细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响

目的:分析细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响。方法:二维及三维微团培养兔膝关节软骨细胞,分别破坏软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白及波形蛋白,分析细胞骨架改变引起软骨细胞表型改变的关系。结果:破坏软骨细胞骨架的波形蛋白,可引起Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达下降,且三维微团培养较二维培养下降更明显,而Ⅰ型胶原蛋白表达则无明显改变;破坏软骨细胞骨架的微管,不引起Ⅰ型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达的改变;破坏软骨细胞骨架的肌动蛋白,在二维培养条件下可促进Ⅱ型胶原蛋白的表达,而在三维微团培养条件下,Ⅱ型胶原蛋白表达则无明显改变。结论:波形蛋白对维持正常软骨细胞表型起重要作用。

天冬氨酸修饰纳米羟基磷灰石/聚乳酸复合物制备软骨组织工程支架及其生物性能研究

目的:通过天冬氨酸修饰的纳米羟基磷灰石(Asp-n HA)和左旋聚乳酸(PLLA)复合,制备软骨组织工程支架,并进行体外实验研究,探索其作为软骨组织工程支架的可行性。方法:以碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺偶联法制备Asp-n HA,并与PLLA复合,获得新型Asp-n HA/PLLA纳米复合支架。比较成骨细胞在该新型材料表面的粘附、生长和增殖的情况。结果:加入n HA后,Asp-n HA/PLLA复合材料可显著增强细胞的粘附、生长、增殖;Asp-n HA/PLLA的生物学性能明显优于PLLA及HA/PLLA,且Asp-n HA/PLLA具有最强的体外诱导成骨细胞分化能力。结论:Asp-n HA/PLLA制备简单,具有良好的生物相容性和成骨活性,是一种性能良好的骨组织工程支架材料。

软骨仿生基质体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞样细胞

目的探讨含2型胶原蛋白(Col2)、硫酸软骨素(CS)和(或)透明质酸(HA)的软骨仿生基质材料,在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为软骨细胞样细胞的影响。方法体外培养BMSC,分别接种于对照材料、含Col2、Col2-CS、Col2-HA、Col2-CS-HA的软骨仿生基质材料。诱导7、14、21、28 d后,采用CCK-8法检测各复合基质对BMSC增殖、分化活性的影响;采用反转录PCR技术检测软骨细胞标志物Col2、Y染色体性别决定区相关高迁移率组基因9(SOX9)及聚集蛋白聚糖(aggrecan)的mRNA水平,免疫荧光技术检测Col2、SOX9及aggrecan的蛋白水平。结果 CCK-8法检测结果显示,以Col2为基础的基质材料都能作为BMSC生长的良好细胞外基质,CS和HA使BMSC的增殖活性逐渐增加;各复合基质材料均能在体外有效诱导BMSC向软骨细胞样细胞分化;Col2-CS-HA包被能够最大程度上调Col2、SOX9及aggrecan mRNA及蛋白的水平。结论以Col2为基础的仿生基质材料可在体外有效诱导大鼠BMSC分化为软骨细胞样细胞,其中以复合Col2-CS-HA基质材料效率最高。

青蒿琥酯通过PI3K-Akt通路促进大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的体外研究

目的探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法不同浓度的ART(400 nmol/L、800 nmol/L、1.6μmol/L、3.2μmol/L)作用于NSCs 24 h后,采用CCK-8法检测其对NSCs增殖的影响。促增殖作用明显的800 nmol/L ART组加入10μmol/L PI3K-Akt通路阻断剂(LY294002),采用CCK-8法检测该通路对NSCs增殖的影响;分别设置空白对照组、LY294002组、800 nmol/L ART组、800 nmol/L ART+LY294002组,待细胞培养24 h时,行Ki-67免疫荧光染色观察ART对NSCs增殖的影响及PI3K-Akt通路在其中的作用,同时采用Western blot检测各组Nestin、Akt及p-Akt蛋白的表达水平。结果 1CCK-8法检测结果显示800 nmol/L ART组在波长450 nm处的光密度值较空白对照组明显升高,在加入LY294002后,其光密度值明显下降(P<0.05),与空白对照组水平相当;2Ki-67免疫荧光染色结果提示800 nmol/L ART可促进NSCs增殖,LY294002可抑制这一作用;3Western blot检测结果显示:神经干细胞表面标志蛋白Nestin及p-Akt蛋白表达水平在800 nmol/L ART组明显上调,在加入LY294002后两者表达水平均下调(P<0.05)。结论 ART可在体外促进SVZ区NSCs的增殖,其机制与PI3K-Akt信号通路相关。

