率的影响;集落克隆实验检测不同浓度的WK-88-1(0. 1,0. 3,0. 5μmol/L)对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞集落形成的影响;细胞划痕实验和Transwell小室法检测WK-88-1对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞迁移和侵袭的影响;免疫印迹法检测WK-88-1对Hsp90顾客蛋白缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响。结果 WK-88-1具有抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖的作用,且呈现浓度和时间依赖性(P<0.05)。MDA-MB-231和MCF-7经不同浓度的WK-88-1处理后,癌细胞的迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05)。免疫印迹法结果显示,随着WK-88-1给药浓度(12. 5,25,50μmol/L)的增加,细胞内的HIF-1α和MMP-9蛋白的表达均下调。结论非苯醌格尔德霉素WK-88-1能够显著抑制人乳腺癌细胞迁移与侵袭,其机制可能与下调Hsp90的顾客蛋白HIF-1α和MMP-9有关。

天然药物化学教学实践与体会

天然药物化学课程是药学专业中一门重要课程。为了更好地提高教学效果,笔者从优化、组合教材内容,提高课堂教学效果,注重实验教学三个方面阐述了天然药物化学教学的实践与体会。

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用

目的探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、SMMC7721细胞的增殖抑制作用。选择低于半数抑制浓度（IC50）的100μmol／L的3-BP和8μmol／L的顺铂单独或联合处理细胞，PI单染流式细胞术检测细胞凋亡，caspase3活性检测试剂盒测定caspase-3的活性变化，ATP检测试剂盒测定细胞内ATP水平，Western blot检测XIAP、PARP蛋白的表达。结果3-BP在50-400μmol／L浓度范围内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．01），作用48h的IC50分别为238．9±13．9μmol／L、278．7±11．7μmol／L；顺铂在2～32μmol／L浓度范围内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．01），作用48h的IC50分别为16．4±0．9μmol／L、20．9±1．8μmol／L。100μmol／L3-BP与8μmol／L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48h的增殖抑制率分别为（60．6±2．2）％、（56．8±2.3）％，明显高于对照组和单独用药组（P〈0．01）。100μmol／L3-BP与8μmol／L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48h的凋亡率分别为（51．1±4．3）％、（46．5±3．9）％，较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P〈0．01）。结论3-BP能增强肝癌细胞HepG2、SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性，其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的活性。

Hsp90抑制剂槚如酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂槚如酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法采用体外malachite green-molybdate显色反应和ATP-琼脂糖凝胶结合实验检测槚如酸对Hsp90抑制活性;MTT法检测药物对MDA-MB-231增殖抑制效应;Transwell小室法检测药物对细胞侵袭和迁移影响;免疫印迹法检测药物对相关蛋白基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、Hsp90、热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响。结果槚如酸为特异性的Hsp90抑制剂,其抑制IC50值为82.5μmol/L。MTT结果显示,槚如酸具有明显抑制细胞增殖的作用,且呈现浓度依赖关系,其IC50值为29.3μmol/L。不同浓度的槚如酸(12.5,25.0,50.0μmol/L)处理36 h后,与对照组相比,药物对细胞侵袭抑制率分别为:23.6%、56.6%、67.0%,P<0.05。槚如酸(12.5,25.0,50.0μmol/L)处理24 h后,与对照组相比,药物对细胞迁移抑制率分别为:30.0%、45.5%、77.5%,P<0.05。免疫印迹法结果显示,槚如酸随着浓度的增加,诱导MMP-9降解越明显,而对Hsp90和Hsp70蛋白表达均没有影响。结论槚如酸能明显抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力,其机制可能是通过抑制Hsp90 ATPase活性以及导致下游的顾客蛋白的MMP-9表达下调有关。

