组织蛋白酶D有助于SRBSDV在白背飞虱体内复制

在白背飞虱(Sogatella furcifera)获毒过程中,南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)与细胞膜上受体结合,借助网格蛋白依赖型内吞作用进入宿主细胞。组织蛋白酶D(Cathepsin D,CathD)是一种天冬氨酸蛋白酶,参与细胞内体/溶酶体内蛋白降解和病毒释放进入细胞质过程,但CathD在SRBSDV侵染其介体白背飞虱时是否发挥作用目前尚不明确。通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默白背飞虱体内CathD基因的表达,发现沉默表达CathD基因的白背飞虱在饲喂SRBSDV后的存活率与对照组白背飞虱相比无明显差异,但会降低白背飞虱的带毒比率和带毒量;在果蝇细胞中敲低CathD同源基因的表达并感染果蝇C病毒(Drosophila C virus,DCV),细胞内DCV的复制水平与对照组相比也有明显下调。研究结果提示CathD可能通过一种保守的机制协助病毒在昆虫细胞内增殖,可以作为防控SRBSDV病害的潜在靶标分子。

汕头海湾大桥悬索桥主缆施工技术

汕头海湾大桥是我国第一座现代悬索桥．主桥结构体系为三跨１５４ｍ＋４５２ｍ＋１５４ｍ双铰预应力钢筋混凝土加劲箱梁的悬索桥．主缆是悬索桥的主要承重悬索结构．主缆系统的施工主要包括猫道架设、索股架设、索夹吊索安装和防腐等项目．

基因组学研究中一些常用软件的概述

基因组学是以一个物种的全部遗传信息为研究对象,在整体上研究遗传信息的分子组成、组织结构、表达调控和进化等内在机制的基础性学科。基因组学研究中海量数据的存储、管理和检索,以及对这些数据进行挖掘等过程,必须借助于生物信息学的方法。目前,大量成熟的软件广泛地应用在基因组学研究中,它们大都可通过互联网免费访问或索取。本文拟对人类基因组计划中常用的一些软件如序列比对、序列组装、重复序列鉴定和基因预测等软件的原理作一介绍,并结合典型软件加以说明。

空气和空调器样本中SARS冠状病毒的检测

为研究SARS的传播途径,给医务人员防护提供依据。采用8级安德森空气微生物采样器对SARS病房中空气进行采样、收集空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,应用常规反转录套式PCR检测样本中SARS冠状病毒。结果,共检测40份样,检出阳性标本18份,阳性率为45%;其中空气标本36份,阳性15份,2份空调滤网尘土标本均为阳性,2份空调冷凝水标本检出1份阳性。随机挑选PCR阳性标本2份进行病毒分离试验,2份均为阳性。结果显示,检测SARS病房空气标本以及空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,均获得较高的SARS冠状病毒阳性率并分离到存活病毒。表明环境空气中存在活的SARS冠状病毒,推测SARS确有可能通过空气飞沫传播,本结果可供SARS病房的医护人员采取防护措施参考。

汕头海湾大桥悬索桥下部结构施工技术

汕头海湾大桥是我国第一座现代悬索桥．下部结构主要包括索塔和锚啶．本文介绍了该桥下部结构施工的一些关键技术环节，包括主缆锚旋锚固系统的安装，大体积混凝土的温控防裂，主塔基础和承台的海上施工，塔柱滑模施工控制等．

葡萄球菌激酶(Sak)的基因克隆和高效表达工程菌的构建

利用ＰＣＲ技术，从金黄色葡萄球菌中扩增Ｓａｋ基因并将其克隆到ｐＵＣ１９质粒上，确认其碱基序列正确后，再将其亚克隆到ｐＪＷ２质粒并转化大肠杆菌ＤＨ５α获Ｓａｋ高表达工程菌（ＤＨ５α／ｐＪＳ）。试验结果表明，Ｓａｋ可占菌体总蛋白的５０％。

基因工程蛋白下游纯化技术研究进展

基因工程蛋白下游纯化技术研究进展范清林桂向东吴清发魏跃武宋礼华（安徽省生物研究所，合肥２３００３１）自从１９７２年首次发现核酸内切酶，并在同年完成了世界上第一次成功的ＤＮＡ体外重组实验以来，基因工程技术在二十多年的历程中经历了飞速的发展。我国在八十年...

逆转录套式PCR检测粪便样本中的SARS冠状病毒

为了观察SARS冠状病毒在SARS患者粪便中的存在规律,建立了检测SARS冠状病毒RNA的逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法,并应用该方法检测了241份SARS患者粪便样本。部分PCR产物应用测序技术进行验证。RTPCR的灵敏度为1010稀释度的病毒原液(原液为108TCID50/ml)。241份粪便样本的总体检出率为24.1%(58/241),其中发病后的前10d和20d的检出率均为50.0%。随着发病时间的延长,阳性检出率呈下降趋势。应用RTPCR从粪便中检测SARS冠状病毒是可行的,在发病50d以后仍有17.0%左右的阳性检出率,提示SARS恢复期患者具有排毒的可能性,给后续的卫生防疫措施提供了一定的参考数据。

应用套式RT-PCR检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒

建立了套式RT-PCR方法检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒的方法,并检测血液样品257份。同时将RT-PCR与ELISA检测IgG、IgM的方法进行了比较。结果RT-PCR方法的总检出率为72%,IgG总检出率为68%,IgM总检出率为43%。

