miR-155靶向SMAD2在小鼠狼疮肾炎足细胞损伤和炎性反应中的影响

目的:探讨miR-155调控SMAD2表达对小鼠狼疮性肾炎足细胞损伤以及炎性反应中的影响。方法:实验小鼠随机分为空白组、模型组、 AAV9-miR-155组、AAV9-miR-NC组、AAV9-miR-anti组和AAV9-miR-anti-NC组,每组8只,其中空白组为C57BL/6小鼠,其余组均为MRL/lpr小鼠,并在此基础上对各组进行相应处理和取样。通过在线靶基因预测网站Target genes对miR-155与SMAD2是否存在结合位点进行预测。双荧光素酶报告基因分析系统预测验证miR-155与SMAD2的靶向关系。考马斯亮蓝法检测各组小鼠24 h尿蛋白含量。苏木精-伊红染色法染色观察小鼠肾脏组织。qRT-PCR检测各组肾组织中miR-155水平上的表达。Western blot检测肾组织中nephrin、P-cadherin和SMAD2蛋白表达。免疫荧光实验检测小鼠炎性因子(IL-6、TNF-α)的荧光强度。结果:与空白组相比,模型组小鼠尿蛋白升高,肾脏病理损伤严重,肾组织的miR-155上调,并且nephrin、P-cadherin和SMAD2蛋白表达水平下降(P<0.05),而IL-6、TNF-α荧光强度增强。与模型组、AAV9-miR-NC组相比,AAV9-miR-155组小鼠模型组小鼠尿蛋白升高,肾脏病理损伤明显,肾组织miR-155升高明显,nephrin、P-cadherin和SMAD2表达水平下降(P<0.05),而IL-6、TNF-α荧光强度增强明显;与模型组、AAV9-miR-anti-NC组相比,AAV9-miR-anti组与模型组相比小鼠尿蛋白下降,肾脏病理损伤改善,miR-155表达降低,nephrin、P-cadherin和SMAD2表达水平升高(P<0.05),而IL-6、TNF-α荧光强度下降;模型组、AAV9-miR-NC组、 AAV9-miR-anti-NC组小鼠则上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-155可抑制野生型SMAD2细胞的荧光活性,靶向调控SMAD2的表达。结论:高表达miR-155可通过调控SMAD2加重小鼠足细胞损伤和狼疮肾炎的炎性反应,而抑制miR-155表达可减轻小鼠足细胞损伤和炎性反应。

鉴定铁死亡相关基因作为狼疮性肾炎诊断生物标志物的研究

目的以铁死亡相关基因(ferroptosis-related genes,FRGs)为目的基因筛选狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)的生物标志物。方法分别从基因表达数据库和FerrDB数据库下载LN相关数据和FRGs。接着使用差异表达分析、加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)、LASSO(least absolute shrinkage and selection operator)回归和支持向量机递归特征消除筛选关键基因,并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估关键基因的诊断能力,并验证诊断基因的表达量。结果本研究鉴定出2个关键基因(PTEN和NR4A1),关键基因的ROC曲线下面积均大于0.79,且PTEN在LN样本中高表达,NR4A1在LN样本中低表达。结论PTEN和NR4A1的发现为LN铁死亡相关研究提供了新的视角。

miR-155在狼疮性肾炎细胞焦亡中作用机制的研究进展

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮引起的继发性肾炎,其致病机制复杂,且缺乏特异性治疗。细胞焦亡是一种伴随炎性反应的程序性细胞死亡,其在LN中的作用愈发受到广泛关注,miR-155作为一种高度保守的非编码小RNA,近年来被发现通过参与多种信号通路从而影响细胞焦亡及LN的发生、发展。本文通过归纳概括细胞焦亡参与LN的致病过程、miR-155对细胞焦亡通路的调控及对LN的影响等方面,总结了miR-155通过调节细胞焦亡从而影响LN的作用机制,旨在为LN的靶向治疗提供新的视角。

基于网络药理学和分子对接探讨鸡血藤治疗糖尿病肾病的作用机制研究

目的运用网络药理学和分子对接探讨鸡血藤治疗糖尿病肾病(DKD)的潜在作用机制。方法通过检索多个数据库筛选出鸡血藤活性成分和核心靶点,借助Drugbank、TTD、OMIM、Genecard、PharmGkb数据库收集DKD作用靶点,运用Venny 2.1.0获取鸡血藤与DKD的交集靶点基因。使用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,并使用Cytoscape软件和CytoNCA插件进行分析筛选出核心靶点。然后进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。最后,使用AutoDock Tools软件通过分子对接技术验证活性化合物与核心靶点的结合能力。结果挖掘出24种鸡血藤的关键活性成分,DKD靶点12818个,有48个二者的交集靶点基因。筛选出鸡血藤活性成分3种(芦荟大黄素、木犀草素、甘草查尔酮a),核心靶点基因4种[热休克蛋白90 Alpha家族A级成员1(HSP90AA1)、MYC原癌基因(MYC)、肿瘤蛋白p53(TP53)、信号传感器和转录激活剂3(STAT3)]。GO功能共富集498个条目,KEGG通路共富集61个条目。分子对接技术验证了3种活性化合物与其作用的关键靶点具有可靠的亲和力。结论推测鸡血藤治疗DKD具有多成分-多靶点-多途径的特点,为进一步研究鸡血藤治疗DKD的分子机制提供了新的思路。

