自噬相关基因在小鼠月经样模型子宫内膜崩解过程中的动态表达

目的探究小鼠子宫内膜崩解过程中自噬相关基因表达的动态变化。方法建立小鼠月经样模型,孕酮撤退后0 h、8 h、16 h和24 h分别处死小鼠取其双侧子宫组织,通过苏木素伊红(HE)染色观察小鼠子宫组织的形态特征变化,采用蛋白质印迹(WB)检测小鼠子宫内膜崩解过程中LC3B和p62蛋白的表达动态变化,实时定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠子宫内膜崩解过程中Lc3b、p62、Beclin1、Atg3、Atg5和Atg7的mRNA水平变化。结果孕酮撤退后0 h、8 h、16 h和24 h子宫大体颜色逐渐由浅粉色变为深红色,子宫内膜崩解坏死区域逐渐扩大,24 h时蜕膜化的子宫内膜完全崩解坏死。WB结果显示:孕酮撤退后16 h时,p62的蛋白表达水平较0 h和8 h时显著升高(P<0.05),24 h时p62的蛋白表达水平较其他时间点显著升高(P<0.01);LC3B-Ⅰ蛋白在孕酮撤退后0 h到8 h无显著变化(P>0.05),8 h到24 h其表达量显著降低(P<0.05);孕酮撤退后子宫内膜崩解过程中LC3B-Ⅱ的蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。RT-qPCR结果显示:p62 mRNA水平在孕酮撤退后0 h到16 h无显著变化(P>0.05),而24 h时p62 mRNA水平较8 h和16 h显著降低(P<0.05);Lc3b mRNA水平在孕酮撤退后16 h时较0 h和8 h显著上调(P<0.01),而24 h时Lc3b mRNA水平显著低于撤退后16 h(P<0.01);Beclin1 mRNA水平在孕酮撤退后8 h、16 h和24 h的表达较0 h均显著下降(P<0.05),且撤退24 h后Beclin1 mRNA水平相较8 h和16 h显著降低(P<0.01);Atg3、Atg5和Atg7的mRNA水平孕在酮撤退后0 h到16 h无显著变化(P>0.05),而24 h时的mRNA水平显著低于其他时间点(P<0.05)。结论孕酮撤退后,子宫内膜崩解过程中自噬水平下降,提示自噬参与负调控子宫内膜崩解过程。

时钟基因Cry1与Bmal1在小鼠子宫内膜生理性修复过程中的表达研究

目的 以小鼠月经模型为基础,探究时钟基因Cry1与Bmal1对小鼠月经期子宫内膜生理性修复过程的影响。方法 通过建立小鼠月经样生理性修复模型,利用苏木素伊红(HE)染色法进行组织形态学观察;利用免疫组织化学(IHC)染色法观察CRY1与BMAL1蛋白在小鼠月经样修复模型中的表达定位;进一步利用蛋白免疫印迹杂交(Western blot)检测CRY1与BMAL1蛋白的表达水平。结果 孕酮撤退后24~48 h子宫大体颜色逐渐变淡,子宫直径由粗逐渐变细。HE染色结果显示,孕酮撤退后24 h蜕膜化区域大部分细胞坏死崩解,且随着时间推移,子宫内膜厚度增加,子宫腔面出现再上皮化,腺体数量明显增多;48 h时,子宫内膜修复完整,基本恢复到正常子宫形态。IHC染色结果显示,CRY1和BMAL1蛋白的阳性染色定位于细胞质和细胞核中,主要集中在细胞核,且阳性信号随着孕酮撤退时间呈现一定差异。Western blot检测结果显示,孕酮撤退24 h后,子宫内膜CRY1蛋白表达显著降低(P<0.05),40 h时表达量相对更低,出现低谷。孕酮撤退后32 h子宫内膜BMAL1蛋白的表达量相对更低,显著低于24 h和48 h(P<0.05),与CRY1蛋白相比,低谷提前8 h出现。结论 时钟基因在子宫内膜呈现规律性的周期性表达,提示时钟基因及其信号通路可能参与子宫内膜生理性修复过程。

时钟基因在生殖系统中的研究进展

生物昼夜节律是机体为适应外界环境变化而产生的一种以约24 h为周期,调节机体大多数生理和代谢活动的细胞内机制,又称昼夜节律。昼夜节律是人体健康的中心调节器。它在神经、心血管等多种器官发育过程中起着非常重要的作用。昼夜节律失调与糖尿病、代谢性疾病及肿瘤发生发展等多种疾病相关。目前越来越多的研究表明,昼夜节律同样会影响睾丸、卵巢、卵泡和生殖母细胞的发育,昼夜节律异常也会导致生殖系统相关疾病的发生。昼夜节律的维持主要受到核心时钟基因的调控。本文概述了核心时钟基因在生殖系统相关组织中的表达动态及对生殖功能的调节。理解时钟基因如何调节生殖功能之间的关系将为新的时钟导向治疗策略的发展提供思路和靶点,有助于进一步提高时钟基因异常所致的生殖系统相关疾病的治疗效果。

ATF6在转基因敲除鼠人工诱导蜕膜化模型中的研究

目的利用小鼠人工诱导蜕膜化模型,探讨转录活化因子6(ATF6)在小鼠子宫内膜中的作用机制。方法构建繁育野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠,并构建小鼠人工诱导蜕膜化模型。雌鼠交配后见阴栓第1天记为Day 1。Day 4进行诱导蜕膜化,蜕膜化后48 h和72 h(即Day 6和Day 7)收集小鼠子宫进行相应指标检测,实时荧光定量PCR方法和蛋白质免疫印迹法检测Atf6 mRNA与蛋白质在蜕膜化子宫中的表达情况;免疫组织化学方法检测野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠人工诱导蜕膜化模型中ATF6和催乳素(PRL)在子宫中的阳性信号表达情况。收集人子宫内膜生理周期中不同时相子宫内膜组织,进行石蜡包埋切片,免疫组织化学方法检测ATF6在子宫内膜中的阳性信号表达情况。结果与小鼠未蜕膜子宫相比,Day 6和Day 7蜕膜化子宫中的Atf6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),细胞核内的蛋白水平也显著增高(P<0.05);Day 7时子宫大体形态学显示子宫较粗且均匀。野生型和敲除鼠诱导蜕膜化子宫HE染色显示,绝大部分子宫基质细胞变大变圆,表明诱导蜕膜化的子宫内膜蜕膜化充分;PRL免疫组化染色结果表明,在野生型(Atf6^(+/+))和敲除型(Atf6^(-/-))小鼠蜕膜化子宫内膜中,PRL染色阳性信号分布范围无显著性差异(P>0.05)。不同月经周期时相人子宫内膜组织的免疫组化结果提示,ATF6在月经期和增殖早期的表达水平较高,显著高于其余周期时相(P<0.05)。结论ATF6能够参与子宫内膜蜕膜化,但不是蜕膜化发生的必要条件;ATF6可能通过参与子宫内膜的生理修复过程参与子宫内膜生理周期。

边缘计算——开启门店科技新时代

线下门店逐渐成为新零售关注的重点,收集、处理线下门店数据并打造"智慧门店"成为新的趋势,在这一过程中,边缘计算扮演了重要角色。本文将从应用概观、系统架构、技术难点等方面就边缘计算技术在门店科技中的应用展开探讨。一、前言随着线上流量增长的停滞,以门店为代表的线下流量越来越成为新零售关注的重点,而门店也从传统的"货、场、人"模式转为以"人"为中心的"人、货、场"模式,智能科技成为门店进一步提升效能的推动力。