新木脂素的酶法糖基化及抗肿瘤活性

目的以厚朴酚与和厚朴酚为底物,进行酶法糖基化修饰以及检测其抗肿瘤活性,提高新木脂素类化合物（厚朴酚与和厚朴酚）的水溶性和生物活性,。方法利用来源于Bacillus的糖基转移酶（Yji C）,通过酶法糖基化制备厚朴酚与和厚朴酚糖基化产物;经高效液相色谱（HPLC）、液相串联质谱（LC-MS）、核磁共振（NMR）检测分析鉴定其结构;通过MTT法检测药物对多种肿瘤细胞的增殖抑制效应。结果利用酶法糖基化反应制备了2个新木脂素（厚朴酚与和厚朴酚）糖基化产物,并显著提高了其水溶性;糖基化产物分别鉴定为magnolol-2-O-β-D-glucopyranoside（1）和honokiol-4＇-O-β-D-glucopyranoside（2）;MTT结果显示,厚朴酚与和厚朴酚及其糖基化产物对4种肿瘤细胞均表现出较强的抑制细胞增殖的作用,且呈现浓度依赖性,其IC50范围为9.41~111.21μmol/L。结论厚朴酚与和厚朴酚糖基化产物显著提高水溶性以及增加了药物对SMMC7721细胞的敏感性,并具有良好的应用前景。

补骨脂抗氧化及抗肿瘤活性成分的研究

目的：研究补骨脂成分的抗氧化和抗肿瘤活性。方法：运用多种柱色谱等现代分离手段对补骨脂甲醇浸膏进行分离,利用磁共振技术和电喷雾电离质谱鉴定化合物的结构,并评价化合物的抗氧化和抗肿瘤活性。结果：分离出11个化合物,鉴定为：1补骨脂素,2异补骨脂素,3补骨脂定,4补骨脂苷,5异补骨脂苷,6双补骨脂酚A,7双补骨脂酚B,812,13-二氢-12,13-环氧补骨树脂酚;9补骨脂宁,10异补骨脂二氢黄酮,11补骨脂二氢黄酮甲醚。化合物3,6,7具有清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的能力;3,9~11对肝癌Hep G2细胞和乳腺癌MDA-MB-231细胞具有抗增殖作用,7对肝癌Hep G2细胞有一定抗增殖作用。结论：化合物3,6,7具有一定的抗氧化活性;3,7,9~（11）瑡具有一定的抗肿瘤活性。

刺五加注射液对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的：观察刺五加注射液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法：昆明种雄性小鼠60只（18-22 g）,随机分为正常组、模型组、硫普罗宁阳性药对照组和刺五加高、中、低剂量组（200 mg/kg、100 mg/kg、50 mg/kg）,每组各10只。采用50%乙醇12 ml·kg^-1·d^-1连续灌胃10 d,制备小鼠酒精性肝损伤模型。测定血清中天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶及三酰甘油（TG）水平;肝组织丙二醛、还原型谷胱甘肽含量,计算肝脏指数,并观察肝脏病理变化。结果：小鼠酒精性肝损伤模型构建成功。除刺五加低剂量组TG水平与模型组差异无统计学意义（P〉0.05）外,与模型组比较,刺五加注射液均能够降低血清中天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶和TG水平（P〈0.05-P〈0.01）;抑制小鼠肝脏组织丙二醛含量的升高,提高肝脏中还原型谷胱甘肽含量（P〈0.05-P〈0.01）;减轻肝脏病理组织损伤;刺五加高、中剂量组均能降低小鼠肝脏指数（P〈0.05和P〈0.01）。结论：刺五加注射液对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激有关。

