肿瘤相关巨噬细胞促进宫颈癌侵袭转移的机制研究

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)对宫颈癌侵袭转移的影响及分子机制。方法免疫组织化学法检测宫颈病变组织TAMs的浸润情况。对人单核巨噬细胞系THP1进行体外诱导分化,使其转化为M2型TAMs。取TAMs上清液刺激宫颈癌细胞SiHa和C33a。划痕法、Transwell法分别检测TAMs对宫颈癌细胞系迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测刺激后宫颈癌细胞上皮间质转化进程及MMP-9的表达。结果 TAMs浸润数目与宫颈病变进展呈正相关。TAMs上清液刺激后,SiHa和C33a细胞出现间质样改变,而且迁移和侵袭能力显著增强(均P<0.5)。TAMs可下调E-Cadherin的表达,上调N-Cadherin、Vimentin及MMP-9的表达。结论 TAMs浸润与宫颈上皮恶性转化和进展密切相关,TAMs可能通过上调MMP-9的表达促进宫颈癌细胞侵袭转移。

宫颈癌细胞分泌外泌体介导上皮-间质转化提高癌前细胞侵袭能力的体外研究

目的:研究宫颈癌细胞Siha分泌的外泌体(Exosomes)能否介导上皮-间质转化(EMT),从而改变癌前细胞Ect1的体外侵袭能力。方法:差速超速离心法分离SihaExo,透射电镜观察形态,Western blot检测标志蛋白表达,共聚焦显微镜观察PKH67染色外泌体的生物学活性。Siha-Exo和PBS分别与Ect1共培养48h后Western blot检测上皮和间质转化标志蛋白的表达,Transwell侵袭实验检测共培养后Ect1体外侵袭能力。结果:Siha-Exo为直径30~100nm的盘状囊泡,特异性表达标志性蛋白CD63和CD81,能够被受体细胞Ect1内吞,具备生物学活性。Western blot结果显示,与PBS组相比,Siha-Exo组下调Ect1细胞中上皮标志蛋白E-Cadherin和β-Catenin的表达,上调间质标志蛋白NCadherin和Vimentin的表达。Transwell侵袭实验显示,与PBS组相比,Siha-Exo组穿透聚碳酯膜的Ect1细胞数明显增多(P=0.01)。结论:Siha-Exo能够介导Ect1发生EMT变化,提高其体外侵袭能力。

THBS2在宫颈癌中的表达及功能研究

目的:探讨THBS2在宫颈癌发生发展中的表达水平变化以及THBS2对细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用。方法:免疫组化和Western blot法检测THBS2在宫颈病变组织及细胞系中的表达水平。选取THBS2表达水平较低的宫颈癌细胞系Si Ha和ME180,通过THBS2过表达质粒上调THBS2水平。选取宫颈上皮永生化细胞株H8和ECT-1,通过转染THBS2的干扰片段siRNA下调THBS2表达。Western blot法检测THBS2表达,CCK8细胞增殖试验、划痕试验和Transwell侵袭试验观察THBS2对细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:THBS2在宫颈癌发生发展过程中表达水平下降(P<0.001);宫颈癌细胞系Si Ha和ME180中THBS2表达水平较HPV永生化宫颈上皮细胞H8和ECT-1明显降低(P<0.05)。上调宫颈癌细胞THBS2表达,Si Ha和ME180细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.005)和侵袭能力(P<0.001)明显被抑制;下调宫颈上皮永生化细胞THBS2表达,H8和ECT-1细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.005)和侵袭能力(P<0.001)显著增强。结论:THBS2在宫颈癌发生发展过程中可能充当"抑癌因子"。

斯钙素-1与肿瘤的研究进展

斯钙素-1(STC1)作为一种参与调节血钙磷代谢平衡的糖蛋白激素,在肿瘤中也具有促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡、促进侵袭和转移、促进血管形成以及适应低氧微环境等重要作用。STC1有希望成为一个新的肿瘤标志物应用于恶性肿瘤的临床诊断、治疗和预后评估等。

肿瘤相关巨噬细胞与高危型人乳头状瘤病毒感染宫颈癌的临床相关性

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞与高危型人乳头状瘤病毒(hr-HPV)相关宫颈癌的发生发展的相关性。方法收集112例宫颈组织临床样本,包含16例正常宫颈组织,55例宫颈上皮内瘤变和41例宫颈鳞状细胞癌,运用免疫组织化学法检测宫颈组织切片中的CD163+巨噬细胞的表达水平,并对免疫组织化学法检测结果与临床数据进行统计学分析。结果免疫组化结果显示:CD163+巨噬细胞的细胞密度随着宫颈组织恶性变的程度增加而增多,且相关性分析示两者呈正相关(P=0.000)。同时,CD163+巨噬细胞的细胞密度在hr-HPV型宫颈癌中明显上调(P<0.05)。临床资料统计结果发现:CD163+巨噬细胞与宫颈癌的淋巴结转移和FIGO分期有显著相关性(P=0.005,P=0.004)。结论 CD163+巨噬细胞的表达与宫颈组织恶性变的程度成正相关,hr-HPV感染与巨噬细胞中CD163的表达水平有显著相关性。CD163+巨噬细胞可作为hr-HPV感染所致宫颈癌发生发展的前瞻性预测因素。

