铁死亡抑制剂通过保护膜铁转运蛋白减轻脓毒症相关急性肾损伤

目的利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建脓毒症体内外模型,探讨铁死亡抑制剂在脓毒症相关急性肾损伤(sepsis associated acute kidney injury,S-AKI)中的保护作用及可能机制。方法构建脓毒症小鼠模型,随机分为4组:对照组、LPS组、LPS+铁死亡抑制剂1(Ferrostatin-1,Fer-1)组和LPS+铁死亡抑制剂2(Deferoxamine,DFO)组,每组3只小鼠。LPS组小鼠腹腔注射LPS(15 mg/kg),铁死亡抑制剂组分别在LPS注射前30 min腹腔注射Fer-1(5 mg/kg)和DFO(100 mg/kg)。24 h后留取小鼠血液和肾脏标本进行肾功能和铁死亡相关标志物检测。体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),检测100μg/mL LPS刺激后细胞活性和不稳定铁池、脂质过氧化变化情况。使用siRNA转染HK-2细胞敲低膜铁转运蛋白(ferroportin,FPN)后检测铁死亡标志物变化情况。结果与对照组相比,LPS组小鼠血肌酐、尿素氮明显升高,肾脏病理损伤加重,铁死亡标志物显著增加,而铁死亡抑制剂组可明显缓解LPS诱导的肾脏功能和病理损伤,减少铁死亡表征。同时,Western印迹法和免疫组化结果显示,LPS组体内外模型中FPN表达量均显著下调,使用siRNA沉默HK-2细胞FPN观察到铁死亡表征增加,说明FPN参与铁死亡损伤过程。qRT-PCR结果显示,FPN下调与肾脏铁调素水平升高相关。进一步检测发现LPS激活铁调素启动子IL-6/STAT3通路,而Fer-1与DFO可以抑制相关通路的激活,减少铁调素mRNA表达,避免FPN下调。结论LPS可诱导FPN下调介导的铁死亡损伤,铁死亡抑制剂可能通过抑制铁调素降解FPN在LPS诱导的S-AKI中发挥保护作用。

Notch信号通路对CD4^+T细胞分化及功能调控的研究进展

Notch信号通路在进化上高度保守,广泛存在于机体的多种细胞中,通过与邻近细胞间的相互作用,在生理和病理状态下实现对细胞发展的各个阶段,包括:细胞增殖、分化、激活、凋亡的调控。在免疫系统中,Notch信号可通过对CD4^+T细胞分化和功能的调节而实现对机体免疫功能的调控,在维持机体的免疫平衡及多种疾病的发展进程中均发挥重要的作用。本文就近年来Notch信号通路对CD4^+T细胞分化及功能调控的研究进展作一简要的综述。

顺铂诱导的急性肾损伤中肾脏组织m^(6)A甲基化水平的变化

目的·探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在顺铂诱导的小鼠急性肾损伤进程中的作用。方法·选择4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射顺铂(20 mg/kg)诱导急性肾损伤(损伤组);另取4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射等量生理盐水(对照组)。检测2组小鼠血清肌酐及血尿素氮水平变化,观察小鼠肾脏组织切片中病理损伤情况,评估模型是否成功。进一步运用甲基化RNA免疫共沉淀技术(methylatedRNAimmunoprecipitation,MeRIP)与RNA测序技术分别检测2组小鼠肾脏组织中m^(6)A甲基化水平与RNA表达变化。运用基因本体论及京都基因和基因组数据库进行结果可视化和综合研究,并将RNA测序技术所得转录组数据与MeRIP技术检测所得表观遗传数据联合分析,寻找参与顺铂诱导急性肾损伤病理变化过程的候选基因。结果·顺铂可诱导小鼠血清肌酐与血尿素氮水平显著升高。光学显微镜观察肾组织发现广泛的肾小管空泡变性,上皮细胞剥脱,肾小管坏死,提示造模成功。MeRIP检测发现损伤组与对照组小鼠肾脏中共有2227个基因含有2981个差异化表达的m^(6)A甲基化位点(表达变化倍数≥2且P<0.05),这些基因主要富集于代谢及细胞死亡通路。表达差异化m6A甲基化位点的基因与RNA差异化表达基因的联合分析发现1002个表达趋势相同的基因,如纤维蛋白原α链、溶质载体12家族成员1和甲肝病毒细胞受体1等。结论·顺铂可诱导肾脏组织中基因mRNA上m^(6)A甲基化位点的甲基化水平变化,促进急性肾损伤进程。