化学修饰赋予肝素低抗凝血活性和高抗肿瘤活性

目的对肝素进行化学修饰改造,并检测化学修饰物的抗凝血活性和抗肿瘤活性。方法用高碘酸钠氧化、硼氢化钠还原法降解普通肝素(UFH),并用大位阻二环己基碳二亚胺(DCC)和二甲氨基吡啶(DMAP)为催化剂对所获低分子量肝素(LMWH)进行乙酰化修饰,获得低抗凝活性的乙酰化低分子肝素(ALMWH)。分别在小鼠和MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞株检测ALMWH的抗凝血活性和抗肿瘤细胞增殖和侵袭活性。结果 ALMWH的抗凝血活性显著降低,市售低分子肝素(LMWH*)延长凝血时间(CT)1倍的浓度为33.04μmol·L-1,ALMWH延长CT 1倍的浓度为223.56μmol·L-1,ALMWH将小鼠凝血时间延长1倍所需的药物浓度提高到LMWH*的6倍之多。0.1、0.3、0.9、2.7、8.1 mmol·L-1系列浓度的ALMWH和LMWH对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖均表现出显著的剂量依赖性抑制作用。但两药的抑制人乳腺癌细胞增殖强度具有明显的差异。LMWH和ALMWH的半数抑制MCF-7增殖浓度(IC50)分别为3168.4μmol·L-1和152.6μmol·L-1,半数抑制MDA-MB-231增殖的IC50分别为12299.6μmol·L-1和22.2μmol·L-1。化学修饰将LMWH抑制MCF-7的IC50和抑制MDA-MB-231的IC50分别降低了20和560倍。ALMWH和LMWH对于MDA-MB-231细胞的侵袭能力具有明显的抑制作用,统计学分析未发现二者抑制强度上的明显差异。结论结构的化学修饰可降低LMWH的抗凝血活性,增强其抗癌细胞增殖和侵袭活性。

低分子量肝素联合吉西他滨对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低分子量肝素(low molecular weight hepa-rin,LMWH)对吉西他滨(gemcitabine,GEM)抗肿瘤作用的影响及其作用机制。方法实验分为对照组、LMWH组、GEM组、LMWH与GEM联合应用组。MTT法测定药物对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞增殖的影响;细胞划痕实验、Tr-answell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达;ELISA法检测乳腺癌细胞培养液中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的表达。结果 LMWH对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的增殖没有明显影响,亦不能增强GEM的增殖抑制作用。30×104IU·L-1LMWH与2.5 mg·L-1GEM联合作用于MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞24 h的迁移抑制率分别为66.3%、76.5%,较单用GEM的迁移抑制率(MDA-MB-231细胞47.4%,MDA-MB-435细胞52.9%)明显提高。同时LMWH与GEM合用对乳腺癌细胞侵袭的抑制也明显高于GEM单用时的作用。GEM可下调MMP-9和HPA的表达,与LMWH合用时下调更加明显。结论 LM-WH具有增强GEM抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。

药物化学教学与创新型人才培养的探讨

针对药物化学教学中存在的问题,对于提高药物化学教学效果的方法进行了探讨,在培养学生兴趣爱好及能力的基础上,实施"教学-实验-科研"三位一体化的高度融合的教学模式,为学生创造适宜其发展的个性空间。对蚌埠医学院在人才培养和提升药学本科生创新、创造性能力等方面起到极大的指导作用,丰富了创新型药学人才培养理论。

酶法糖基化合成一种新型补骨脂定葡萄糖苷（英文）

目的为提高补骨脂定的水溶性和稳定性,用体外酶法糖基化反应对其进行结构修饰。方法通过UDP-糖基转移酶对补骨脂定进行糖基化修饰,合成一种新的葡萄糖苷化合物(1)。使用高分辨电喷雾电离质谱(HR-ESI-MS)和核磁共振(NMR)分析,鉴定化合物1的结构;利用高效液相色谱峰面积计算出样品溶液的浓度;MTT法检测化合物对3种肿瘤细胞(SMMC7721、MCF-7、SW480)增殖的影响。结果根据波谱分析,鉴定制备出的新型葡萄糖苷化合物为psoralidin-6',7-di-O-β-Dglucopyranoside(1)。水溶性检测结果表明,化合物1的水溶性是底物(补骨脂定)水溶性的32.6倍。此外,化合物1在p H 8.8和高温条件下较补骨脂定更加稳定。在抗肿瘤细胞增殖实验中,只有补骨脂定对3种肿瘤细胞都显示出较强的抑制能力。结论体外酶法糖基化是进行结构修饰、改善水溶性和稳定性的强有力方法。