cofilin对软骨细胞骨架及表型的影响

目的:研究丝切蛋白(cofilin)表达对软骨细胞表型及骨架的影响。方法:通过siRNA及质粒转染分别构建cofilin低表达和高表达模型,对表达不同水平cofilin的软骨细胞进行细胞骨架及相关蛋白的检测,以研究cofilin对软骨细胞表型及骨架方面的影响。结果:降低cofilin蛋白表达后,鬼笔环肽染色后观察到的软骨细胞骨架变得更为紧凑,在细胞延伸方向的肌动蛋白密度相对对照组更密集,同时软骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)表达稍增高(137.42%±25.14%),结果无统计学意义(P>0.05),II型胶原蛋白(COLⅡ)表达明显降低(19.96%±14.59%),结果有统计学意义(P<0.05);增加软骨细胞cofilin表达,软骨细胞骨架的免疫荧光强度较对照组稍暗,且分布稍广,COLⅠ表达降低(44.47%±21.67%),结果有统计学意义(P<0.05),COLⅡ表达稍增高(116.16%±13.18%),结果无统计学意义(P>0.05)。结论:cofilin蛋白对软骨细胞骨架具有重要的作用,cofilin蛋白的表达有助于软骨细胞维持其软骨细胞特性,cofilin蛋白表达的降低将导致软骨细胞特性的改变,这些改变在软骨损伤相关疾病的发病机制中扮演着重要的角色,将来有望通过调节这种改变来治疗软骨损伤,但其需要更进一步的研究去阐明相关机制与原理。

调节软骨细胞骨架蛋白对成软骨表型的影响

目的研究软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系。方法采用三维微团培养法培养新西兰兔膝关节软骨细胞,将软骨细胞分为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组,通过秋水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝,从大体形态、组织切片染色、免疫组化染色及RT-PCR分析成软骨细胞表型的改变。结果对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组细胞较密集、均一,丙烯酰胺组细胞较少、分散。对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组COLⅡ、蛋白多糖染色深,COLⅠ染色浅;而丙烯酰胺组COLⅡ、蛋白多糖染色浅,COLⅠ染色较深。RT-PCR数据统计分析显示对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比,COLⅠ(1.21±0.21 vs 1.55±0.06、1.70±0.07)及COLⅡ(1.10±0.12 vs 0.91±0.21、0.90±0.30)表达差异无统计学意义(P>0.05);而对照组COLⅡ表达明显多于丙烯酰胺组(0.26±0.06),COLⅠ表达明显低于丙烯酰胺组(9.63±0.38),差异有统计学意义(P<0.05)。结论丙烯酰胺调节软骨细胞骨架波形蛋白中间纤丝可明显下调COLⅡ、蛋白多糖的表达。

骨关节炎的关节腔内注射药物及生物制剂治疗现状

骨关节炎是一种由多种因素引起的慢性退行性关节疾病,其病因及发病机制尚不明确,通常认为与年龄、肥胖、创伤、炎症和遗传易感性等因素相关。骨关节炎的病理学特征包括关节软骨变性破坏、骨赘形成、软骨下骨重塑、关节边缘骨质增生、滑膜增生和关节囊挛缩等。骨关节炎导致的关节疼痛、活动受限以及功能丧失严重影响患者的生活质量,且随着病情的发展关节致残风险逐渐增加。由于人口老龄化的不断加剧,骨关节炎可能将成为世界上第4大致残性疾病。目前,临床上尚无有效的手段来阻止骨关节炎的进展,骨关节炎的治疗目的主要为减轻或消除疼痛、矫正畸形、改善或恢复关节功能以及改善患者生活质量。骨关节炎的治疗方法包括保守治疗和手术治疗,保守治疗包括非药物治疗和药物治疗。对于口服药物无效或无法耐受口服药物的患者,关节腔内注射药物或生物制剂是优先选择的保守治疗方式.

