垂体瘤发病相关基因的大规模筛选及鉴定

目的：探讨垂体瘤与垂体组织差异表达基因的大规模筛选及鉴定。方法：垂体无功能腺瘤及正常垂体组织 cDNA文库构建，大规模表达序列标签 (expressed sequence tags， ESTs)测序、表达谱差异的生物信息学处理及半定量逆转录－聚合酶链反应 (reverse transcriptase polymerase chain reaction， RT-PCR)鉴定。结果：从无功能腺瘤和正常垂体组织中分别获得 1253和 7222个质量满意的 ESTs；垂体瘤中已知基因的品种数 200个，经组织表达谱差异比较的统计学软件处理，在这些已知基因中，差异的可靠性≥ 0.99者 38个，≥ 0.95者 130个；其中与细胞生长、分化相关的 G2类基因共 17个； 6个经半定量 RT-PCR证实 4个基因的表达在垂体瘤中明显高于正常垂体。结论：与细胞生长、分化相关的 G2类基因 MEIS2、 SMT3C、 C1D、 BUB3在垂体瘤中表达高于正常垂体，推测可能与垂体瘤的发生有关。

人端粒重复序列结合因子基因组和假基因研究

目的 :确定人端粒重复序列结合因子 (TERF1)的基因组结构和假基因的定位与结构。方法 :利用 Gen Bank等生物信息学资源 ,NCBI提供的 BLAST及其他相关的生物信息学工具 (Sequencher,DNA Strider和 Autoassembler等 ) ,确定 TERF1基因组和假基因的定位与结构 ,并用 PCR和测序证实。结果 :定位在 8q13上的 TERF1基因组由 10个外显子构成。它有 4个假基因分别分布在第 13、18、2 1和 X染色体上 (Ψ TERF1- 13、Ψ TERF1- 18、Ψ TERF 1- 2 1和Ψ TERF1- X) ,其结构均与 TERF1m RNA相似 ,但缺少部分外显子。Ψ TERF1- 13、Ψ TERF 1- 18和Ψ TERF1- 2 1的周边序列之间存在长度至少 6 0 kb的同源片段。结论 :TERF1基因组含 10个外显子 ,它有 4个加工过的假基因分布在第13、18、2 1和 X染色体上。大片段同源序列属近期重复片段中的染色体间倍增。

市政道路施工中平整度控制措施研究

在道路工程建设中其影响整个工程的主要因素就是道路平整度,通常来讲,道路中平整度主要是道路路面中的凹凸程度。通常在市政施工过程中,道路的平整度也是道路质量检测部门重点考核的项目,这是因为道路平整度也是体现出整个道路质量的基本保证。本文对市政道路施工中平整度控制措施进行分析讨论,保证了道路质量,可供参考。

钢板桩在排水管道深沟槽支护中的应用

随着社会的不断发展,交通建设也在快速地发展,在排水工程内越来越多地使用大管径、深沟槽技术,并且深沟槽支护技术已经是建筑行业中不可或缺的技术之一,也是施工的关键问题。因此,本文对钢板桩在排水管道深沟槽支护工作进行分析和研究,保证了施工的顺利进行,可供参考。

市政道路施工中土基工程质量问题探究

在市政道路工程施工中,土基工程属于核心工程项目,土基工程施工质量会直接影响整个道路工程建设质量,因此,必须加强土基工程质量管理。本文首先对市政道路土基工程概况进行了介绍,然后对市政道路土基工程质量管理的要求进行了分析,并对市政道路土基工程常见质量问题以及质量控制对策进行详细探究,可供参考。

单核苷酸多态性研究及应用

人类基因组计划诣在解读人类分布于24条染色体上的30亿对碱基,它们涵盖了人的所有生存信息。面对如此庞大的信息量,人类基因组测序的策略是以作图为基础,将染色体分为较易分析操作的结构区域。人类基因组作图的分子标记从第1代的限制性酶切片段长度多态性(restrictionfrag...

胃癌相关抗原MG7-Ag模拟肽表位的筛选及测序分析

目的 从噬菌体呈现的随机肽库中筛选胃癌单克隆抗体MG7所识别的胃癌相关抗原的短肽模拟表位 ,为进一步研究胃癌相关抗原与单抗结合的结构基序奠定基础。方法 用胃癌单克隆抗体MG7对呈现于噬菌体衣壳蛋白pⅧ上的 2个九肽库分别进行亲和富集和免疫筛选 ;阳性克隆进一步用荧光标记和硝酸纤维素膜斑点印迹法证实其结合活性 ;经随机抽取部分阳性克隆进行DNA序列分析 ,推导出相应噬菌体呈现肽的氨基酸序列 ,通过序列比较分析相对保守的表位信息 ;运用HLA分子结合分析软件预测已测序短肽与HLA分子结合的可能性。结果 经反复多轮筛选和结合活性检测 ,从pⅧ和pⅧ cys 2个噬菌体肽库中分别得到了 12和 30个阳性克隆 ;通过对部分阳性克隆进行测序分析 ,推导相应的随机肽序列和序列比较分析 ,得到具有相对保守性的表位信息如PLX0 2 S、SAVR、XRMX、YARN等。经计算机预测分析 ,发现它们可与HLA多个分子结合。结论 PLX0 2 S、SAVR、XRMX、YARN等有可能为胃癌单克隆抗体MG7所识别的表位基序。

