Tat-LK15介导siRNA干扰大鼠脊髓背角nNOS表达对神经病理性疼痛的治疗作用

目的探讨细胞穿透肽Tat-LK15介导siRNA干扰大鼠脊髓背角神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达对神经病理性疼痛的治疗效应。方法采用Tat-LK15介导FAM-siRNA转染原代大鼠脊髓背角神经元细胞(RN-dsc),于倒置荧光显微镜观察其转染效果。健康雄性SD大鼠50只,随机分为5组(n=10):正常组、假手术组、神经病理性疼痛组(SNL组)、Tat-LK15-nNOS siRNA组(TS组)和Tat-LK15-NC siRNA组(TN组)。采用脊神经结扎法(SNL)制作神经病理性疼痛模型,正常组不予任何处理,假手术组仅暴露脊神经;SNL组、TS组、TN组构建SNL模型同时鞘内置管,于第7天开始每天分别鞘内注射10μl生理盐水、10μl含5μg siRNA的Tat-LK15-nNOS siRNA和Tat-LK15-NCsiRNA,持续7d。建模前1d及建模后3、7、10、14d测定各组大鼠机械缩足反应阈值(PWMT)及热缩足反应潜伏期(PWTL)。第14天测定结束后取L4-6节段脊髓,采用q-PCR及Western blotting检测脊髓背角nNOS表达水平。结果倒置荧光显微镜观察显示,Tat-LK15可成功介导siRNA转染原代大鼠脊髓背角神经元。与假手术组比较,SNL组建模后第3天起PWMT降低、PWTL缩短,脊髓背角nNOS mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),正常组上述指标与假手术组比较差异无统计学意义;与SNL组比较,TS组第10、14天时PWMT增高、PWTL延长,脊髓背角nNOS mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),TN组上述指标与SNL组比较差异无统计学意义。结论 Tat-LK15可成功介导nNOS siRNA转染脊髓背角神经元,沉默nNOS基因的过度表达,对SNL大鼠神经病理性疼痛具有一定的治疗作用。

Tat-LK15运载siRNA沉默RGC-5神经细胞nNOS基因的实验研究

目的探讨离体条件下细胞穿透肽Tat-LK15运载小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默RGC-5视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,n NOS)基因的可行性,为在体条件下研究Tat-LK15运载siRNA沉默n NOS表达治疗神经病理性疼痛提供理论依据。方法 1通过凝胶阻滞分析测定Tat-LK15与siRNA的最佳交联比。流式细胞术检测Tat-LK15/FAM-siRNA以最佳交联比转染RGC-5细胞的转染效率;不同剂量Tat-LK15(1、2.5、5、10和20μg)孵育RGC-5细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率。2制备n NOS高表达的RGC-5细胞模型。3将RGC-5细胞随机分为5组:对照组、模型组、Tat-S组(Tat-LK15运载n NOS/siRNA转染模型细胞)、Lipo-S组(LipofectamineTMRNAi MAX运载n NOS/siRNA转染模型细胞)及Tat-N组(Tat-LK15运载NCsiRNA转染模型细胞),通过Q-PCR及Western blot检测各组nN OS表达水平。结果 Tat-LK15与siRNA质量比为2∶1时可完全包裹siRNA,达到最佳交联,此时其转染效率为(84.4±3.9)%。当Tat-LK15剂量为20μg(6.1μmol·L-1)时才出现一定细胞毒性,细胞凋亡率高于对照组[(10.3±1.1)%vs(7.4±0.9)%,P<0.05]。造模后RGC-5细胞nN OS表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,Tat-S组nN OS mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Tat-S组与Lipo-S组相比无差异(P>0.05)。结论Tat-LK15能高效转染siRNA,细胞毒性低,离体条件下可有效运载siRNA沉默nN OS的基因表达。