HPLC-FL法测定大鼠血浆中新木脂素双和厚朴酚A的浓度及药代动力学研究

目的探究双和厚朴酚A(bishonokiol A,BHNKA)在大鼠体内的药代动力学过程。方法采用HPLC-FL法建立大鼠血浆中BHNKA的分析方法。8只大鼠灌胃BHNKA(40 mg/kg),测定不同时间点的血药浓度,绘制药时曲线,并用DAS 3.2软件计算相关药代动力学参数。结果大鼠血浆中BHNKA在0.98-250.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好,平均提取回收率为86.8%-93.7%,日内、日间精密度均小于10%。主要药代动力学参数浓度-时间曲线下面积(AUC 0-∞)为(348.57±176.02)ng/(ml·h),消除半衰期(t 1/2)为(7.14±4.04)h,清除率(CL/F)为(0.14±0.06)L/(h·kg),达峰浓度(C max)为(84.97±32.58)ng/ml。结论本研究建立了操作简便、快速、灵敏度高的检测大鼠血浆中BHNKA的HPLC-FL方法。

17-Demethoxy-reblastatin联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察17-Demethoxy-reblastatin(17-DR)联合顺铂(cisplatin,DDP)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制。方法用MTT法、集落克隆形成法检测药物对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测药物作用后细胞的凋亡情况。结果不同浓度17-DR或DDP对细胞增殖具有抑制作用,且二者联用时抑制作用增强。50μmol·L-117-DR、8μmol·L-1DDP及二者联用刺激24 h诱导细胞的凋亡率依次为14.7%、20.1%、45.2%。联合用药组Caspase-3的激活增强以及下调RIP1蛋白的表达。结论 17-DR作为热休克蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂能够增强DDP对MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能与下调Hsp90的顾客蛋白RIP1的表达相关。

淡水真菌Acremonium tubakii BMC-58产多肽cephaibol A的发酵工艺及抗菌活性

目的 改良淡水真菌Acremonium tubakii BMC-58产多肽cephaibol A的发酵工艺,提高其产率并检测其抗菌活性。方法 通过对6种培养基的筛选确定基础培养基后,采用单因素实验研究接种量、培养温度、摇床转速、培养时间、初始pH、碳源、氮源和无机盐对菌株BMC-58产cephaibol A产率的影响,确定最适的培养条件;接下来采用Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验和响应面试验优化培养基成分;最后通过纸片法检测cephaibol A对4种细菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA;Staphylococcus aureus,S.aureus;Bacillus subtilis,B.subtilis;Mycobacterium phlei,M.phlei)的抗菌活性。结果 确定了菌株BMC-58在真菌2号培养基中产多肽cephaibol A的产率最高,并将培养基成分调整为蛋白胨、酵母浸膏、玉米淀粉、可溶性淀粉、MgSO_(4)、CaCO_(3)、谷氨酸钠和甘露醇,培养条件为菌株接种量2%,培养基初始pH6.0,培养温度28℃,摇床转速180 r/min以及培养时间7 d,最终cephaibol A的产率(17.23 mg/L)比优化前(8.7 mg/L)提高了1.97倍。同时抗菌实验中cephaibol A对MRSA抗菌活性较好,抑菌圈为9.0 mm。结论 通过优化培养条件后,cephaibol A的产率具有一定的提高,对检测的4种细菌也都有较好的抗菌活性,是一种潜在的抗耐药菌药物。

Hsp90抑制剂白果酸与紫杉醇的协同抗鼻咽癌作用

目的:鼻咽癌是一种发病率高、病死率高的头颈部恶性肿瘤,易出现局部复发、远处转移以及耐药的情况,使得患者治疗后生存率并不高。紫杉醇作为化学治疗药物用于治疗鼻咽癌,但鼻咽癌细胞易对紫杉醇产生耐药性。而抑制热激蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)可以克服在许多癌症中常见的信号冗余和耐药机制。本研究旨在探究Hsp90抑制剂白果酸联合紫杉醇对鼻咽癌CNE-2Z细胞抗肿瘤活性的影响及其机制。方法:本实验分为对照组(不加药液)、白果酸组(10、30、50、70μmol/L)、紫杉醇组(5、10、20、40 nmol/L)和联用组,各组采用相应药物处理CNE-2Z细胞。采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测CNE-2Z细胞的存活率;划痕试验和Transwell迁移试验检测CNE-2Z细胞的迁移情况;Transwell侵袭试验检测CNE-2Z细胞的侵袭能力;AnnexinV-FITC/PI双染检测CNE-2Z细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测白果酸与紫杉醇联用后细胞侵袭迁移、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,白果酸组和紫杉醇组均可抑制CNE-2Z细胞增殖(均P<0.05)。50μmol/L白果酸和5、10、20、40 nmol/L紫杉醇联用组细胞存活率均低于单用紫杉醇组(均P<0.05),药物联用指数(combination index,CI)小于1,具有协同作用。与单用50μmol/L白果酸组和10 nmol/L紫杉醇组相比,联用组可明显抑制CNE-2Z细胞侵袭和迁移(均P<0.05),且下调Hsp90客户蛋白基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达水平。双染结果显示:与单用50μmol/L白果酸组和10 nmol/L紫杉醇组相比,联用组的细胞凋亡率明显升高(均P<0.05),且联用后下调Hsp90客户蛋白Akt和B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达,上调Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)的表达。结论:白果酸和紫杉醇联用后具有协同作用,可抑制CNE-2Z细胞增殖、侵袭及迁移,诱导细胞凋亡,这些作用可能与白果酸抑制Hsp90活性有关。

