单纯疱疹病毒2型ICP27_(377-513)核酸疫苗联合IL-15核酸疫苗免疫效果的观察

目的构建表达单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27(infected cells protein 27,ICP27)的重组质粒pcDNA3.1-ICP27377-513并观察白细胞介素(IL)-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗的免疫效果。方法采用分子克隆技术构建pcDNA3.1-ICP27377-513重组质粒。将BALB/c雌性小鼠随机分为pcDNA3.1-ICP27377-513联合pcDNA3.1-IL-15(pIL-15)组、pcDNA3.1-ICP27377-513组、pcDNA3.1组和pIL-15组,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后28 d取血,用微量中和实验法检测血清中特异性中和抗体,ELISA法检测血清中IL-4、IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)水平。阴道给予致死量HSV-2攻击小鼠,分别于接种后3 d、7 d和14 d收集阴道冲洗液,用荧光定量PCR法检测生殖道病毒载量。结果pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组中和抗体效价分别为40.00±8.16、28.67±4.47,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组IFN-γ、IL-4水平明显高于pcDNA3.1-ICP27377-513组(P<0.05),但IL-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴道给予致死量HSV-2攻击后,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组小鼠阴道冲洗液中病毒载量随着时间延长逐渐减低,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗对小鼠有较好的免疫保护作用。

HLA-E基因表达沉默对人乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨HLA-E基因表达对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为的影响,分析靶向HLA-E基因的小分子RNA干扰(siRNA)技术应用于乳腺癌治疗的可行性。方法:设计并合成靶向HLA-E基因的特异性siRNA序列,转染至人乳腺癌细胞MDA-MB-231,同时设立空白对照组、阴性对照组及脂质体组。实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法分别检测各组乳腺癌细胞HLA-E mRNA及蛋白的表达;CCK-8法和流式细胞术检测各组乳腺癌细胞增殖率和凋亡率;Transwell实验检测各组乳腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果:乳腺癌细胞转染HLA-E siRNA后,HLA-E mRNA及蛋白表达水平明显降低。与阴性对照组相比,HLA-E siRNA转染组乳腺癌细胞增殖率降低(P<0.01);凋亡率增加(P<0.01);侵袭迁移能力降低(P<0.01)。结论:靶向人乳腺癌细胞HLA-E基因的siRNA能有效抑制其基因表达,进而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低乳腺癌细胞侵袭和迁移能力。

人类白细胞抗原-E基因多态性与乳腺癌遗传易感性的关系

目的探讨人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因多态性与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法对中国张家口地区200例乳腺癌患者和114例健康对照人群HLA-E等位基因进行检测。结果乳腺癌患者和健康对照组均检出两种等位基因:HLA-E*0101和HLA-E*0103;共检出三种基因型:HLA-E*0101/HLA-E*0101、HLA-E*0101/HLA-E*0103和HLA-E*0103/HLA-E*0103。其中HLA-E*0103等位基因和HLA-E*0103/H L A-E*0 1 0 3基因型在乳腺癌患者组的分布频率明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。且携带HLA-E*0103/HLA-E*0103基因型的个体乳腺癌发病风险明显增加(OR=2.05,P=0.004)。结论 HLA-E基因多态性与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易感性相关,并且HLA-E*0103/HLA-E*0103等位基因可能是易感基因。

HLA-E基因多态性及血浆可溶性HLA-E水平与乳腺癌遗传易患性的关系

目的探讨人类白细胞抗原E(HLA-E)基因多态性及血浆可溶性HLA-E(sHLA-E)水平与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易患性的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法对中国张家口地区200例乳腺癌患者和228例健康对照人群HLA-E等位基因进行检测;同时用ELISA检测乳腺癌患者和健康对照人群sHLA-E水平。结果乳腺癌患者和健康对照组均检出2种等位基因:HLA-E*0101和HLA-E*0103;3种基因型:HLA-E*0101/HLA-E*0101、HLA-E*0101/HLA-E*0103和HLA-E*0103/HLA-E*0103。其中HLA-E*0103等位基因和HLA-E*0103/HLA-E*0103基因型在乳腺癌患者组的分布频率明显高于健康对照组,且携带HLA-E*0103/HLA-E*0103基因型的个体乳腺癌发病风险明显增加;血浆sHLA-E水平在乳腺癌患者组和健康对照组分布无明显差异,进一步分析发现携带HLA-E*0103/HLA-E*0103基因型患者血浆sHLA-E水平明显高于健康对照组;且HLA-E基因多态性及血浆sHLA-E水平与乳腺癌临床分期无明显相关性。结论HLA-E基因多态性与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易患性相关;HLA-E*0103/HLA-E*0103基因型可能是中国张家口地区汉族女性乳腺癌的易感基因;而血浆sHLA-E水平可能与乳腺癌的遗传易患性无明显相关性。

