转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选

【目的】通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊奠定基础。【方法】将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用BglⅡ和Hin dⅢ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES2-EGFP质粒连接后构建真核表达载体pIRES2-EGFP-4S;将此载体线性化后,采用脂质体法转染绵羊皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因阳性细胞。【结果】筛选得到转pIRES2-EGFP-4S的阳性细胞。对阳性细胞经体外培养后的检测显示:(1)细胞形态(长梭形)、细胞生长曲线(呈S形)、群体倍增时间(随培养时间增加逐渐缩短)和细胞接种率(细胞贴壁率及存活率在24 h内逐渐升高,并达到最高值125%)等均具有正常绵羊成纤维细胞的生物学特征;(2)阳性细胞经冷冻复苏后具有与新鲜阳性细胞相似的生物学特征;(3)PCR检测结果显示,pIRES2-EGFP-4S在阳性细胞的基因组中整合。【结论】获得具有在绵羊皮肤特异表达,且便于检测的转蜘蛛拖丝蛋白4S的绵羊成纤维细胞株。

城网带电作业对提高供电可靠率作用分析

供电可靠率是衡量供电企业供电质量的重要指标，在城网中开展带电作业能够极大地提高供电可靠率，满足城市经济发展和供电企业不断进步的需要。

日高峰电力负荷预测方法的应用研究

文章探索了小波分解、混沌时间序列相空间重构和Volterra自适应滤波器在电力日高峰负荷预测方面的应用。利用小波多分辨率分析的特点,对实际日高峰负荷数据序列进行小波分解,分别对每一个小波尺度进行相空间重构,并利用Volterra滤波器进行多步预测,最后将小波尺度空间进行重构得到预测结果。

从电量信息中判断高压计量装置异常

依据有、无功电能表的工作原理,提出在用户计费清单、电力营销系统中通过用电量和功率因数的联动变化关系来筛查、判断高压计量装置异常与否的方法。该方法使得用电检查效率大为提高,具有很强的实用性。

透水混凝土的施工技术及应用探讨

由于当前我国都市路面材料的问题,都市排水问题一直没有得到较好的解决,在很大程度上影响到都市居民的出行便利。因此,选用新型的路面材料,提升路面的排水性能就成了城市道路建设的重中之重。透水混凝土作为一种不同于传统混凝土的建筑材料,因为其自身具有较多空隙的特点,与传统的混凝土相比具有更好的透水性,且本身质量较轻,施工简便,更有利于促进都市水循环,对于解决都市道路的排水问题有着不容忽视的作用。本文将重点讨论透水混凝土的施工技术及实际应用。

市政管理中排水管网信息化建设的作用

在城市市政管理工作开展过程中,为了避免城市内涝问题的发生,必须对传统的排水管网进行升级。通过构建信息化的排水管网系统,提高城市排水的效率与安全。下文主要就我国市政排水管网信息化的建设现状进行分析阐述,并对排水管网信息化建设对市政管理的实际作用进行探究,以便合理地优化完善城市市政排水管网管理工作。

转肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株的筛选

为了筛选肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株,研究利用人工合成的小鼠肌肉启动子SP,连接前期工作中获得带有GFP基因的小鼠MSTN基因RNA干涉载体pR-NAT-M1,构建真核表达载体pRNAT-SP-M1,将pRNAT-SP-M1线性化后转染小鼠成纤维细胞并通过300μg/mL G418筛选获得转基因阳性细胞。结果表明:获得的转基因阳性细胞呈现正常的小鼠成纤维细胞的梭形,且在荧光显微镜下呈现出表达绿色荧光蛋白的绿色;转基因阳性细胞的生长曲线呈"S"形;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍具有正常的细胞形态和增殖特性;PCR鉴定结果显示转基因阳性细胞基因组DNA中整合有pRNAT-SP-M1序列。说明成功获得了转肌细胞特异表达的MSTN基因RNA干涉序列小鼠成纤维细胞株。