急性B淋巴细胞白血病BCL-2抑制剂耐药细胞系的构建及耐药机制研究

目的:利用急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞系RS4;11构建对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用BCL-2抑制剂navitoclax和venetoclax小剂量低浓度递增的方法间歇诱导RS4;11细胞系,构建RS4;11/Nav和RS4;11/Ven耐药细胞系,通过MTT法检测不同药物浓度下细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,转录组测序技术(RNA-seq)检测RS4;11耐药细胞系和亲本细胞系中的差异表达基因(DEGs),RRT-PCR检测耐药细胞系与亲本细胞系中差异表达基因的mRNA表达水平,Western blot检测耐药细胞系和亲本细胞系中BCL-2家族抗凋亡蛋白的表达水平。结果:成功构建了对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系RS4;11/Nav和RS4;11/Ven,RS4;11/Nav对navitoclax的耐药指数为328.655±47.377,RS4;11/Ven对venetoclax的耐药指数为2 894.027±300.311。流式细胞术检测细胞凋亡发现,相比耐药细胞系,RS4;11亲本细胞系明显被BCL-2抑制剂抑制,而耐药细胞系的凋亡率基本未受药物的影响。Western blot检测结果表明,BCL-2家族抗凋亡蛋白在耐药细胞系中的表达无明显增多。RNA-seq、RT-PCR和Western blot检测发现EP300在耐药细胞系中的表达较亲本细胞系明显增高(P<0.05)。结论:小剂量低浓度递增间歇诱导法可成功构建对BCL-2抑制剂耐药的B-ALL细胞系,并且其耐药机制可能与EP300的表达上调有关。

数字化3D可旋转人体实物心脏标本的构建及APP的制作与应用分析

目的通过精细解剖人体心脏,对其拍照,运用多媒体技术生成三维立体可旋转的数字化心脏标本,以网页和APP的形式展现,为医学生和临床实践提供指导。方法 (1)解剖心脏,涂染血管;(2)编写剧本,介绍标本,完成录音;(3)标本置于转盘上,进行360°拍照,合成3D可旋转心脏标本,插入剧本和录音,制作网页版课件和手机APP软件;(4)对手机APP使用情况进行问卷调查。结果网页版课件和APP制作成功,通过问卷调查网页版课件和APP有助于更好的学习心脏解剖。结论经问卷数据分析,3D实物心脏标本可适用于临床专业教学,便于对心脏结构的学习和理解。

体外连续传代对人脐带间充质干细胞分泌组蛋白表型的影响

目的 应用生信分析技术分析不同代次人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)分泌组蛋白表型差异,探讨体外连续传代对hUC-MSCs分泌组蛋白表型的影响。方法 取第4、6、10、15代(简写为P4、P6、P10、P15)hUC-MSCs的培养上清液,应用高通量人生长因子芯片(QAH-GF-1)、高通量人炎性因子芯片(QAH-INF-3)试剂盒检测80种细胞因子蛋白表达,微阵列数据分析软件Q-Analyzer自动计算出蛋白表达量。将检测浓度最佳置信度占比为50%~100%的蛋白浓度视为质控合格的可靠值,筛选出质控合格的蛋白,应用TBtools 1.105软件绘制层次聚类热图,分析不同代次hUC-MSCs培养上清液中蛋白的表达趋势,记录表达量随体外传代次数增多而增高或降低的蛋白,应用GraphPad Prism 8.0.1软件进行单因素方差分析,以P<0.05为标准筛选出差异表达蛋白,应用在线工具Metascape和微生信进行基因本体(gene ontology, GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)富集分析。结果 (1)人炎性因子芯片(QAH-INF-3)中有25种蛋白、人生长因子芯片(QAH-GF-1)中有14种蛋白质控合格。(2)质控合格蛋白的聚类分析结果显示,白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-11、IL-13、IL-17、M-CSF、GM-CSF、TNFR2、Eotaxin-1、MIP-1β、EGFR、SCFR、GDNF、Ⅰ-309、GDF-15、MCP-1及IL-1α共16种蛋白表达随体外扩增代次增加呈逐代下调趋势,IL-7表达随体外扩增代次增加呈逐代上调趋势。(3)P4、P6、P10和P15代hUC-MSCs培养上清液中IL-6、IL-11、IL-13、IL-17、M-CSF、GM-CSF、TNFR2、Eotaxin-1、MIP-1β、EGFR、SCFR、GDNF、Ⅰ-309、GDF-15及MCP-1蛋白表达量比较差异均有统计学意义(P<0.05),IL-1α、IL-7蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。P4代hUC-MSCs培养上清液中IL-6、IL-11、IL-13、IL-17、M-CSF、GM-CSF、TNFR2、Eotaxin-1、MIP-1β、EGFR、SCFR、GDNF、Ⅰ-309、GDF-15及MCP-1蛋白表达量均高于P15代hUC-MSCs培养上清液(P<0.05),IL-6、IL-11、IL-13、IL-17、M-CSF、TNFR2、MIP-1β、EGFR、GDNF、Ⅰ-309、GDF-15及MCP-1蛋白表达量均高于P10代hUC-MSCs培养上清液(P<0.05),IL-6、IL-11、IL-13、M-CSF、TNFR2、MIP-1β、EGFR、GDNF、Ⅰ-309蛋白表达量均高于P6代hUC-MSCs培养上清液(P<0.05)。P6代hUC-MSCs培养上清液中IL-6、IL-11、IL-13、GM-CSF、TNFR2、Eotaxin-1、EGFR、SCFR、GDNF和Ⅰ-309蛋白表达量均高于P15代hUC-MSCs培养上清液(P<0.05),TNFR2、GDNF蛋白表达量均高于P10代hUC-MSCs培养上清液(P<0.05)。P10代hUC-MSCs培养上清液中IL-6、IL-11、IL-13、GM-CSF、GDNF和Ⅰ-309蛋白表达量均高于P15代hUC-MSCs培养上清液(P<0.05)。(4)GO富集分析显示,15种差异表达蛋白主要在信号受体激活剂的活性、细胞因子介导的信号通路、细胞迁移的正向调节、生长因子活性等条目中富集。(5)KEGG通路富集分析结果显示,15种差异表达蛋白高富集于细胞因子受体的相互作用、病毒蛋白与细胞因子和细胞因子受体的相互作用、类风湿性关节炎以及IL-17和JAK-STAT信号通路等。结论 体外连续传代可导致hUC-MSCs分泌组蛋白表型变化,表现为高代次hUC-MSCs生长、分化、修复、免疫调节和趋化能力减弱,促炎和衰老表型增加。