miR-155在高糖诱导足细胞损伤的表达及其与足细胞损伤相关蛋白表达的相关性

目的探讨高糖(HG)诱导足细胞损伤中miR-155的表达变化及miR-155与足细胞损伤相关蛋白表达的关系。方法体外培养人肾小球足细胞(AB8/13),用30 mmol/L的D-葡萄糖溶液刺激AB8/1348 h作为HG组,同时以终浓度为5 mmol/L的D-葡萄糖溶液处理细胞48 h作为正常对照(NC)组。用CCK8法检测细胞增殖活性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nephrin、F-actin、synaptopodin、p-cadherin的mRNA和miR-155的表达。Western blot法检测nephrin、F-actin、synaptopodin、p-cadherin蛋白的表达。鬼笔环肽染色观察细胞骨架变化。细胞免疫荧光检测蛋白nephrin、synaptopodin。结果HG可抑制足细胞增殖,降低细胞存活率(P<0.01)。HG作用的Ab8/13中的miR-155表达水平升高,nephrin、F-actin、synaptopodin、p-cadherin的mRNA与蛋白表达水平降低(P<0.05)。HG会导致足细胞骨架紊乱。结论HG作用的人足细胞中miR-155表达升高,miR-155表达与HG诱导的足细胞损伤有关,可作为足细胞损伤诊断和治疗的靶点。

建立重症狼疮性肾炎模型并探索其与足细胞蛋白nephrin、P-cadherin的相关性

目的建立重症MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)动物模型,并对模型成功与否进行验证,进一步探索狼疮性肾炎与足细胞蛋白nephrin、P-cadherin的相关性。方法将实验动物分为三组:空白组、模型组和脂多糖组。空白组为雌性C57小鼠8只,模型组及脂多糖组为雌性MRL/lpr小鼠各8只,其中脂多糖组腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),空白组及模型组每周注射等量生理盐水。20周后检测小鼠尿蛋白,处死动物,收集各组小鼠肾组织。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察小鼠肾脏组织。RT-qPCR和Western blot检测肾组织中nephrin、P-cadherin的mRNA及蛋白表达。结果与空白组相比,模型组小鼠尿蛋白升高,肾脏病理损伤严重;与模型组相比,LPS组小鼠尿蛋白升高,肾脏损伤进一步加重;此外肾组织中nephrin、P-cadherin表达水平在三组间逐步下降(P<0.01)。结论用LPS腹腔注射的MRL/lpr小鼠可诱导加重狼疮,且狼疮性肾炎的严重程度与nephrin及P-cadherin相关。

慢病毒载体介导过表达和敲低miR-155的AB 8/13细胞株的建立

目的 利用慢病毒载体构建稳定过表达miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155)和稳定敲低miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton),为研究miR-155在足细胞焦亡和肾脏疾病中的作用奠定基础。方法 体外培养AB 8/13细胞,使用不同浓度嘌呤霉素刺激AB 8/13细胞48 h,在光学显微镜下观察AB 8/13细胞的死亡情况;使用LV-has-miR-155阴性对照病毒、LV-has-miR-155-5p inhibiton阴性对照病毒分别感染AB 8/13细胞,在荧光显微镜下观察AB 8/13细胞的状态和感染效率;在嘌呤霉素筛选出稳定细胞株后,通过实时荧光定量PCR法检测稳定细胞株的miR-155表达量。结果 在3.5μg/mL及以上浓度的嘌呤霉素作用于AB 8/13细胞48 h后,所有细胞全部死亡。LV-has-miR-155慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80%的最佳条件为在含HiTransG P的完全培养基中进行感染,MOI为10;LV-has-miR-155-5p inhibiton慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80%的最佳条件为在含HiTransG A的完全培养基中进行感染,MOI为100。qRT-PCR结果显示AB 8/13-LV-has-miR-155细胞株的miR-155表达量明显升高,AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton细胞株的miR-155表达量降低。结论 成功构建AB 8/13-LV-has-miR-155稳定细胞株和AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton稳定细胞株,为进一步探究miR-155在人足细胞焦亡中的作用机制奠定基础。

巨噬细胞极化在肾脏纤维化中的研究进展

肾脏纤维化是一种复杂的病理变化,表现为肾间质纤维化、肾小球硬化,可有蛋白尿、血清肌酐升高、血尿素氮升高等肾功能损害表现。肾脏纤维化的发病机制复杂,至今尚未完全明确。近年来新的试验研究表明,巨噬细胞在肾脏纤维化的发病过程中发挥着重要的生物学作用,M1型巨噬细胞的促炎作用可驱动肾脏纤维化的发生和促进其发展。也有研究发现M2型巨噬细胞的抗炎作用在抗肾脏纤维化中起着举足轻重的作用。本文也将分别从巨噬细胞的起源、极化及其在肾脏纤维化中的作用做相关领域的理论综述,以阐明巨噬细胞极化在肾脏纤维化整个发生发展中的作用,探索新的抗肾脏纤维化药物治疗的靶点,提供新的研究思路。