右美托咪定在成人脑功能区癫疒间手术开颅清醒期的镇静效果观察

目的：观察唤醒麻醉下行脑功能区癫疒间病灶切除术的成年难治性癫疒间病人,在术中清醒期连续泵注右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）的镇静效果。方法拟在唤醒麻醉下行癫疒间病灶切除的成年病人48例,随机平均分为 LP、LD、MD、HD 组,术中清醒期分别泵注1.5μg/ml 丙泊酚、0.2μg/（kg·h）、0.4μg/（kg·h）和0.6μg/（kg·h）的 Dex 进行镇静。记录清醒时、开始镇静时（T0）、镇静后10 min （T1）、20 min （T2）、30 min （T3）、40 min （T4）、50 min （T5）、60 min （T6）各时间点的改良清醒镇静评分（OAA/S）、视觉模拟评分（VAS）、镇静深度指数（NI）、心率及不良事件。结果48例病人成功实施术中唤醒。镇静后Dex 各组心率明显低于 LP 组（P ＜0.05）。4组 NI 值均明显下降,镇静后各组均明显低于 T0（P ＜0.05）,T3后 HD 组显著低于其他各组（P ＜0.01）。OAA/S 在 LD、MD、LP 组随时间改变不明显,但 LP 组明显更低（P ＜0.05）。HD 组 OAA/S 始终低于 LD、MD 组,除 T1外各时间点均高于 LP 组（P ＜0.05）。LP、LD 组清醒期寒战发生率明显高于 MD、HD 组（P ＜0.05）。结论成年癫疒间病人在开颅手术清醒期使用 Dex 作为镇静药物,可提供满意的镇静效果,0.4~0.6μg/（kg·h）的剂量可明显降低寒战发生。

口腔正畸学融入思政元素的探索与实践

时代在进步,社会在发展,教育过程中占据的意识主体也在悄然地改变着,从而衍生出“课程思政”这样一种新的意识形势,即教师在开展教学时,要充分考虑思政元素与相关专业课程的融合,并逐步发展到伴随在教学过程中的各个领域都适当添加思政元素,以便学生在提升专业能力的同时,塑造正确的政治思想观念。为了贯彻落实党的十九大和全国高校思政工作会议精神,落实立德树人的根本任务,在日常开展口腔正畸教学过程中,加入相关的思政元素,实现了思想政治、医德医风、专业知识和临床实践技能的有机融合。此种方式对学生而言,是锻炼,也是锤炼,更能让其在未来的成长道路中,内外兼修,百炼成钢。

类透明质酸壳聚糖微乳和碳铂联合给药对大鼠胶质瘤的治疗效果评价

目的:制备类透明质酸壳聚糖微乳(hyaluronic acid chitosan-based microemulsion,HAC-ME)和碳铂药物组合,并评价药物对C6大鼠胶质瘤动物模型的治疗疗效。方法:常规培养C6大鼠胶质瘤细胞,制备大鼠脑胶质瘤模型动物30只;随机分为生理盐水组、碳铂组、HAC-ME和碳铂联合用药组,每组10只。分别用生理盐水、碳铂、HAC-ME和碳铂联合用药对大鼠C6胶质瘤模型治疗后,观察胶质瘤细胞的凋亡情况、大鼠的生存期。结果:生理盐水组胶质瘤细胞TUNEL染色阴性;碳铂组TUNEL染色可见胶质瘤组织中个别肿瘤细胞的细胞核染成棕褐色,说明个别胶质瘤细胞发生凋亡;HACME和碳铂联合用药组胶质瘤组织中肿瘤细胞的凋亡发生明显增多。HAC-ME和碳铂联合用药组生存期长于生理盐水组和碳铂组(P<0.05)。结论:HAC-ME和碳铂联合用药能抑制大鼠胶质瘤细胞的生长,为临床胶质瘤治疗提供实验依据。

细胞穿透肽Tat-LK15介导siRNA的转染效率和细胞毒性研究

通过与Lipofectamine TM RNAi MAX(Lipo)比较,探讨细胞穿透肽Tat-LK15对人肾上皮细胞(human embryonic kidney 293T cells,293T)和大鼠视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)转染小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)的效率和细胞毒性,为后期实验提供依据。以羧基荧光素(carboxyfluorescein,FAM)标记的si RNA为报告基因,不同剂量的Tat-LK15(Tat-LK15组)和Lipo(Lipo组)为转染试剂,分别转染293T和RGC-5细胞。转染24 h后荧光显微镜观察FAM荧光强度,计算转染效率,并以CCK-8法检测细胞毒性。随着Tat-LK15和Lipo剂量的增加,si RNA转染效率逐渐提高。当Tat-LK15与si RNA配比为2∶1(μg/μg)时,RGC-5细胞的转染效率达到最高((87.3±4.5)%),低于Lipo与si RNA配比为5∶1(μL/μg)时的最高转染效率((96.2±3.2)%(P<0.05));作用于293T细胞时,两转染试剂的最高转染效率没有统计学差异(P>0.05)。转染试剂剂量增加,Lipo细胞毒性显著增加,而Tat-LK15毒性无明显变化。转染效率最高时,Lipo(5μL)组293T和RGC-5的细胞存活率仅为((77.8±4.1)%,(73.4±7.7)%)显著低于Tat-LK15(2∶1)组同种细胞的存活率((91.0±3.7)%,(90.0±6.1)%)(P<0.05)。Tat-LK15可有效地转染si RNA,细胞毒性低,安全性突出,有一定的应用前景。

