酸性接枝淀粉固定化糖化酶及稳定性研究

糖化酶（ＥＣ．３．２．１．３，ＧＡ）是工业上应用规模最大的３种酶制剂之一［１］．目前，工业生产中大多采用游离ＧＡ，这给产物的分离和纯化带来诸多不便．因此，采用固定化糖化酶（ＩＧＡ）是酶制剂工业发展的必然趋势．人们已对糖化酶的固定化进行了大量研究［２～...

人参中蛋白质的分离纯化

以长白山人参为原料， 用盐溶液抽提、盐析、超过滤、离子交换层析及亲和层析分离纯化出一种人参蛋白质， 经 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定其纯度为一条带， 并测定其分子量在１４ ０００～１６ ０００ 之间．

课堂教学与大学生科研兴趣培养相结合的实践探索——以吉林大学生命科学学院“生物化学”课程为例

科学研究是一项十分艰难、辛苦的工作,如果对它没有浓厚的兴趣,没有十分的热情,则很难持久地进行下去,取得卓越的成就。课堂是学生积累知识、培养能力、提升素养的重要场所,知识的应用离不开科研,如何在课堂教学中培养学生对科研的兴趣尤为关键。通过多年教学经验的积累和创新探索,本文从教学方法、教学内容、学习环境三个方面,总结出课堂教学与大学生科研兴趣培养相结合的途径,力争为后续研究指明方向。

原核表达载体pHsaE1αβ的构建和人丙酮酸脱氢酶的表达与纯化

以质粒pQE9为原型载体,将编码hPDH的α和β亚基的cDNA串联克隆到该载体上,成功地构建了hPDH基因的表达载体pHsaE1αβ.并在大肠杆菌中表达了hPDH,通过亲和层析法进行纯化,对一些生物化学性质进行表征.

阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体的构建

目的构建阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体。方法选择Aβ42的B细胞优势表位的15个氨基酸基因序列,与趋化因子BCA-1基因连接,克隆至经突变改造的原核表达质粒pRSET/no His中,经酶切和DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定及DNA测序确定已将BCA-1/Aβ1-15克隆到表达载体pRSET/no His中。结论已成功地构建了Aβ42亚单位疫苗的原核表达质粒。

多孔球状淀粉接枝共聚物的合成及其性质研究

报道了一种多孔球状淀粉接枝共聚物的合成．此球有很强的机械性能、良好的稳定性和较高的致孔率（30％～40％），平均孔径约为19．5nm．以其为载体固定化精化酶活力为1462IU／g干胶，比活为29．31IU／mg蛋白．

四川地区宫颈癌患者组织中部分高危HPV亚型感染及E6基因序列分析

目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒（HPV）33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.

稠油油井综合调堵助排剂研制

为解决稠油蒸汽吞吐井汽窜和注汽指进问题,利用室内实验,研制出高温调堵助排剂,对其性能进行了测试,结果表明可以进行现场试验。该助排剂的研制成功为稠油注汽开采提供了技术支持。

HIV-1膜蛋白在甲醇型酵母中的表达和抗原性的研究

通过计算机辅助分析了中国广西B/C重组亚型HIV-1病毒株的Env蛋白(共851氨基酸残基)氨基酸的疏水性、潜在的抗原表位,与其它亚型的Env蛋白在氨基酸组成的保守性方面进行了比较,选择了env基因的469-511aa,538-674aa和700-734aa三段保守性及抗原性都较强的氨基酸序列构建成嵌合基因,将嵌合基因构建到毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαB中,利用甲醇诱导表达,对表达的蛋白进行了Wester blot和SDS-PAGE分析,结果表明,三段基因能在毕赤酵母Pichia pastoris中表达,产物为40kD的特异性诱导糖蛋白,通过Ni-sepharose 4B金属Ni螯合层析柱分离纯化表达蛋白,酶联免疫检测结果表明,纯化的抗原有很强的抗原特异性,可以用于HIV检测试剂的研制和开发。

SOE-PCR法合成狂犬病毒单链抗体基因Fv57

目的:通过一系列短引物拼接合成狂犬病毒糖蛋白单链抗体基因Fv57。方法:采用SOE-PCR的方法,利用多条短的寡核苷酸引物,经过6轮PCR,拼接合成800bp左右的狂犬病毒糖蛋白单链抗体基因Fv57,并利用此方法修正了上述PCR过程中产生的多处突变,从而获得正确的单链抗体基因序列。结果:采用SOE-PCR法合成的基因序列经测序及酶切鉴定,与预期结果一致。结论:成功地利用SOE-PCR法合成了狂犬病毒糖蛋白单链抗体基因Fv57,为其下一步构建原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达奠定基础。

艾滋病疫苗国家工程实验室的设计与筹建

从实验室的基础设施建设、人才与团队建设及实验室运行机制、制度建设等方面介绍了吉林大学艾滋病疫苗国家工程实验室的设计与筹建过程、实验室建设的整体思路和设计原则,以及细胞实验室和疫苗研究平台等功能实验室的建设。该实验室建设过程中注意节约资金,合理利用现有资源,打造出一个既具有产学研结合特色,又适合高科技人才培养与发展的,结构科学、布局合理、具备良好科研氛围和动力的疫苗国家工程实验室。

鼠白细胞介素15真核表达质粒的构建及活性鉴定

从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得鼠白细胞介素15(mIL-15)基因,将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS-7细胞,将转染细胞裂解,Westernblot检测.表明获得了mIL-15真核表达载体,其具有完整的带有信号肽的mIL-15序列,重组结果正确,Westernblot检测阳性.并获得有生物活性的mIL-15蛋白.

