UHPLC-MS/MS法同时测定肠激安方冻干粉中10种成分

目的建立UHPLC-MS/MS法同时测定肠激安方(白芍、白术、黄芪等)冻干粉中芍药苷、毛蕊异黄酮-7-Oβ-D-葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素的含量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Phenomenex-C18色谱柱(50 mm×2 mm,5μm);流动相乙腈-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.7 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源(ESI);全扫描、选择离子监测(SRM)模式。结果10种成分在各自范围内线性关系良好(R2≥0.9988),平均加样回收率85.92%~101.12%,RSD 1.15%~4.13%。结论该方法简便、灵敏、稳定,可用于肠激安方的质量控制。

健脾祛湿膏对脾虚腹泻大鼠结肠P38 MAPK信号通路相关蛋白及细胞因子的影响

目的:探究健脾祛湿膏对脾虚腹泻大鼠P38 MAPK通路的作用。方法:采用冰番泻叶水煎液结合过度游泳复制脾虚腹泻大鼠模型,造模后给药干预14 d,ELSIA法检测血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ及结肠MDA、SOD水平,Western blot检测结肠P38 MAPK、MSK1、CREB蛋白表达;HE染色观察十二指肠病理形态。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ及结肠MDA水平和P38 MAPK、MSK1、CREB蛋白表达显著升高。与模型组比较,健脾祛湿膏组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ及结肠MDA水平和P38 MAPK、MSK1、CREB蛋白表达显著降低。结论:健脾祛湿膏对脾虚腹泻大鼠结肠P38 MAPK信号通路有一定抑制作用,可下调相关蛋白和细胞因子的表达。

健脾通腑颗粒提取工艺优选

目的:优选出健脾通腑颗粒的最佳提取工艺。方法:采用药效筛选的方法,以小鼠小肠炭末推进率为指标,初步筛选制备工艺;采用单因素考察,以挥发油提取量为指标,以加水倍量、浸泡时间、提取次数为因素筛选提油工艺;采用单因素考察和正交试验法,以芍药苷提取率和固形物得率为指标,以提取次数、提取时间、加水倍量为考察因素优化提取工艺并进行验证试验。结果:最佳提取工艺为:枳壳、陈皮、柴胡和白术加10倍量水蒸馏提取挥发油6 h,药液备用;药渣与其余药材一起,提取3次,第一次加8倍量水,第二、三次分别加6倍量水,每次提取2 h,滤过,合并滤液,加入提油后的药液。结论:该提取工艺相对较优,可作为健脾通腑颗粒的提取方法。

健脾祛湿膏对大鼠胃肠功能的调节作用

目的探究健脾祛湿膏对大鼠胃肠功能的调节作用。方法采用冰番泻叶水煎液灌胃结合过度游泳复制脾虚腹泻大鼠模型,给药干预14 d后,检测各组大鼠胃内残留率和小肠推进率,采用酶联免疫吸附法(ELSIA)检测各组大鼠血清中生长抑制素(SS)、血浆中胃动素(MTL)、血管活性肠肽(VIP)水平,结肠水通道蛋白(AQP3)和肾脏水通道蛋白(AQP2)水平,采用蛋白印迹法(Western blot)检测各组大鼠结肠组织Occludin和Claudin-1蛋白水平。结果与模型组相比,健脾祛湿膏组大鼠小肠推进率、MTL和结肠AQP3水平上升,结肠Occludin和Claudin-1蛋白水平增加,胃内残留率、VIP、SS和肾脏AQP2水平降低。结论健脾祛湿膏可能通过上调MTL和结肠AQP3水平、结肠Occludin和Claudin-1蛋白表达,下调VIP、SS和肾脏AQP2水平,改善脾虚腹泻大鼠胃肠功能,从而达到治疗效果。

肠激安方对IBS-D模型大鼠脾虚泄泻及miRNA-29a表达的影响

目的基于miRNA-29a探讨肠激安方对腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠的干预作用。方法采用三因素(母婴分离、醋酸刺激、束缚应激)法复制IBS-D大鼠模型,分组后给予肠激安方干预,给药结束后定时考察大鼠的体重、糖水偏好值、自主活动行为特征,并通过腹部回缩反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)直肠扩张实验评估IBS-D大鼠的内脏敏感性。酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定大鼠血浆中二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)和D-乳酸(D-lactate,D-LA)的含量;RT-qPCR法检测结肠中miRNA-29a的含量。结果AWR评分、结肠组织HE染色结果表明三因素法复制大鼠IBS-D模型成功。与空白组比较,IBS-D模型组大鼠的体重明显降低,糖水偏好值显著降低,内脏敏感性评分明显升高;与模型组比较,匹维溴铵组、肠激安方高剂量组、肠激安方低剂量组的大鼠体重升高,糖水偏好值升高,AWR内脏敏感性评分降低。HE染色结果显示,各组大鼠结肠黏膜上皮细胞组织形态学无明显的病理变化。ELISA结果显示,与空白组比较,模型组血浆中D-LA和DAO的含量升高;与模型组比较,匹维溴铵组、肠激安方高剂量组血浆中D-LA明显降低,匹维溴铵组、肠激安方高剂量组、肠激安方低剂量组血浆中DAO含量明显降低;与空白组比较,模型组结肠中miRNA-29a的含量增加;与模型组比较,匹维溴铵组、肠激安高剂量组、肠激安低剂量组大鼠的结肠组织中miRNA-29a的含量降低。结论肠激安方对改善IBS-D脾虚泄泻具有一定的作用,肠激安方能够降低IBS-D大鼠结肠组织中miRNA-29a的含量,提示肠激安方干预IBS-D的作用机制可能与其对miRNA-29a的调控有关。