教学行为对大一新生的影响——从学生自主命题谈起

教师作为课堂教学活动的主体之一,其教学行为总会潜移默化地影响着学生,特别是对大一新生,因为它不仅关系着教学质量的高低,还关系到大一新生是否能够悦纳自己的大学,是否能够敬重自己的教师,进而关系到学生能否健康成长。在夯实基本教学方式的基础上,通过合理的教学行为,让大一新生参与自主命题,使其从大学最初的教学范式中感受到学校良好的教风和学风,从教师的教学行为中养成对学校和专业的热爱。教师承载的敬业精神和职业素养可通过适当的教学行为传递给大一新生,对其形成积极有益的影响。

115例乳腺癌的年龄构成分析

目的：了解乳腺癌患者的年龄构成。方法：通过对115例患者的病历信息进行分类。结果：〈60、〈50和〈70岁组占总数的35%、23%和20%；在相同年龄组内，生育一个孩子患病比例最高（68%）；65例绝经患者中，〈60岁和〈50岁组绝经比例分别为57%和25%；临床分期中Ⅱ期的比例为61.7%，且分布在〈60、〈50和〈70岁组中的比例较高；浸润性非特殊癌的比例（85%）明显最高于其他分型，〈60、〈70和〈50岁组占Ⅳ型的比例为35.7%、22.4%和20.4%。结论：中老年组（40～69岁）的乳腺癌患病比例明显高于青年组（〈40岁）和高龄组（≥70岁）；临床Ⅱ期和浸润性非特殊癌也集中于此阶段；该年龄段妇女要提高认识，定期检查，及时发现。

右美托咪啶对唤醒麻醉下脑功能区手术唤醒质量和术后痛觉过敏的影响

目的评价右美托咪啶(dexmedetomidine,DEX)对唤醒麻醉下脑功能区手术唤醒质量和术后痛觉过敏的影响。方法择期拟行脑功能区肿瘤切除术病人45例,随机分为3组:丙泊酚复合瑞芬太尼组(R组)、DEX复合丙泊酚与瑞芬太尼组(D组)、生理盐水复合丙泊酚与瑞芬太尼对照组(C组)。记录术前、术后24、48、72 h的机械痛阈值以及术后72 h内的不良反应,并进行统计学分析。结果D组在术后各时间点痛阈值均明显高于R组及C组(P<0.05);而R组与C组在术后各时间点痛阈值差异无统计学意义(P>0.05)。3组间疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)及头晕头痛发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DEX用于唤醒麻醉下脑功能区手术不影响唤醒质量,且可抑制病人术后机械痛阈值降低,预防发生痛觉过敏。

儿童龋病发病原因及其口腔综合保健预防措施

当前时代,人们明显感觉生活条件好了,物质丰富了,但是处于亚健康状态的人群却越来越多了起来,一些慢性疾病在中国人群体中相当普遍.比如,在成年人中比较高发的是高血压,糖尿病等,在儿童群体中比较高发的则是肥胖,近视以及龋齿等.今天,我们就来谈一谈儿童龋齿的主要发病原因,以及为预防其发病应当采取的预防和保健措施.