基于OSMAC策略对淮河来源真菌Talaromyces stipitatus BMC-16化学成分多样性的研究

目的采用单菌株多次级代谢产物(OSMAC)策略对分离自安徽蚌埠淮河区域泥样的真菌Talaromyces stipitatus BMC-16进行化学多样性的研究。方法基于OSMAC策略,选用19种不同培养基分别小规模发酵培养菌株Talaromyces stipitatus BMC-16。观察不同培养基条件下菌株生长状态,采用高效液相色谱法(HPLC)和薄层色谱法(TLC)分析小规模发酵次级代谢产物化学多样性,纸片法检测其抑菌活性。结果在不同培养基中,菌株的产量、生长形态、代谢产物分布以及抑菌活性均有差异,显示出较佳的代谢潜能。对不同培养基发酵物中的主峰进行分离纯化,获得化合物1,经鉴定为已知化合物stipitatic acid。结论基于OSAMC策略,改变培养基条件,对菌株Talaromyces stipitatus BMC-16的次级代谢产物有显著的影响,丰富了该菌株次级代谢产物的化学多样性。

碱提酸沉法提取补骨脂中补骨脂乙素的工艺研究

目的:通过碱提酸沉的方法对补骨脂乙素的提取进行工艺优化。方法:以补骨脂乙素的含量为指标,通过单因素试验和正交试验考察料液比、碱液浓度、碱提时间、酸沉pH、酸沉时间以及超声时间对补骨脂乙素提取工艺的影响。结果:碱提酸沉法提取补骨脂乙素的最佳工艺为:料液比为1∶10、碱液浓度为4%、碱提时间为2 h、酸沉pH为6、酸沉时间为0.5 h、超声时间为20 min。结论:本研究优化的最佳工艺条件具有良好的复重性,且稳定可靠、经济环保,适合大量提取补骨脂中的补骨脂乙素。

基于创新能力培养的药物化学课程教学探索与实践

目前国家和社会对创新创业越来越重视,高校作为人才培育的主要平台,提高大学生创新能力变得非常重要.药物化学是药学专业领域的领头学科,在药学高等教学实践过程中起主导作用.为加强创新能力的培养,笔者对药物化学课程教学体系进行探索与实践,着重从课程标准的制定、优化教学内容、改进教学方法和教学手段、建立和完善实验教学和实践平台、构建科学合理的评价体系等方面进行教学改革,以提高药物化学课程的教学质量.

浅析教学竞赛对高校教师教学能力的促进作用

在高校大力引进人才,扩充师资队伍的大环境下,如何保证青年教师的教学质量、提高教学水平,是摆在各大高校面前的亟待解决的问题。目前针对现有的培养工作存在的诸多不足,在各方面不断改进的同时,教学竞赛作为对教师教学技能培养、教学团队建设、教学经验交流的有效途径,越来越受到人们的关注。高校对青年教师培养工作的现状和提高青年教师教学水平的方式进行分析,提出教学竞赛的组织和开展对于提高教师综合素质,改善教学质量,提高教学水平方面的积极作用。并且强调教学竞赛不能仅流于形式,还需要不断反思和完善,使其成为切实有效提高青年教师教学能力的利器。