肠激安方对IBS-D大鼠肠道通透性的影响

目的:观察肠激安方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠道通透性的影响,探讨肠激安方治疗IBS-D的作用机制。方法:SD雄性乳鼠,随机分为5组,分别为正常组,模型组,匹维溴铵组(0.018 g·kg^(-1)),肠激安高、低剂量组(33.48,16.74 g·kg^(-1)),除正常组外,均采用"母婴分离+醋酸刺激+束缚应激"三因素结合的方法建立IBS-D模型。给药后,采用透射电镜观察大鼠肠黏膜超微结构;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血浆D-乳酸水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin),闭合蛋白-1(Claudin-1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Occludin,Claudin-1,紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA表达。结果:与正常组比较,IBS-D模型组大鼠肠黏膜上皮细胞损伤,微绒毛排列较稀疏,紧密连接间隙增宽,有的不甚明显;血浆D-乳酸水平明显升高(P<0.05),结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05),ZO-1 mRNA表达降低(P<0.05)。药物治疗后,与模型组比较,各给药组大鼠肠黏膜细胞损伤修复;匹维溴铵组、肠激安方高剂量组血浆D-乳酸水平明显降低(P<0.05),肠激安方低剂量组血浆D-乳酸水平有降低趋势,但不具有统计学差异。各给药组大鼠结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平,ZO-1 mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论:肠激安方对IBS-D的治疗作用可能是改善肠道通透性实现的。

马来酸曲美布汀联合谷维素治疗肠易激综合征meta分析

目的系统评价马来酸曲美布汀联合谷维素治疗肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)的有效性和安全性。方法通过Cochrane Library、Springer Link、中国期刊全文数据库、PubMed、Embase、中国生物医学文献数据库、万方数据库、中国科技期刊全文数据库检索马来酸曲美布汀联合谷维素治疗IBS的随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs)。由2名评价者独立进行资料提取并根据Cochrane协作网偏倚风险评价标准进行文献质量评价,通过RevMan 5.3软件进行meta分析。结果共纳入15个RCTs,1338例患者。Meta结果显示,与对照组相比,马来酸曲美布汀联合谷维素治疗IBS有更好的临床疗效[RR=1.26,95%CI(1.20,1.33),P<0.00001],可改善临床症状,腹痛[SMD=-0.94,95%CI(-1.22,-0.66),P<0.00001]、腹泻[SMD=-1.33,95%CI(-1.68,-0.98),P<0.00001]、日均排便次数[SMD=-1.41,95%CI(-1.79,-1.03),P<0.00001]、大便性状异常比例[SMD=-2.82,95%CI(-3.42,-2.22),P<0.00001],可降低不良反应[RR=0.40,95%CI(0.27,0.60),P<0.0001]。结论与马来酸曲美布汀相比,马来酸曲美布汀联合谷维素治疗IBS临床疗效更优,不良反应更低。

UHPLC-MS/MS同时检测IBS-D模型大鼠血浆中痛泻要方6种成分的含量及其药动学

目的:建立超高效液相色谱-质谱法(UHPLC-MS/MS)同时测定腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠血浆中6种成分(芍药苷、橙皮苷、新橙皮苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素)的分析方法,并研究这6种成分的药动学特征。方法:采用Phenomenex-C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.7 mL·min^-1,ESI离子源,柱温35℃,SRM检测模式。结果:各成分的线性关系良好(r>0.9974);精密度RSD<13.89%;血浆中无内源性基质干扰,稳定性良好。6种成分的达峰时间(tmax)分别为(0.5±0),(0.36±0.06),(0.33±0),(0.44±0.08),(0.31±0.13),(0.67±0.26)h,半衰期(t1/2)分别为(6.63±1.60),(4.31±1.14),(5.43±0.88),(5.98±1.91),(7.80±4.39),(4.33±0.40)h,药峰浓度(Cmax)分别为(145.42±9.81),(166.11±4.83),(167.69±2.98),(46.29±3.88),(18.98±1.85),(374.71±7.54)ng·mL^-1。结论:该方法简便、灵敏、准确,分析速度快,可用于痛泻要方的药代动力学研究。