钛合金、人工骨材料厚切片再研磨后显示新生骨-荧光双标法

因钛合金、人工骨材料组织坚硬，无法切出较薄的完整切片。，传统方法切片只能看到骨结构，V－G染色法镜下观察切片颜色不鲜亮，细胞核模糊，软骨和纤维结缔组织很难辨别，荧光双标两条线不够清晰，只能采集低倍图片。本文现介绍一种新方法，用502胶粘贴于有机玻片上，再经自制电动磨片机研磨至30～50μm厚，用Van Gieson（亚甲基兰一酸性品红，简称V－G）染色，颜色对比鲜艳，高倍镜下骨细胞核、软骨、纤维结缔组织等均町清晰辨别。四环素一钙黄绿素荧光双标更为清晰[1-3]。

冷冻切片法在蚕丝材料组织学中的应用

蚕丝具有良好的生物力学性能——组织相容性和生物可降解性，同时蚕丝降解速度较慢，在体外1年后才失去大部分抗张强度，被广泛应用于医学领域。蚕丝很早就被用作手术缝合线，近年来在组织工程韧带方面的研究也逐渐增多。蚕丝支架进行体外和体内实验后利用常规石蜡包埋切片，发现切片不完整，染色后出现严重脱片的现象；而采用不脱钙塑料包埋切片，存在切片太厚，不能进行免疫组化染色的缺点。

混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析

目的 比较不同脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响.方法 选取16例大鼠胫骨标本,运用两种常用的脱钙液(混合脱钙液和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响.结果 两种脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别.结论 混合脱钙液时间最短,但切片和染色效果最差;EDTA脱钙液对骨组织损伤小,HE染色效果最好,但用时较长.

bBMP异位诱导成骨的组织学长期观察

目的长期观察并获得单纯牛骨形态发生蛋白（bovine bone morphogenetic protein,bBMP）异位诱导成骨的组织学变化。方法（20±2）g昆明小鼠21只,麻醉后于双侧股部肌肉中直接植入块状bBMP各2mg,分别于第1、2、4、6、8、10、12周各处死3只,切取诱导分化组织,5%戊二醛固定,标本用10%EDTA脱钙后制作5μm石蜡切片,分别行甲苯胺蓝染色,HE染色,丽春红三色染色观察组织学变化情况。结果植入1周,大量分化良好的间充质细胞和幼稚软骨细胞形成一椭圆形分化组织块;植入2周,大量骨小梁生成,部分骨小梁边缘骨化;植入4周,骨小梁转化为成熟的骨质,骨质中有散在于骨细胞中的破骨细胞生成;植入6-12周,椭圆形骨组织块内部小梁骨逐渐吸收、断裂、不连接,但外周骨质逐渐塑形,局部成熟骨质周边仍伴有新生骨形成。结论bBMP无需任何载体即可在肌肉中异位成骨,具有强大的异位骨诱导能力;血供在异位骨的形成和维持中可能起着重要作用。

不脱钙大块骨切片及染色的改进

骨组织致密，坚硬，并含有骨胶等成分，无论是脱钙，还是不脱钙切片，切好一张高质量的切片(和软组织相比)，仍有一定得困难。不脱钙大块骨切片及染色是近年来推出的一项新技术，由于是新技术，故方法不够稳定。无论是切片质量或是染色效果还需要改进和提高。在塑料包埋不脱钙大块骨切片及染色(临床与实验病理杂志，2002，18(3)：342)

硬组织切片VG染色不良原因分析及对策

随着医学理论的不断发展,各种医用体内植入物不断涌现,特别是在骨科领域,各种合金制备的钢板、螺钉、融合器甚至人工关节应用日益广泛。因而针对此类植入物与骨组织相容性的基础性研究也逐渐凸显,而材料组织切片技术在病理实验中已成为一种重要的形态学检验技术。Van Gieson(VG)染色具有染液渗透力强、组织颜色鲜亮、显示骨组织形态充分等优点,被认为是硬组织切片最常用最好的染色方法。染色结果的好坏直接影响实验结果的准确性,显微镜观察的美观度。本文针对染色中容易出现的问题进行总结分析,提出了一系列改进措施,染色结果非常满意。

脱细胞软骨基质三维支架的制备及特性研究

[目的]探索脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备及其应用于关节软骨组织工程的可行性。[方法]新鲜牛膝关节软骨粉碎后,梯度离心法获取软骨微粒,采用改进的Courtman改良法处理细胞后,再冷冻干燥,制备脱细胞软骨基质三维多孔支架。然后,采用京尼平对三维支架进行交联,再次冷冻干燥后,对支架材料进行大体、组织学染色及扫描电镜观察,分别测定支架的孔隙率、溶胀率、降解率。最后,分离培养兔骨髓基质细胞(BMSCs),采用MTT法检测BMSCs在支架材料上的生长、增殖情况,以柱形图表示。[结果]大体观察显示支架呈疏松多孔状,京尼平交联后整体呈深蓝色。组织学观察显示支架材料无软骨细胞碎片残留,HE染色、甲苯胺兰染色观察均未见软骨细胞残留。测量示支架孔隙率为90%,溶胀率为(1314±337)%,降解率2周为(13.69±7.3)%,4周为(25.99±8.9)%。MTT法显示细胞在支架上生长良好,与对照组DMEM培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P>0.05),提示支架无细胞毒性。扫描电镜显示支架内孔洞较明显,BMSCs通过细胞突起黏附于支架表面,黏附良好,能较好地在其上生长。[结论]经改进的Courtman改良法处理的软骨基质三维多孔支架脱细胞更彻底,保留了软骨的天然细胞外基质成分,天然交联剂京尼平交联后支架的细胞相容性好,抗降解性得到了提高,是一种适用于软骨组织工程的良好载体。

