Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析

本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法,为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0.05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察,支原体检测,Vimentin蛋白免疫荧光鉴定,测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率,核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞,消化后2~3h即大部分贴壁并基本完全伸展,细胞呈梭形或多角形,胞浆饱满,立体感强,细胞核清晰形态良好,支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形,符合体外培养细胞正常生长增殖规律,细胞倍增时间为24.85h。逆转录病毒感染效率达75.6%,病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%,遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单,效率高,获取的细胞状态良好,细胞增殖速度快,细胞感染率高,是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段,为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。

造血干细胞治疗心肌梗死的机制研究进展

造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)获取相对容易,应用时无组织相容性问题及伦理争议,在再生医学的研究及应用中具有较大的潜力。研究证明,HSCs具有促进心肌损伤后修复,改善受损心脏功能的作用。心肌梗死后多种细胞因子等生物活性分子及相关信号通路参与HSCs动员、归巢至心脏。同时,研究表明多种机制可能促进HSCs发挥心肌修复作用,如转分化、细胞融合、旁分泌、促进心外膜细胞发生上皮间充质转化等,但其确切机制尚有争议。本文就近年来关于HSCs在心肌梗死后动员及发挥修复作用的机制研究进展作全面概述。