赶黄草配伍葛花对乙醇诱导下L-02肝细胞的影响

目的:探究赶黄草配伍葛花制备的含药血清对乙醇诱导的L-02肝细胞的影响及其可能机制。方法:分别制备不同配比含药血清后,将L-02肝细胞分为6组进行实验:空白对照组,模型组,赶黄草配伍葛花1∶1组、2∶1组和1∶2组,凯希莱组。MTT法检测含药血清对乙醇诱导的L-02细胞存活率的影响;酶标法检测培养液中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)及受损细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;realtime PCR法和Western blot检测赶黄草配伍葛花对L-02肝细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,模型组ALT、AST及MDA水平明显升高,SOD活性明显降低(P<0.01);与模型组相比,各药物组ALT、AST及MDA水平明显降低,SOD活性明显升高(P<0.01)。机理研究中,与空白对照组相比,模型组TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达显著升高,Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,各配伍组TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达显著降低,Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:赶黄草配伍葛花含药血清可能通过下调TNF-α和IL-6的表达,上调Nrf2和HO-1的表达,从而降低L-02肝细胞的炎症反应并减轻氧化应激,进而发挥治疗酒精性肝损伤的作用。

老年男性Gilbert综合征合并巨幼细胞性贫血1例

Gilbert综合征（GS）又称先天性非溶血性黄疸,是先天性胆红素代谢功能缺陷疾病之一,系由肝细胞摄取非结合胆红素功能障碍及微粒体内葡萄糖醛酸转移酶不足,导致血液中非结合胆红素增高而出现黄疸的一类遗传性疾病,在青年人群中多见。

三七皂苷R_(1)干预肾脏氧化应激和Nrf2/HO-1信号通路改善IgA肾病模型鼠肾损伤的作用和机制

为了探究三七皂苷R_(1)(notoginsenoside R_(1),NGR_(1))干预肾脏氧化应激和Nrf2/HO-1信号通路改善IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)模型小鼠肾损伤的作用和机制,通过连续牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)灌胃、皮下注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)蓖麻油、尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等综合措施建立IgAN小鼠模型,成模后,将IgAN模型鼠随机分为模型组,NGR_(1)低、中、高剂量组以及氯沙坦(losartan)组,并以C57BL6小鼠为正常对照。模型组、正常组使用磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)灌胃,NGR_(1)各组使用不同剂量NGR_(1)灌胃,氯沙坦组使用losartan灌胃,连续干预4周。末次给药后收集各组小鼠24 h尿液,动物实验结束时采集小鼠血清和肾组织标本。检测小鼠尿红细胞计数(urine red blood cell count,URBCC)、24 h尿蛋白、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的水平,ELISA检测小鼠血清中半乳糖缺陷的IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)、肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutropil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)水平,试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平,免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测肾小球系膜区谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达,Western blot检测肾组织中核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路蛋白表达,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察小鼠肾小球区域病理改变。结果显示,与模型组比较,NGR_(1)高剂量组血清Gd-IgA1水平、URBCC、24 h尿蛋白水平、肾损伤指标(Kim-1、NGAL)明显降低,肾功能指标(BUN、Scr)明显改善;肾脏组织中SOD活性、GPX4表达升高,而MDA下降,Nrf2和HO-1蛋白表达升高;同时,肾组织HE染色提示NGR_(1)高剂量组肾小球损伤明显减轻。总之,该研究阐明,NGR_(1)可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,提高机体抗氧化能力,降低肾脏氧化应激水平,而减轻IgAN模型鼠肾损伤。