家蚕(Bombyx mori)全基因组框架图

我们在此报告了家蚕(Bombyx mori)的基因组序列框架图,它覆盖了所有已知家蚕基因的90.9%。我们估计的基因数是18510,超过黑腹果蝇报道的13379个基因。我们将家蚕基因组与果蝇、蚊子、蜘蛛和蝴蝶等进行了比较分析,揭示了它们在基因组成上同时具有相似性和差异性。

人血小板生成素氨基端功能区cDNA的克隆及其定点突变

以Nested－PCR方法从人肝cDNA基因文库中扩增出编码人血小板生成素（hTPO）前153个氨基酸的氨基端功能区cDNA；在扩增中，采用非连续多核甘酸定点突变的方法．将翻译起始的七个氨基酸的原核中不常用的密码子同又突变成使用频率较高的密码子，以便于其在大肠杆菌中表达。序列测定证实了预期的结果。

汕头海湾大桥悬索桥加劲梁施工技术

汕头海湾大桥是我国第一座现代悬索桥，主梁结构体系为三跨（１５４ｍ＋４５２ｍ＋１５４ｍ）双铰预应力钢筋混凝土加劲箱梁，在同类型悬索桥中跨度居世界第一本文介绍加劲梁的施工方法，包括梁段的预制、安装和连接．

重组葡激酶中试工艺研究

采用大肠杆菌表达重组葡萄球菌激酶（Ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ，Ｓａｋ）表达产物占细菌菌体蛋白的５０％左右，通过包涵体抽提、离子交换和凝胶过滤层析，每升发酵液可得到１５ｇ的纯品Ｓａｋ，其理化性质和Ｎ末端１５个氨基酸序列与报道一致。我们成功地进行了连续三批中试产品的研究，三批中试结果相似，产品回收率在７０％左右，纯度在９７％以上。

促血小板生成素的分子生物学研究进展

促血小板生成素的分子生物学研究进展桂向东王兵范清林吴清发姚红谊魏跃武宋礼华（安徽省生物工程中心实验室，合肥２３００３１）早在六七十年代就有人发现在血小板缺乏的动物和人的尿、血浆和血清中含有促巨核细胞增殖和血小板生成的因子，并把该因子叫做血小板生成素［...

传染性非典型肺炎患者不同病程粪便标本中SARS-CoV的分离与鉴定

目的:从粪便标本中分离并鉴定SARS-CoV. 方法:粪便浸出液接种Vero-E6细胞,盲传至出现明显的细胞病变效应(CPE),并能稳定传代.采用电镜法和RT- PCR技术鉴定细胞培养物中的SARS-CoV(本实验均在BSL-3实验室完成). 结果:大部分样本用Vero-E6细胞盲传3代后发现明显的CPE,并能稳定传代.电镜负染检查,出现CPE的细胞可查见病毒颗粒;培养物上清RT-PCR扩增均为阳性.粪便样本直接用RT-PCR检测,阳性率仅为50%,细胞培养的检出率为73%. 结论:采用细胞培养结合RT-PCR技术检测粪便标本SARS- CoV比粪便标本直接RT-PCR的阳性率高.

SARS患者病原学诊断及病毒传播规律研究

目的探讨血清抗SARS-CoV特异性LgG、lgM;外周血单核细胞、漱口液以及粪便SARS-CoV特异性套式RT-PCR检测SARS-Cov RNA在SARS确诊中的意义,并通过研究其系列标本,进一步探讨SARS-Coy特异性IgG、IgM出现规律及病毒传播规律。方法临床诊断SARS患者28例。1周采集2次血清、大便及漱口液系列标本。ELISA测定血清抗SARS-CoV特异性lgG、lgM,套式RT-PCR检测外周血单核细胞、漱口液以及粪便SARS-CoV RNA。结果血清SARS-COV-lgM阳性率为50％(14/28);SARS-COv-lgG阳性率为78.6％(22/28)。早期(-10天)lgG可出现;4周阳性率最高;lgG出现晚(11天-)。2-3周阳性率最高;持续时间短(11天-),4周后大部分患者阴转。PBMC SARS-COVRNA阳性率为32.1％(9/28),病程10-14天阳性率最高;漱口液SARS-COVRNA阳性率为57.1％(16/28),大便SARS-COVRNA阳性率为60.7％(17/28);病程2-3周阳性率最高。85.7％(24/28)可确诊SARS;14.3％不能确诊SARS。结论 SARS诊断必须加入病原学诊断标准。而且必须结合特异性抗体、外周血单核细胞、漱口液以及大便SARS-CoV RNA检测,综合判断。由于SARS患者特异性抗体出现晚等特点。因此,SAPS特异性抗体不能作为早期诊断。SARS患者病程2-3周传染性可能最强,而早期(10天内)传染性可能弱。

诉前船舶扣押与对物诉讼

诉前船舶扣押是在英美法的"对物诉讼"的理论上发展起来的,并为后来的实践不断发展,进而有"玛瑞瓦禁令"。我国的船舶扣押由于《关于诉讼前扣押船舶的具体规定》的颁布,已走上法律化,但仍有待完善。

汕头海湾大桥主缆防腐

本文主要介绍了悬索桥主缆防腐的常规方法及汕头海湾大桥主缆防腐的做法。

RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义

目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性。结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性。粪便SARS-CoVRT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中最长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性。结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视。