鞘内注射Fyn-PSD-95拮抗剂对脊神经结扎大鼠的作用

目的：观察鞘内注射Fyn—PSD-95拮抗剂Tat—FynP对L5脊神经结扎（SNL）大鼠痛觉过敏行为的影响，并探讨其作用机制。方法：60只SD大鼠随机分为5组（n=12）：空白组（N）、假手术组（S）、SNL组（C）、mTat—FynP给药组（M）、Tat—FvnP给药组（T）。N组不做任何处理，S组只暴露L5脊神经，C、M、T组大鼠行SNL术。C、M、T组于造模后第3～6天每天鞘内给予3％DMSO、mTat—FynP、Tat—FvnP。测定造模前后各组大鼠的机械刺激缩足反应阈值（MWT）及热刺激缩足潜伏期（TWL），Western blot检测脊髓腰膨大p-NR2B水平，免疫共沉淀检测Fyn与PSD-95的相互作用。结果：与C组比较，T组大鼠脊髓背角p-NR2B蛋白含量明显降低（P〈0．01），MWT及TWL明显增高（P〈0．01），Tat—FynP抑制Fyn与PSD-95的结合。结论：鞘内注射Tat—FynP可通过抑制Fyn与PSD-95的相互作用降低p-NR2B水平，从而缓解神经病理性痛大鼠的痛觉过敏。

芪红汤联合美托洛尔对冠心病心绞痛气虚血瘀型患者血浆ET、hs-CRP、NT-proBNP水平的影响

目的:探讨芪红汤联合美托洛尔对冠心病心绞痛气虚血瘀型患者血浆内皮素(ET)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、氨基末端B型脑利钠肽原(NT-proBNP)水平的影响。方法:选择我院2014年6月~2016年6月收治的98例冠心病心绞痛气虚血瘀型患者,按治疗方式分为对照组与研究组,每组49例。对照组选用美托络尔治疗,研究组在美托络尔基础上联合芪红汤治疗,两组均持续治疗1个月。观察和比较两组的临床疗效,治疗前后症状积分、血浆ET、hs-CRP、NT-proBNP、左室射血分数(LVEF)、6 min步行试验、心绞痛持续时间、发作频率及心脏不良事件的发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率显著高于对照组(P<0.05),两组症状积分、ET、hs-CRP、NT-proBNP、心绞痛持续时间、发作频率均较治疗前显著降低(P<0.05),且研究组以上指标均显著低于对照组(P<0.05);两组LVEF、6-WMT均较治疗前上升(P<0.05),且研究组以上指标均明显高于对照组(P<0.05)。研究组心脏不良事件发生率显著低于对照组(P<0.05)。结论:芪红汤联合美托络尔治疗冠心病心绞痛气虚血瘀型患者的临床效果肯定,能够有效降低患者血浆ET、hs-CRP、NT-proBNP水平。

腹腔注射WSLP/NR2B siRNA复合物对大鼠神经病理性痛的影响

目的 评价腹腔注射水溶性脂聚体（WSLP）/含2B亚基的N-甲基-D-天冬氨酸受体（NR2B） siRNA复合物对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康雄性SD大鼠84只,6周龄,体重180～ 200 g,采用随机数字表法分为7组（n=12）：空白对照组（C组）、假手术组（S组）、神经病理性痛组（NP组）、WSLP/NR2B siRNA组（siWSLP组）、WSLP/阴性对照siRNA组（ncWSLP组）、PE[/NR2B siRNA组（PEI组）和WSLP组.C组不给予任何处理,S组仅暴露L5脊神经但不结扎,NP组、siWSLP组、ncWSLP组、PEI组及WSLP组采用结扎L5脊神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型,于模型制备后第10天分别单次腹腔注射WSLP/NR2B siRNA、WSLP/阴性对照siRNA、PEI/NR2B siRNA及WSLP复合物2ml.于术前1d、术后7d及腹腔给药后3、7、14及21 d时随机取6只大鼠测定机械缩足反应阈（MWT）和热缩足反应潜伏期（TWL）;于腹腔注射后3d余6只大鼠处死后取脊髓,采用PCR法检测脊髓NR2B mRNA表达水平,采用Western blot法检测脊髓NR2B蛋白的表达水平.结果 与C组比较,其余组术后7d及腹腔给药后3、7和21 d时MWT降低,TWL缩短,腹腔给药后3d时脊髓NR2B mRNA及其蛋白的表达上调（P＜0.01）;与NP组比较,siWSLP组腹腔给药后3和7d时MWT升高,TWL延长,腹腔给药后3d时脊髓NR2B mRNA及其蛋白的表达下调（P＜0.01）,PEI组、ncWSLP组、WSLP组及S组各指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 腹腔注射WSLP/NR2B siRNA复合物可有效减轻大鼠神经病理性痛.