水蛭通过p38MAPK信号通路对早期动脉粥样硬化大鼠VSMCs的影响

为了探究中药水蛭干预作用下p38MAPK信号转导通路对早期动脉粥样硬化(AS)大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖与凋亡的影响及其可能机制。实验通过生化分析仪检测中药水蛭对大鼠血脂(TG,TC,LDL-C,HDL-C)水平的调控;ELISA检测血清中TGF-β1的水平;免疫组织化学法(IHC)检测VSMCs的PCNA,Caspase-3表达水平;Western blot检测中药水蛭对VSMCs中MKK3,p38及C-myc蛋白表达的影响;HE染色观察大鼠胸主动脉形态变化。结果显示,中药水蛭可使TC,LDL-C明显降低,HDL-C升高,TGF-β1,PCNA的表达水平明显下降,Caspase-3表达上调,MKK3,p38及C-myc蛋白表达水平下降,以及抑制内膜增厚、减少斑块形成。以上结果表明中药水蛭可能通过调降血脂,降低TGF-β1水平,影响p38MAPK信号通路蛋白表达,从而抑制VSMCs的增殖、促进其凋亡,抑制内膜增厚、减少斑块形成等环节,进而干预早期AS进程。

中药水蛭对高脂血症大鼠脂质代谢及肝脏的影响

为了探究中药水蛭对高脂血症大鼠脂质代谢及肝脏功能的影响及其可能机制。实验通过生化分析仪检测大鼠实验前后血脂（TG，TC，HDL-C，LDL-C）的水平；ELISA检测实验末大鼠血清丙氨酸转移酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）的水平；Westernblot法检测大鼠肝脏组织中酰基辅酶A．-固醇酰基转移酶-2（ACAT-2）、脂肪酸合成酶（Fas）、羧甲戊二酸辅酶A还原酶（HMGCR）的表达水平；称量大鼠的体质量、肝脏质量并计算肝脏指数；油红0染色观察大鼠肝脏组织中脂质的沉积情况。结果显示，中药水蛭可以使高脂血症状态下大鼠的TC，LDL-C水平降低，HDL-C升高，ALT，AST水平明显下降，肝脏指数降低，肝脏组织中ACAT-2，Fas，HMGCR的表达水平下降，油红O染色显示中药水蛭干预组大鼠肝脏组织中的脂质沉积减少。以上研究结果表明，中药水蛭可能通过抑制肝脏组织中与脂肪酸、胆固醇合成及转化相关的酶ACAT-2，Fas，HMGCR表达水平及活性，减少胆固醇、脂肪酸的合成，从而调节脂质代谢以降低大鼠血脂水平，减轻肝脏组织中的脂质沉积及大鼠肝脏损伤，进而干预高脂血症大鼠非酒精性脂肪肝（NAFLD）的进程。

脓毒症的血液净化治疗新进展

脓毒症是由宿主对感染反应失调引起的危及生命的器官功能障碍,是重症患者死亡的重要原因。当前脓毒症的治疗除了使用抗生素、改善器官功能障碍和必要时的手术治疗外,各种体外血液净化疗法也可作为调节炎症反应的辅助治疗手段。脓毒症会诱发免疫系统的调节失衡,进而导致器官功能障碍;血液净化作为脓毒症的辅助治疗方法,目的是通过清除细胞因子和内毒素,控制免疫系统相关的调节失衡。本文对脓毒症的血液净化治疗新进展作了综述。

铁死亡在肾脏疾病中的作用研究进展

铁死亡是一种新发现的调控性细胞死亡方式,本质为铁介导的脂质过氧化累积引发细胞氧化还原系统失衡。铁死亡通路的关键机制包括胱氨酸/谷氨酸逆转运体、谷胱甘肽过氧化酶4及多不饱和脂肪酸生物合成路径等,诱导剂与抑制剂通过调节相关靶点分别促进与抑制铁死亡。现有研究提示铁死亡参与了多种肾脏疾病的发生发展,本文就铁死亡在肾脏疾病中的作用研究最新进展作一综述。