体外不同强度脉冲压力刺激对兔桡骨缺损修复的影响

目的比较不同强度脉冲压力刺激对兔桡骨缺损修复的影响，为选取合适的压力刺激强度提供实验依据。方法取新西兰大白兔32只，构建5mm桡骨缺损模型，随机分为4组（n=8）：对照组术后正常喂养，不进行体外脉冲压力刺激；实验组于术后第4天分别给予不同强度的体外脉冲压力刺激持续至术后4周，1次／d，30min／次。脉冲频率为15Hz，并按照压力强度分为15—7kPa组，8-10kPa组，11～13kPa组。术后4周取材行标本大体观察、X线摄片和组织学观察以评价缺损修复情况。结果术后4周标本大体观察：8—10kPa组桡骨缺损处新生骨痂较其他3组明显偏多。术后4周x线片示4组骨缺损区均被大量高密度影填充，8—10kPa组已基本形成完全骨性连接，其他3组骨缺损区仍可见较多低密度间隙。术后2、4周x线片．dicom原始数据分析显示8—10kPa组骨缺损区x线灰度值最高，与其他3组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后4周Lane-SandhuX射线评分8-10kPa组最高，与其他3组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后4周VanGieson染色结果显示：8—10kPa组骨缺损区已有大量新生小梁骨完全填充，骨缺损两断端已基本形成完全骨性连接，其他3组骨缺损区有较多新生骨，其间尚存在许多纤维软骨团，骨缺损两断端未形成完全骨性连接。结论体外脉冲压力在8。10kPa范围内对骨缺损修复有明显的促进作用。

海藻酸钙对骨质疏松症大鼠骨骼肌SDF-1含量和骨密度的影响

目的:探讨海藻酸钙对骨质疏松症大鼠骨骼肌基质细胞衍生因子-1(Stromal Cell-derived Factor-1,SDF-1)含量和骨密度的影响。方法:骨质疏松症大鼠(n=48)随机平分为三组-模型组、尼尔雌醇组与海藻酸钙组,在建模后1周后三组分别给予双蒸水、0.1 mg/100 g尼尔雌醇与37.5 mg/m L海藻酸钙/枸杞多糖凝胶微球水溶液灌胃治疗,1次/d,检测大鼠骨骼肌SDF-1含量和骨密度变化情况。结果:(1)尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的血清钙离子含量高于模型组(P<0.05),磷离子含量低于模型组(P<0.05),尼尔雌醇组与海藻酸钙组对比差异有统计学意义(P<0.05);(2)尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的骨骼肌SDF-1含量低于模型组(P<0.05),海藻酸钙组低于尼尔雌醇组(P<0.05);(3)尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的腰椎和股骨骨密度高于模型组(P<0.05),海藻酸钙组低于尼尔雌醇组(P<0.05);(4)尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的股骨最大载荷、最大应力高于模型组(P<0.05),海藻酸钙组高于尼尔雌醇组(P<0.05);(5)海藻酸钙组造血细胞数量较多,骨皮质结构较完整,致密均匀粗壮,小梁数目明显增多,骨髓腔变小。结论:海藻酸钙在骨质疏松症大鼠的应用能抑制骨骼肌SDF-1的释放,有助于提高骨密度,改善骨生物力学指标,提高血清钙离子含量,降低磷离子含量。

椎间盘组织冷冻切片制作技术的应用

目的探讨椎间盘组织冷冻切片在椎间盘退变相关研究中的优势。方法选取12周龄大鼠尾椎作为椎间盘样本来源,通过48 h的4%多聚甲醛固定和4周10%EDTA脱钙液脱钙处理后,行蔗糖梯度脱水以及OCT包埋切片。对切片进行组织学染色和免疫荧光染色。结果HE染色和番红O染色切片显示,椎间盘结构完整,整个髓核组织清淅可见,纤维环的结构相对完整,软骨终板的软骨样结构和椎体的骨性结构区分明显;HE染色和番红O染色切片显示,椎间盘结构完整,整个髓核组织清淅可见,纤维环的结构相对完整,软骨终板的软骨样结构和椎体的骨性结构区分明显。结论不论是常见的化学染色还是免疫荧光染色,冷冻切片均显示出对椎间盘组织较好的染色效果,但冷冻切片在椎间盘退变的基础研究中具有显著的优势。