聚乙二醇修饰重组人天冬酰胺酶的研究

天冬酰胺酶对治疗急性淋巴细胞白血病和某些肿瘤疾病有很好的疗效,但由于其在人体内所产生的副作用———过敏反应限制了它的应用。目的:运用化学修饰剂聚乙二醇对天冬酰胺酶进行化学修饰,以降低其免疫原性,提高其在体内的半衰期;并使修饰后的天冬酰胺酶的活性保持较高的水平。结果:修饰后的天冬酰胺酶的免疫原性降低为原来的20-30%;用胰酶水解24h没有变化;而其比活力为未修饰酶的23%。该结果已经具备了很大的临床应用价值。

四川地区宫颈癌组织HPV18和HPV45 E6基因突变分析

采用聚合酶链反应技术对四川地区2003～2004年收集的60例宫颈癌患者的癌组织DNA进行人乳头瘤病毒（HPV）E6基因扩增，获得HPV18和45型E6基因．序列分析发现，18型三例E6基因有同样的两处同义突变；45型两例E6基因发生突变，一例有两处碱基突变，另一例发生六处碱基突变，其中两处涉及氨基酸变化，均位于E6抗原决定簇区．HPV45型E6基因中134位c→t，157位c→t，259位g→t和341位t→c的碱基点突变未见报道．另外，该地区HPV18和45型突变株之间存在碱基互变，它们之间的最小差异比野生型HPV18和HPV45之间的差异小4．05％，该数值比在非洲发现的突变株的要小很多，该结果支持HPV18和HPV45可能起源于非洲的观点．

淀粉接枝共聚物共固定糖化酶和葡萄糖异构酶研究

以多孔球状淀粉接枝共聚物为载体，以对一卜硫酸酯乙砜基苯胺（SESA）为载体活化剂，采用重氮化法共价偶联共固定糖化酶和葡萄糖异构酶．该共固定双酶体系适用于各种类型的淀粉底物，在PH6．0，60℃条件下，共固定双酶体系能将5％（质量浓度）DE－27糊精一步转化为果糖含量为20％的果葡糖浆，其催化效率是天然酶体系的1．6倍．

中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白真核表达载体的构建及稳定表达细胞株的筛选

目的获得高质量的中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白抗原。方法改造表达载体,以构建中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白基因带有筛选标记的真核细胞表达质粒,将所构建质粒转染真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出能够高效、持续表达包膜蛋白的稳定表达细胞株。结果所构建的表达载体pVRPEnv转染细胞后可表达目的蛋白,并建立了稳定表达细胞系。结论获得了可以高效、持续稳定表达中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白的细胞株。

“基础学科拔尖学生培养计划”的实施与探索——以吉林大学“唐敖庆班”为例

教育部在全国16所高校启动"拔尖学生培养计划"以来,吉林大学生命科学学院与化学学院充分利用学科优势,在课程体系、实践教学、素质教育、教师队伍、国际化教育以及产学研合作等方面进行了深入的改革与实践,不断探索基础学科拔尖学生的培养模式,已取得一定的成效。

HIV-1外膜蛋白在毕赤酵母中的构建

为了进一步研究HIV-1外膜蛋白的结构和功能,获得足够量的糖蛋白,对HIV-1的外膜蛋白Env进行了修饰,利用PCR技术克隆目的基因,把Env基因构建到毕赤酵母Pichia pastoris表达载体中,把pPICZαB-Env表达载体转化到酵母中,根据基因重组技术,使Env基因和酵母基因组重组,筛选阳性重组子.

hKv4.3基因5＇非翻译区序列S160功能分析

hKv4.3基因是形成瞬时外向钾电流Ito的主要分子基础,它在心脏和神经细胞中大量表达,但在其它组织中则未见大量表达.为了研究hKv4.3表达在基因水平的调节,将hKv4.3基因的5′非翻译区的一段序列(+2^+160,称之为S160)克隆到报告质粒中,进行瞬时表达.发现S160对hKv4.3基因的启动子和SV40的启动子都有强烈的抑制作用,没有方向特异性,但却有位置特异性.经删除突变分析,在S160片段中发现了一个抑制元件S(GAGGGGTTAA),它位于hKv4.3基因中转录起始位点下游20~30bp处.在此基础上,用RT-PCR方法对mRNA进行定量分析,初步确认这个抑制元件对蛋白表达的抑制过程是在翻译水平上.