天然仿生材料通透性影响细胞移植的研究进展

软骨缺损常发展为骨关节炎,最终导致进行性全关节破坏。而由于血管的缺乏,关节软骨自我修复能力有限,成为了当今治疗的难题。随着组织工程学技术的发展,天然仿生材料联合细胞移植技术为修复受损软骨提供了可能性。天然仿生材料的通透性是其基本理化性质之一,可直接影响联合移植的软骨细胞的存活状态以及骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化,在联合细胞移植技术修复软骨缺损中具有重要意义,越来越受到研究者们的重视。

二维及微团培养法对软骨细胞表型的影响

目的探讨二维及微团培养对软骨细胞表型的影响。方法体外高密度二维及微团培养方法培养兔软骨细胞,从细胞形态、细胞外基质表达情况分析软骨细胞表型的差异。结果高密度二维方案培养兔软骨细胞,2周后软骨细胞多层分布,HE染色显示细胞呈圆形,细胞间联系较密,阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌较少;微团培养方法培养兔软骨细胞,2周后形成肉眼可见的白色组织,HE染色显示细胞呈多边形,细胞较分散,阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌明显多于二维培养,差异有统计学意义(P<0.05)。结论微团培养方法培养兔软骨细胞,有利于软骨细胞分泌细胞外基质。

不同方案治疗青少年胫骨髁间棘骨折的疗效比较

目的对比带线锚钉、空心螺钉及钢丝固定治疗青少年髁间棘骨折的临床疗效。方法病例来自我院2010年1月至2016年6月确诊为胫骨髁间棘骨折并行手术治疗的青少年患者,共计46例,根据术中固定方式不同,将其分为A组(带线锚钉组)、B组(空心螺钉组)及C组(钢丝组)。所有患者均统计总手术时间、住院时间及手术次数,评估膝关节Lysholm、Tegner、IKDC及VAS评分。结果所有患者均获得平均13个月(11~14个月)随访,无神经血管损伤、感染、骨骺损伤及骨折移位等并发症。术前,A组、B组及C组间的Lysholm、Tegner、IKDC及VAS评分的组间差异无统计学意义(P>0.05)。A/B/C组手术时间分别为(80.67±16.68/114.00±20.28/111.88±20.07)min,住院时间分别为(8.40±1.12/15.47±1.25/15.19±1.17)d,手术次数分别1/2/2次。术后,各组末次随访的评分较治疗前均有明显改善,差异具有统计学意义(P<0.05);A组、B组及C组间的Lysholm、Tegner、IKDC、VAS评分的组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论带线锚钉、空心螺钉及钢丝固定治疗青少年髁间棘骨折的临床疗效相似。相比之下,带线锚钉具有手术时间及住院时间少,无需二次手术取出内固定物,可优先考虑使用。

关节镜下肩胛下肌松解术治疗肩胛下肌损伤28例疗效观察

背景:关节镜下治疗肩袖损伤技术已经成为主流治疗手段,但对于肩胛下肌引起的肩袖问题的手术治疗研究较少。目的:观察关节镜下肩胛下肌松解术治疗肩胛下肌损伤的疗效。方法:回顾性研究关节镜下松解术治疗的28例肩胛下肌损伤患者的病例资料。其中男13例,女15例,年龄33~52岁,平均(42.7±5.8)岁。LafosseⅠ型10例,Ⅱ型18例。手术前后采用肩关节功能评分(UCLA、SST、Constant-Murley),肩关节活动度和肌力评估治疗情况。结果:所有患者随访12~19个月,平均(14.0±3.4)个月,优良率93%;末次随访UCLA评分、SST评分、Constant-Murley评分、VAS评分、肩关节活动度均明显改善,与术前比较差异有统计学意义(P<0.01),但肌力比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:关节镜下肩胛下肌松解术治疗单纯肩胛下肌损伤可明显缓解肩部疼痛、提高肩关节活动范围以及肩关节功能评分,同时对患者肩关节肌肉力量无明显影响。