正常人垂体组织基因表达谱的研究

目的 建立正常人垂体组织基因表达谱。方法 垂体cDNA文库构建、大规模表达序列标记 (EST)测序及生物信息学处理。结果 在所测的 72 2 2条可分析的EST中 ,2 949条 (4 1% )为已知基因 ,其中参与基因 /蛋白表达者最高 (2 3.2 % ) ,13 .7%的基因与内分泌相关 ,18.1%的基因参与信号转导。前 2位高表达的基因是促生长素和催乳素。垂体表达甘丙肽、可卡因和安非他明调节的转录肽 (CART)及黑色素浓集激素 (MCH)等与食欲调节有关的激素。还表达与免疫有关的细胞因子和受体。Pit 1、锌指蛋白 (ZNF) 74和PLAG1在垂体中是相对特异表达的。结论 正常垂体组织中参与信号转导的基因明显高于心脏和CD34 +造血前体细胞 ,而与脑、下丘脑、肾上腺组织相近。甘丙肽和CART可能是参与食欲调节的垂体激素。垂体和免疫系统之间存在广泛的相互作用。Pit 1、ZNF74和PLAG1可能是垂体特异表达的转录因子。

正常垂体及垂体瘤组织中新的全长cDNA的克隆

目的 从正常垂体及垂体瘤组织中克隆新的全长cDNA。方法 垂体cDNA文库构建 ,大规模表达序列标签 (ESTs)产生及生物信息学处理 ,芯片拼接及cDNA末端快速扩增 (RACE)。结果 从正常垂体及垂体瘤组织分别克隆 41条和 2 6条新的全长cDNA ,共 6 7条。在这些基因中 ,与内分泌功能相关者 16条 ;至少有 2个是具有典型信号肽结构的分泌蛋白 ;3个是具有典型穿膜结构的膜蛋白。在 5个参与激素信号转导的新基因中 ,至少有 2个可能参与酪氨酸激酶型受体的信号转导过程。结论 通过ESTs手段 ,短期内克隆到 6 7条新的全长cDNA。在这些新基因中 ,有些可能在垂体的生理及病理过程中起重要作用。

用随机肽库筛选胃癌相关抗原MGb2-Ag模拟肽表位

的 运用肽库筛选技术寻找胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２ 所识别的胃癌相关抗原的短肽模拟表位。方法 以胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２ 作为筛选配基，对呈现于噬菌体衣壳蛋白ｐⅧ上的两个九肽库进行了亲和富集和免疫筛选；阳性克隆用荧光标记和硝酸纤维素膜斑点印迹证实结合活性；随机抽取部分阳性克隆进行了ＤＮＡ 测序分析。结果 经ＤＮＡ 测序分析推导出相应的氨基酸序列并加以比较分析，得到具有保守性的表位信息。结论 具有相对保守性的ＶＣＸＸＤＧＶ 可能为胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２所识别的表位基序。

新基因HSPCSET的蛋白结构分析和功能初探

目的研究人脐血CD34＋造血干／祖细胞来源的新基因HSPCSET的结构和生物学功能。方法采用生物信息学技术对HSPCSET蛋白进行结构分析和同源性比较。酵母双杂交实验筛选与HSPCSET蛋白相互作用的蛋白分子，测序后筛选出功能较明确的阳性克隆进一步回复性杂交，采用G—gal实验和GST拉下试验验证。免疫荧光共定位方法分析HSPCSET和相关基因细胞内定位情况。结果蛋白结构分析和同源性比对揭示HSPCSET是古老的SET基因家族的成员，可能具有非常保守而重要的生物学功能。应用酵母双杂交技术筛选能与之相互作用的蛋白，获得13个阳性克隆，分别涉及信号传导、转录调控、细胞凋亡、肿瘤发生、发育等途径，与细胞增殖、分化、凋亡及肿瘤发生密切相关。采用GST拉下试验进一步在体外水平验证了其中4个基因：GADD34（凋亡相关分子）、SIVA（凋亡相关分子）、DNAJ（分子伴侣）和PHF1（转录相关因子）与HSPCSET蛋白确实存在相互作用。免疫荧光共定位方法显示HSPCSET和GADD34共转染细胞株后共同定位于细胞核内，两者之间存在强烈的相互作用。结论新基因HSPCSET可能参与凋亡途径、具有非常保守而重要的生物学功能。本研究结果为进一步研究HSPCSET在造血调控中的作用及研究肿瘤发生奠定基础。

大规模测序研究CD_(34)^+造血干/祖细胞基因表达谱

目的 建立大规模测序方法 ,并用于造血干 祖细胞 (HSPC)基因表达谱的初步识别。方法 从脐血中分离CD34+ 细胞 ,构建cDNA文库 ,对其进行大规模表达序列标签 (EST)测序 ,用生物信息学的方法进行结果分析。结果 在获得的 986 6条EST中 ,有意义序列归并为 2 0 6 0个连续克隆 ,其中10 5 4个为已知基因 ,10 0 6个为至今尚未被公共数据库公布的新基因片段。 10 5 4个已知基因根据功能分为八个大类 :①造血相关的 73个 ;②染色体结构及细胞分裂相关的 91个 ;③细胞信号传导相关的111个 ;④细胞结构 运动相关的 48个 ;⑤细胞和机体防御相关的 41个 ;⑥基因表达 (转录、翻译及加工 )相关的 2 6 5个 ;⑦代谢相关的 192个 ;⑧未分类的 2 33个。结论 获得了HSPC表达的 10 5 4个已知基因和 10 0 6个新基因片段构成的初步基因表达谱 。