HPV16整合感染人宫颈上皮细胞分泌外泌体介导宫颈成纤维细胞转化体外研究

目的高危人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hr-HPV)整合感染的上皮细胞与宫颈间质微环境可能互为"同谋",在宫颈癌病变过程中发挥重要作用。本研究探讨HPV16整合感染的人宫颈上皮细胞通过分泌外泌体(exosome,Exo)对正常宫颈间质中成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)功能的影响。方法选取2018-01-28-2018-03-20南方医科大学南方医院妇产科收治的患者3例,提取2株人宫颈原代正常NFs并进行鉴定,分别命名为NFs1和NFs2。选取HPV16整合感染的永生化人宫颈上皮细胞ECT-1和S12为实验组,并以无HPV感染的正常人宫颈上皮细胞HCerEpiC为对照组,差速超速离心法提取上皮细胞分泌的Exo,经蛋白定量后,透射电镜和蛋白质印迹法分别检测Exo的形态和标志性蛋白。每组使用10μg Exo进行体外刺激NFs,孵育48h。收集上皮细胞的条件培养基(conditioned medium,CM)及Exo,分别处理NFs,通过细胞骨架染色观察CM/Exo对NFs细胞形态的影响,Transwell迁移实验、划痕实验和细胞计数盒8实验观察Exo对NFs迁移和增殖能力的影响,ELISA实验检测NFs/CM中人转化生长因子β1(transforming growth factor betal 1,TGF-β1)的表达量。结果从正常宫颈组织分离出NFs,并成功提取宫颈上皮细胞来源的Exo。与对照组比较,NFs经实验组处理后,细胞形态多变不均一,肌动蛋白微丝丰富,并伸出丝状伪足,且细胞增殖速度增加,差异有统计学意义(NFs1:tECT-1=2.452,PECT-1=0.0496;tS12=3.185,PS12=0.0190。NFs2:tECT-1=3.295,PECT-1=0.0165;tS12=2.817,PS12=0.0305)。实验组和对照组NFs1穿透聚碳酯膜的细胞数如下:ECT-1/Exo 98.333±3.055,S12/Exo 121.000±5.292,HCerEpiC/Exo 31.333±4.041(F=364.6,P<0.0001);划痕实验显示,NFs1的相对迁移率分别为ECT-1/Exo 3.942±0.065,S12/Exo 3.858±0.199,HCerEpiC/Exo 1.355±0.160(F=279.6,P<0.0001),表明NFs经ECT-1/Exo和S12/Exo处理后迁移能力均显著增强。实验组NFs1分泌TGF-β1的水平ECT-1/Exo(1.195±0.004)ng/mL,S12/Exo(1.248±0.139)ng/mL,亦比对照组(0.286±0.056)ng/mL高(tECT-1=28.08,PECT-1=0.0012;tS12=11.14,PS12=0.0004)。在NFs2重复以上实验,结果一致。结论HPV16整合感染的人宫颈上皮细胞分泌Exo增强NFs的体外迁移和增殖能力,上调NFs分泌TGF-β1的水平,参与NFs向"激活型"NFs的转化。

不同治疗方法对剖宫产瘢痕部位妊娠的临床效果分析及安全性评估

目的探讨3种不同治疗方法对Ⅰ型、Ⅱ型剖宫产术后瘢痕部位妊娠的临床效果及安全性。方法选取2010年1月—2020年4月广州医科大学附属第一医院的96例剖宫产瘢痕部位妊娠患者的临床资料进行回顾性分析,根据不同治疗方法分为3组,A组22例B超引导下清宫术;B组22例双侧子宫动脉栓塞术且术后24~48 h内行清宫术;C组52例甲氨蝶呤+子宫动脉灌注化疗栓塞术且术后24~48 h内行清宫术。比较3组间术后24 hβ-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)下降水平、出血量、住院时间、住院费用情况。结果A组、B组和C组的术后24 hβ-hCG下降水平差异有统计学意义(P<0.05);A组、B组和C组的术中出血量差异无统计学意义(P>0.05)。A组、B组和C组的住院时间差异无统计学意义(P>0.05)。A组住院费用少于B组和C组,差异有显著统计学意义(P<0.01);B组住院费用多于C组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论治疗Ⅰ、Ⅱ型子宫瘢痕部位妊娠的患者优先选择B超引导下清宫术,可兼顾疗效、出血少、费用低、损伤小等优点,具有临床使用价值。