中国河北地区汉族人群HLA-E基因多态性分析

目的通过调查中国河北地区汉族人群人类白细胞抗原-E(HLA-E)等位基因多态性分布情况,为探讨HLA-E基因多态性与疾病的关联奠定基础。方法 HLA-E等位基因多态性分析采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,调查285例中国河北地区汉族正常人群。结果 HLA-E的2个等位基因在这一人群中检测到,分别是HLA-E*0101和HLA-E*0103,分布频率分别是41.05%和58.95%。而HLA-E*0104等位基因未检测到。结论中国河北地区汉族人群中共有2个HLA-E等位基因分布,分别为HLA-E*0101和HLA-E*0103,其分布频率相近,分别是41.05%和58.95%。

框架式教学法在医学免疫学教学中的应用

目的研究框架式教学法应用于医学免疫学教学的效果。方法以河北北方学院2010级两个医学本科班学生为研究对象,将其分为实验班和对照班,教学之前,先对两个班学生进行免疫学基础知识问卷调查;教学时,实验班采用教师讲授并结合"框架式"教学法,对照班采用以教师为主体的传统教学模式。通过对比框架式教学法与传统教学模式对实验班和对照班两个班学生期中和期末考试成绩的影响,分析在课堂教学中实施框架式教学法的教学效果。结果教学前两个班的基础知识差异无统计学意义(P>0.05),教学后,两个班期中和期末考试成绩各组分数均呈正态分布,可信度较高。实验班成绩均高于对照班,经统计学处理,分数差异均有统计学意义(P<0.01)。结论框架式教学法应用于医学免疫学教学,能够增加学生的学习兴趣和主动性,提高学习效率和教学效果。

三氧化二砷影响人乳腺癌裸鼠移植瘤侵袭性和黏附性Syk机制

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,AS2O3)影响人乳腺癌裸鼠移植瘤侵袭性和黏附性Syk作用机制。方法成功建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为实验组(AS2O3)和对照组(生理盐水)。7d后观察肿瘤体积的变化,流式细胞术检测肿瘤组织细胞凋亡情况及两组荷瘤裸鼠肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达情况。结果实验组荷瘤裸鼠肿瘤体积明显低于对照组,差异有统计学意义;实验组荷瘤裸鼠肿瘤组织细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01);实验组ICAM-1表达明显高于对照组(P<0.05);实验组MMP-9表达低于对照组(P<0.05)。结论 AS2O3对人乳腺癌裸鼠移植瘤具有明显的抑瘤作用,可降低肿瘤组织侵袭性增加其黏附性,其作用机制可能与蛋白酪氨酸激酶Syk的表达有关。

小干扰RNA技术沉默HLA-E基因表达对人乳腺癌细胞增殖与凋亡及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默HLA-E基因表达对人乳腺癌细胞增殖与凋亡及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法设计并合成靶向HLA-E基因的特异性siRNA及阴性对照siRNA序列,分别转染至人乳腺癌细胞MDA-MB-231,即为HLA-E siRNA组和阴性对照组,同时设立空白对照组(不加任何试剂)。Real-time PCR法和Western blot检测各组细胞HLA-E基因及蛋白表达;CCK-8法和流式细胞术检测各组乳腺癌细胞增殖和凋亡情况。将对数生长期MDA-MB-231细胞接种于裸鼠皮下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为3组:空白对照组、阴性对照组和HLA-E siRNA组,观察各组小鼠移植瘤生长情况。结果靶向HLA-E siRNA转染乳腺癌细胞MDA-MB-231后,HLA-E基因及蛋白表达明显降低;细胞增殖显著被抑制及细胞凋亡率显著增加(P<0.01);裸鼠体内实验结果显示,至接种30 d时,HLA-E siRNA组小鼠瘤组织体积显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论siRNA技术沉默HLA-E基因表达能显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,促进乳腺癌细胞凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的生长,表明靶向沉默HLA-E基因表达可能为人乳腺癌基因治疗提供了新策略。

冠心病患者MBL基因启动子区多态性

目的研究冠心病患者甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区-550和-221位点的多态性,探讨冠心病的可能发病机制。方法提取72例冠心病患者(A组)和57例健康对照人群(C组)外周血基因DNA,采用限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测MBL基因启动子区-550(H/L)和-221(X/Y)位点的多态性,并行非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳对这2个位点的多态性进行分析。结果 A组MBL基因启动子区-550位点基因型H/L、H/H和L/L分别占2.78%、95.83%和1.39%;C组未检测出H/L和L/L基因型,H/H基因型频率为100%;A组和C组在-550位点H/L、H/H和L/L基因型频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MBL基因启动子区-221位点多态性可能与冠心病的发生、发展有关;而-550位点的多态性与冠心病的发生、发展可能不存在相关性。