利用甲基纤维素改良的病毒噬斑技术

目的探究病毒噬斑实验的方法寻找其改良之处,为实验操作提供方便。方法用甲基纤维素代替琼脂糖覆盖病毒感染后的细胞。结果改良后的新方法在进行登革病毒滴度检测时相较于传统方法,可形成均匀、清晰的噬斑,复孔重复性好,而且噬斑在实验后2年内仍保存完好,与背景形成明显对比,便于复查。结论利用甲基纤维素的病毒噬斑技术,省时省力节约成本且便于操作,是一个值得推广的有价值的实验方法。

登革2型病毒与整合素β3相互作用机制的研究

目的观察登革2型病毒(dengue virus serotype2,DV2)感染后及转染DV2病毒蛋白的质粒后,EA.hy926细胞中整合素β3表达规律及表达量的变化,以初步明确DV2与整合素β3的相互作用的可能机制。方法经噬斑法测定DV2在EA.hy926中的增殖规律,并通过间接免疫荧光染色检测DV2感染后及病毒蛋白质粒转染后整合素β3表达量的变化。结果 DV2能够在EA.hy926细胞中增殖,在感染复数为1的条件下,最高病毒滴度为105pfu/ml,出现在感染后第5天,以后随着感染时间延长病毒滴度逐渐下降。DV2感染后整合素β3的表达量增高,且随感染时间的延长有渐增趋势;转染DV2E蛋白可诱导整合素β3的表达,且E蛋白与整合素β3有明显的共存,而DV2的其他病毒蛋白无明显诱导整合素β3表达的作用,且与之无明显共存。结论 DV2感染可诱导EA.hy926细胞整合素β3的表达,而E蛋白可能是DV2与整合素β3相互作用、进而介导病毒进入细胞的重要分子。

GM-CSF在登革热病毒和丙型肝炎病毒DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用

研究GM-CSF在DV、HCV等几种黄病毒DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用,并分析其作为黄病毒DNA疫苗佐剂的可能性。构建各种真核表达质粒,抽提质粒DNA,分组免疫小鼠,通过ELISA及间接免疫荧光染色检测小鼠血清抗体的动态水平。DV1及DV2prM/E核酸疫苗与GM-CSF质粒共接种的佐剂组小鼠血清抗体水平低于无佐剂的疫苗组,即GM-CSF显示了一定的免疫抑制作用,其中以DV1prM/E核酸疫苗更为显著;而在HCVC及E1蛋白核酸疫苗中,GM-CSF则具有一定免疫增强作用。GM-CSF作为疫苗佐剂,其作用具有复杂的多样性,因抗原的不同可能会呈现免疫提升或免疫抑制,因此选择其作为核酸疫苗佐剂时需慎重。