3种肩峰形态在肩峰撞击征中的治疗方式选择

目的探讨肩峰类型在肩峰撞击征治疗方法选择中的作用。方法选择湖南省人民医院关节与运动医学科2011年1月至2016年1月确诊为单纯单侧肩峰撞击征的患者,共计96例。根据治疗方式的不同,将病例分为A组(保守治疗)及B组(手术治疗);根据Bigliani分型,A、B组又分为Ⅰ(Ⅰ型肩峰)、Ⅱ(Ⅱ型肩峰)及Ⅲ(Ⅲ型肩峰)组。所有患者治疗前及随访时记录前屈上举主动活动度、撞击体征(Neer与Hawkins征);进行美国加州大学肩关节评分系统(UCLA)及Constant-Murley评分。在手术患者中,统计撞击综合征Neer分期情况。结果所有患者均获平均12个月(10~15个月)随访,无神经血管损伤、骨折及感染等并发症。治疗前,AⅠ与BⅠ、AⅡ与BⅡ、AⅢ与BⅢ组的前屈上举主动活动度、撞击体征、UCLA及Constant-Murley评分的组间差异均无统计学意义(P>0.05)。术中,BⅠ、BⅡ及BⅢ组的撞击综合征Neer分期分别为BⅠ组NeerⅠ、Ⅱ、Ⅲ期分别12、2、2例,BⅡ组NeerⅠ、Ⅱ、Ⅲ期分别8、6、3例,BⅢ组NeerⅠ、Ⅱ、Ⅲ期分别5、4、6例。治疗后末次随访中,各组末次随访的结果较治疗前均有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);AⅠ与BⅠ、AⅡ与BⅡ组治疗效果组间差异无统计学意义(P>0.05);AⅢ组与BⅢ组差异则有统计学意义(P<0.05)。结论在BiglianiⅠ、Ⅱ型肩峰的肩峰撞击征可保守治疗,而Ⅲ型患者多需手术治疗。

关节镜修复肩袖损伤临床疗效分析

目的:探讨关节镜全镜下缝合修复肩袖损伤的适应证选择、手术技巧和临床疗效。方法:自2013年1月至2014年12月收治36例肩袖损伤患者,采用关节镜修复肩袖损伤,分别在术前及术后末次随访时采用美国肩肘医师协会评分(ASES)、Constant-Murley评分以及简易肩关节评分(SST)问卷进行功能恢复评估。结果:本组36例均获得随访,随访时间6~30个月,平均15个月。随访时,36例患者ASES评分平均术前69.8对比术后85.3(P<0.05),其中SST评分平均术前6.3对术后11.7(P<0.05),肩关节平均前屈上举为术前148°对比术后171°(P<0.05),平均外旋为术前26°对比术后43°(P<0.05),平均Constant-Murley评分为术前67.8对比术后79.6(P<0.05),术后肩关节功能较术前明显改善,其差异有统计学意义。结论:关节镜下肩袖修复手术具有损伤小、肩关节功能恢复快的特点,是治疗肩袖损伤的有效方法。

膝关节骨性关节炎患者关节液对髌下脂肪垫间充质干细胞的影响

目的研究膝关节骨性关节炎患者关节液对髌下脂肪垫间充质干细胞(Infrapatellar fat pad-derived mesenchymal stem cells,IPFP-MSCs)的影响。方法体外分离、培养IPFP-MSCs,分别采用DMEM/F-12培养基(或成软骨诱导培养基+DMEM/F-12培养基)、生长培养基(或成软骨诱导培养基)、膝关节骨性关节炎关节液条件培养基(或成软骨诱导培养基+骨关节炎关节液)对IPFP-MSCs进行处理。采用CCK-8和结晶紫染色检测细胞增殖能力,划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移能力,免疫荧光染色、Western Blot法、RT-PCR法检测PCNA、CXCR4基因表达,SA-β-Gal染色检测出现的衰老细胞,阿利新蓝染色对处理后的IPFP-MSCs成软骨分化能力进行鉴定。结果与DMEM/F-12培养基处理的IPFP-MSCs相比,骨性关节炎关节液条件培养基中的IPFP-MSCs生长更为密集,单位时间内迁移的细胞数增多,蓝染的衰老细胞数减少。骨性关节炎关节液条件培养基组PCNA基因表达量显著上升,CXCR4基因表达量降低。诱导培养基+骨性关节炎关节液组的阿利新蓝染色较其他组颜色更深,范围更广。结论膝关节骨性关节炎患者的关节液能够促进IPFP-MSCs增殖和迁移,并对诱导其成软骨分化具有协助作用。